本文選題：CAFs + 癌細(xì)胞�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：從不同組織類型卵巢癌組織中提取癌相關(guān)纖維母細(xì)胞（CAFs），探討CAFs在卵巢癌惡性行為中的可能作用。 方法：1.從不同病理組織類型的卵巢癌組織中提取、分離、培養(yǎng)CAFs與癌細(xì)胞，用免疫細(xì)胞化學(xué)法對(duì)CAFs予以鑒定，并與正常纖維母細(xì)胞（NFs）相區(qū)分；2.利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)卵巢癌原發(fā)病灶與轉(zhuǎn)移病灶之間CAFs密度差異，并用酶聯(lián)免疫反應(yīng)吸附法測(cè)定各腫瘤病灶中分離的相同數(shù)目CAFs所分泌的SDF-1含量；3.采用matrigeltranswell侵襲實(shí)驗(yàn)比較從不同卵巢癌組織中提取的CAFs與癌細(xì)胞的侵襲能力；4.將CAFs分別與三種上皮性卵巢癌細(xì)胞株（SKOV3/OVCAR-3/HEY）行體外間接共同培養(yǎng)，通過transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同卵巢癌組織中提取的CAFs對(duì)三種細(xì)胞株遷移能力的影響；5.利用單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)比較從相同組織中提取的CAFs與癌細(xì)胞經(jīng)順鉑處理后的凋亡程度，檢測(cè)其對(duì)順鉑治療的反應(yīng)性；并用免疫熒光法檢測(cè)順鉑處理前后CAFs中α-SMA的表達(dá)情況。 結(jié)果：1.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示從卵巢癌組織中提取的CAFs呈α-SMA高表達(dá),而正常卵巢組織中提取的正常纖維母細(xì)胞幾乎不表達(dá)α-SMA；2.免疫組化染色提示卵巢癌腸道轉(zhuǎn)移灶中CAFs密度明顯高于原發(fā)病灶、網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移灶，但原發(fā)癌灶與各轉(zhuǎn)移灶中相同數(shù)目的CAFs所分泌的SDF-1量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；3.卵巢癌組織中提取的CAFs，其侵襲力明顯強(qiáng)于同體組織中提取的癌細(xì)胞（P0.01）；4.將CAFs分別與三種細(xì)胞株體外間接共同培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)SKOV3、HEY兩者細(xì)胞株的遷移力明顯增加（P0.01），而OVCAR-3細(xì)胞遷移力增加無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.05）；5.單細(xì)胞凝膠電泳顯示，用順鉑處理同體提取的CAFs與癌細(xì)胞后，癌細(xì)胞的凋亡比例明顯強(qiáng)于CAFs（P0.01），說明CAFs對(duì)順鉑化療不敏感；并且經(jīng)順鉑處理后，CAFs的α-SMA表達(dá)增強(qiáng)（P0.01）。 結(jié)論：卵巢癌原發(fā)病灶與轉(zhuǎn)移病灶中CAFs的密度存在差異，提示CAFs的表達(dá)可能參與了卵巢癌遠(yuǎn)處器官特異性轉(zhuǎn)移，這種轉(zhuǎn)移特異性可能與相應(yīng)部位CAFs的數(shù)目有關(guān)；CAFs能促進(jìn)上皮性卵巢癌細(xì)胞株的遷移運(yùn)動(dòng)，且表現(xiàn)出比癌細(xì)胞更強(qiáng)的惡性浸潤(rùn)能力；與癌細(xì)胞相比較，CAFs對(duì)順鉑化療不敏感，且經(jīng)順鉑處理后其α-SMA表達(dá)反而升高，這一結(jié)果提示CAFs可能參與了卵巢癌耐藥或化療后復(fù)發(fā),但機(jī)制有待進(jìn)一步探討。
[Abstract]:Objective: to study the possible role of CAFs in malignant behavior of ovarian cancer by extracting cancer associated fibroblasts from different types of ovarian cancer.Method 1: 1.CAFs and cancer cells were isolated and cultured from ovarian cancer tissues of different pathological types. CAFs was identified by immunocytochemistry and differentiated from normal fibroblasts.Immunohistochemical method was used to detect the difference of CAFs density between primary focus and metastatic focus of ovarian cancer. The SDF-1 content of the same number of CAFs isolated from each tumor was determined by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa).Matrigeltranswell invasion assay was used to compare the invasiveness of CAFs extracted from different ovarian cancer tissues with that of cancer cells.CAFs was cultured indirectly with three epithelial ovarian cancer cell lines (SKOV3 / OVCAR-3 / HEY) in vitro. The effect of CAFs extracted from different ovarian cancer tissues on the migration ability of the three cell lines was detected by transwell migration assay.The degree of apoptosis of CAFs extracted from the same tissues was compared with that of cancer cells treated with cisplatin by single cell gel electrophoresis, and the reactivity to cisplatin treatment was detected, and the expression of 偽 -SMA in CAFs before and after Cisplatin treatment was detected by immunofluorescence method.The result is 1: 1.The results of immunocytochemistry showed that the CAFs extracted from ovarian cancer showed high expression of 偽 -SMA, while the normal fibroblasts from normal ovarian tissues almost did not express 偽 -SMA2.Immunohistochemical staining showed that the density of CAFs in the metastatic focus of ovarian cancer was significantly higher than that in the primary tumor and omentum metastasis, but there was no significant difference in the amount of SDF-1 secreted by the same number of CAFs between the primary tumor and the metastatic foci.The invasiveness of CAFs extracted from ovarian cancer tissues was significantly stronger than that of cancer cells extracted from the same tissues.Indirect co-culture of CAFs and three cell lines in vitro showed that the migration ability of SKOV3 and HEY cell lines was significantly increased, while that of OVCAR-3 cells was not significantly increased.Single cell gel electrophoresis showed that the apoptosis rate of CAFs extracted by cisplatin was significantly higher than that of cancer cells, indicating that CAFs was insensitive to cisplatin chemotherapy, and the 偽 -SMA expression of Cisplatin was enhanced after treatment with Cisplatin.Conclusion: there are differences in the density of CAFs between primary and metastatic lesions of ovarian cancer, suggesting that the expression of CAFs may be involved in the distant organ specific metastasis of ovarian cancer.This metastasis specificity may be related to the number of CAFs in the corresponding site, which can promote the migration of epithelial ovarian cancer cell lines and exhibit a stronger ability of malignant invasion than that of cancer cells, and is not sensitive to cisplatin chemotherapy compared with cancer cells.The expression of 偽 -SMA increased after cisplatin treatment, which suggests that CAFs may be involved in the relapse of ovarian cancer after chemotherapy or drug resistance, but the mechanism needs further study.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.31

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1757511