本文選題：芳香烴受體　切入點：子宮內(nèi)膜癌　出處：《大連醫(yī)科大學》2014年博士論文

【摘要】：宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma）別名為子宮體部癌，該腫瘤具備較強的侵犯肌層組織和周圍擴散的能力，是源發(fā)自子宮內(nèi)膜上皮組織的惡性腫瘤，是婦女生殖系統(tǒng)最為多見的惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率有上升趨勢。常規(guī)治療方法除了手術、放化療外，缺少新的治療手段，生存率和治療有效率在很長時間內(nèi)均無明顯提高。目前，新型的腫瘤靶向治療技術有望解決這一難題。 近年來，腫瘤靶向治療成為國際癌癥研究的熱點與難點，該技術代表著未來癌癥治療領域新的發(fā)展方向。腫瘤分子靶向治療是選擇具有惡性腫瘤細胞特異性的分子靶標，也就是腫瘤細胞本身特有的受體、激酶和分子結構等等特異性作用的靶向位點，利用作用于靶標的各種藥物直接或間接阻斷腫瘤細胞的信號通路，從而有效抑制細胞的生長增殖或者促進腫瘤細胞的凋亡，該方法不會破壞和影響正常組織細胞的功能與結構，對人體更為安全、有效，副作用與毒性反應均不明顯，有利于在腫瘤治療中的實際應用。新型靶向治療證實均對一些惡性腫瘤有明顯的療效，但是目前針對子宮內(nèi)膜癌還沒有有效的靶向治療目標和方向。 芳香烴受體（Aryl hydrocarbon receptor，AhR）是一種配體激活性的轉錄因子，屬于PER-ARNT-SIM (PAS)家族。沒有與配體結合的芳香烴受體AhR在細胞質中以多聚體的形式存在，與配體結合以后，AhR會轉移到細胞核內(nèi)，隨即與芳香烴受體的核轉運蛋白（Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator，ARNT）結合，形成具有功能活性的轉錄因子復合物。特異性增強子序列和復合物結合，特異性增強子臨近二惡英反應元件（Dioxin responsive elements，DREs）的靶向啟動子，可以調控細胞色素P4501A1（Cytochrome P4501A1，CYP1A1）以及其他的異型性靶基因的表達，從而化學污染物的不良影響。 本課題通過組織芯片技術檢測AhR在子宮內(nèi)膜癌中的表達與分布規(guī)律，掌握AhR表達與病人病理信息的關系。在此基礎上建立子宮內(nèi)膜癌細胞系（Ishikawa細胞和EEC-1細胞）離體模型，深入研究并闡釋AhR受體在子宮內(nèi)膜癌細胞增殖與侵襲中的作用機制，為子宮內(nèi)膜癌的新型靶向治療提供新的思路和理論支持，具有重要的科研價值和社會意義。 本課題研究分三個部分：（1）AhR在子宮內(nèi)膜癌組織中表達分布及相關臨床意義；（2）AhR對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖和侵襲能力的影響研究；（3）AhR配體3-MC對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖和侵襲能力的影響。 1. AhR在子宮內(nèi)膜癌組織中表達分布及相關臨床意義 本部分收集2008年5月至2011年10月在大連市多家醫(yī)院行子宮切除或診斷性刮宮的子宮內(nèi)膜組織標本200例。應用組織芯片技術，檢測AhR在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜增生組織、子宮內(nèi)膜癌組織中的表達與分布規(guī)律，并對AhR與病理信息間的關系進行分析。同時，應用RT-PCR法和Western blot法檢測AhRmRNA和蛋白在人子宮內(nèi)膜癌和癌旁正常組織中的表達情況，探討AhR蛋白與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的關系，及其在臨床中的應用意義。結果顯示：AhR在正常增生子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜單純及復雜性增生組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率分別為4％、12％、20％和52％。從正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜增生組織至子宮內(nèi)膜癌組織，AhR蛋白的陽性表達率呈顯著下降的趨勢，，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。在子宮內(nèi)膜癌組織中，AhR的表達強度與其手術—病理分期、組織學分級、淋巴結轉移相關（P0.05），而與其病理學分型、肌層浸潤深度無明顯相關性（P0.05）。經(jīng)RT-PCR及Western blot法檢測，AhR mRNA和蛋白在子宮內(nèi)膜癌和癌旁正常組織中均有表達。AhR蛋白的分子量大小約95kDa，經(jīng)與內(nèi)參GAPDH校準后，AhR蛋白在腫瘤組織中的表達量約高于正常組織中AhR蛋白表達量的2倍（P 0.05）。因此，AhR在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達，可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，具有一定的臨床意義。 2. AhR對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖和侵襲能力的影響研究 本實驗部分將在子宮內(nèi)膜癌細胞系（Ishikawa細胞和ECC-1細胞）中，檢測AhR基因和蛋白的表達情況，同時應用RNA干擾技術、MTT法、Tanswell等方法，明確AhR對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖和侵襲能力的影響。結果顯示：AhR在Ishikawa和ECC-1兩種子宮內(nèi)膜癌細胞系中均有表達，為一條95kDa的蛋白條帶。經(jīng)與GAPDH標準化校正后，AhR在兩種細胞系中的表達量與在第一部分子宮內(nèi)膜癌組織中表達相當（p＞0.05），高出正常組織2倍（p 0.05）。分別應用特異性AhR siRNA和混雜siRNA作用于Ishikawa和ECC-1細胞后，AhR siRNA組AhR蛋白表達在24h、48h和72h都降低，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。應用MTT法檢測AhR siRNA對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的影響發(fā)現(xiàn)，在Ishikawa和ECC-1細胞中，分別經(jīng)特異性AhR siRNA和混雜siRNA作用后，兩種腫瘤細胞的增殖程度相一致，并無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）。應用Transwell法檢測AhR siRNA對子宮內(nèi)膜癌細胞侵襲的影響發(fā)現(xiàn)，經(jīng)特異性AhR siRNA和混雜siRNA作用后，兩種腫瘤細胞的侵襲程度相一致，并無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）。因此，無配體激活且AhR基因敲除后，子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖和侵襲能力未受到明顯影響。 3. AhR配體3-MC對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖和侵襲能力的影響。 本實驗部分將檢測AhR配體3-MC對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖和侵襲的影響，同時采用特異性siRNA將AhR基因敲除驗證腫瘤細胞增殖與侵襲情況是否與AhR通路相關。結果顯示：分別經(jīng)不同劑量的3-MC處理后，Ishikawa和ECC-1兩種腫瘤細胞的呈現(xiàn)出不同程度的增殖抑制現(xiàn)象，增殖抑制程度與3-MC劑量呈正相關關系（P＜0.05）。分別經(jīng)特異性AhR siRNA和混雜siRNA作用后，3-MC抑制的腫瘤細胞增殖過程被阻斷，各種腫瘤細胞增殖無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）。3-MC處理后的兩種腫瘤細胞的侵襲能力未發(fā)生明顯變化，并無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）。因此，3-MC抑制EC細胞增殖是由AhR通路介導的。
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【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.33

【參考文獻】

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本文編號：1711687