發(fā)布時間：2018-04-09 09:33

  本文選題：卵巢癌　切入點：IL-17D　出處：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 將轉染IL-17D基因的人上皮性卵巢癌細胞株種植于裸鼠皮下，觀測IL-17D對裸鼠皮下移植瘤生長的影響；通過檢測裸鼠體內MHCI類鏈相關蛋白A (MHC class I-related protein A，MICA)分子表達的變化，初步探討IL-17D促瘤作用的相關因素，為研究上皮性卵巢癌的免疫逃逸、耐藥及診療提供新的線索。 方法： 1體外培養(yǎng)轉染IL-17D的人上皮性卵巢癌細胞SKOV3細胞（SKOV3/17D）、OVCAR3細胞（OVCAR3/17D），各自對應的空質粒轉染的SKOV3/neo細胞、OVCAR3/neo細胞（Fig.1），37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)傳代培養(yǎng)并凍存。 2建立32只人上皮性卵巢癌細胞株裸鼠皮下移植瘤膜型，隨機分成4組：（1）SKOV3/17D組：將轉染IL-17D的SKOV3細胞株種植于裸鼠皮下，（2）SKOV3/neo組：將轉染空質粒的SKOV3細胞株等量種植于裸鼠皮下，（3）OVCAR3/17D組：將轉染IL-17D的OVCAR3細胞株種植于裸鼠皮下，（4）OVCAR3/neo組：將轉染空質粒的OVCAR3細胞株等量種植于裸鼠皮下。 3觀察裸鼠的成瘤率、腫瘤生長情況，用游標卡尺定期測量裸鼠皮下移植瘤的大小，繪制腫瘤生長曲線。 4采用qRT-PCR法檢測各組裸鼠皮下移植瘤組織中IL-17D在RNA水平的表達量；ELISA法檢測各組荷瘤裸鼠血清中MICA的可溶性形式（soluble MICA，sMICA）的表達水平；流式細胞術（FCM）檢測腫瘤組織中MICA的膜性形式（membrane MICA，mMICA）表達水平。應用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件分析實驗數(shù)據，以P0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。 結果： 1皮下接種4種細胞后，裸鼠成瘤率均為100%。接種SKOV3/17D細胞的裸鼠皮下移植瘤生長速度明顯快于SKOV3/neo組，OVCAR3/17D組明顯快于OVCAR3/neo組（P0.01）。 2各組裸鼠皮下移植瘤組織中均有IL-17D基因的表達，SKOV3/17D組IL-17D的表達明顯高于SKOV3/neo組， OVCAR3/17D組高于OVCAR3/neo組（P0.01）。 3流式細胞術顯示，裸鼠皮下移植瘤組織中mMICA在各組中均表達，，其含量以平均熒光強度(Mean Fluorescence Intensity, MFI)表示（X±s）： 3.1SKOV3/17D組中MICA蛋白的MFI值為203.02±3.03，SKOV3/neo組為285.90±1.76，可見SKOV3/17D組MICA蛋白的表達量明顯低于SKOV3/neo組，差別具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。 3.2OVCAR3/17D組中MICA蛋白的MFI值為177.05±3.69，OVCAR3/neo組為265.12±2.29，可見OVCAR3/17D組MICA蛋白的表達量明顯低于OVCAR3/neo組，差別具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。 4酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測得數(shù)據用均數(shù)士標準差(X±s)表示： 4.1sMICA在SKOV3/17D和SKOV3/neo組裸鼠血清中的濃度分別為(28.85±0.36) ng/ml和(23.58±0.50)ng/ml，sMICA在SKOV3/17D組裸鼠血清中濃度高于SKOV3/neo組（P0.01）。 4.2sMICA在OVCAR3/17D和OVCAR3/neo組裸鼠血清中的濃度分別為(34.05±0.42) ng/ml和(27.24±0.51) ng/ml, sMICA在OVCAR3/17D組裸鼠血清中濃度高于OVCAR3/neo組（P0.01）。 結論：IL-17D基因明顯促進人上皮性卵巢癌細胞裸鼠皮下移植瘤的生長，這種促瘤機制與NKG2D-MICA免疫殺傷通路有關， IL-17D可下調腫瘤細胞表面的活化性配體MICA的表達，增加sMICA釋放，進而降低NK細胞對腫瘤細胞的殺傷活性，使腫瘤細胞逃脫免疫監(jiān)視，獲得免疫逃逸，此為IL-17D在促進上皮性卵巢癌進展中扮演的重要角色。
[Abstract]:Objective:
The human ovarian cancer cell lines transfected with IL-17D gene implanted in nude mice subcutaneously, observing the effects of IL-17D on the growth of nude mice; nude mice by detecting MHCI chain related protein A (MHC class I-related protein A, MICA) changes the expression of related factors for IL-17D, investigate the tumour promoting effect, escape the immune Research of epithelial ovarian cancer, drug resistance and treatment provide new clues.
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本文編號：1725846