本文選題：芳香烴受體　切入點(diǎn)：子宮內(nèi)膜癌　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma）別名為子宮體部癌，該腫瘤具備較強(qiáng)的侵犯肌層組織和周圍擴(kuò)散的能力，是源發(fā)自子宮內(nèi)膜上皮組織的惡性腫瘤，是婦女生殖系統(tǒng)最為多見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)發(fā)病率有上升趨勢(shì)。常規(guī)治療方法除了手術(shù)、放化療外，缺少新的治療手段，生存率和治療有效率在很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)均無(wú)明顯提高。目前，新型的腫瘤靶向治療技術(shù)有望解決這一難題。 近年來(lái)，腫瘤靶向治療成為國(guó)際癌癥研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn)，該技術(shù)代表著未來(lái)癌癥治療領(lǐng)域新的發(fā)展方向。腫瘤分子靶向治療是選擇具有惡性腫瘤細(xì)胞特異性的分子靶標(biāo)，也就是腫瘤細(xì)胞本身特有的受體、激酶和分子結(jié)構(gòu)等等特異性作用的靶向位點(diǎn)，利用作用于靶標(biāo)的各種藥物直接或間接阻斷腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路，從而有效抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖或者促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，該方法不會(huì)破壞和影響正常組織細(xì)胞的功能與結(jié)構(gòu)，對(duì)人體更為安全、有效，副作用與毒性反應(yīng)均不明顯，有利于在腫瘤治療中的實(shí)際應(yīng)用。新型靶向治療證實(shí)均對(duì)一些惡性腫瘤有明顯的療效，但是目前針對(duì)子宮內(nèi)膜癌還沒(méi)有有效的靶向治療目標(biāo)和方向。 芳香烴受體（Aryl hydrocarbon receptor，AhR）是一種配體激活性的轉(zhuǎn)錄因子，屬于PER-ARNT-SIM (PAS)家族。沒(méi)有與配體結(jié)合的芳香烴受體AhR在細(xì)胞質(zhì)中以多聚體的形式存在，與配體結(jié)合以后，AhR會(huì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，隨即與芳香烴受體的核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator，ARNT）結(jié)合，形成具有功能活性的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物。特異性增強(qiáng)子序列和復(fù)合物結(jié)合，特異性增強(qiáng)子臨近二惡英反應(yīng)元件（Dioxin responsive elements，DREs）的靶向啟動(dòng)子，可以調(diào)控細(xì)胞色素P4501A1（Cytochrome P4501A1，CYP1A1）以及其他的異型性靶基因的表達(dá)，從而化學(xué)污染物的不良影響。 本課題通過(guò)組織芯片技術(shù)檢測(cè)AhR在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與分布規(guī)律，掌握AhR表達(dá)與病人病理信息的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上建立子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系（Ishikawa細(xì)胞和EEC-1細(xì)胞）離體模型，深入研究并闡釋AhR受體在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖與侵襲中的作用機(jī)制，為子宮內(nèi)膜癌的新型靶向治療提供新的思路和理論支持，具有重要的科研價(jià)值和社會(huì)意義。 本課題研究分三個(gè)部分：（1）AhR在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)分布及相關(guān)臨床意義；（2）AhR對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響研究；（3）AhR配體3-MC對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響。 1. AhR在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)分布及相關(guān)臨床意義 本部分收集2008年5月至2011年10月在大連市多家醫(yī)院行子宮切除或診斷性刮宮的子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本200例。應(yīng)用組織芯片技術(shù)，檢測(cè)AhR在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜增生組織、子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與分布規(guī)律，并對(duì)AhR與病理信息間的關(guān)系進(jìn)行分析。同時(shí)，應(yīng)用RT-PCR法和Western blot法檢測(cè)AhRmRNA和蛋白在人子宮內(nèi)膜癌和癌旁正常組織中的表達(dá)情況，探討AhR蛋白與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，及其在臨床中的應(yīng)用意義。結(jié)果顯示：AhR在正常增生子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜單純及復(fù)雜性增生組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為4％、12％、20％和52％。從正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜增生組織至子宮內(nèi)膜癌組織，AhR蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率呈顯著下降的趨勢(shì)，，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。在子宮內(nèi)膜癌組織中，AhR的表達(dá)強(qiáng)度與其手術(shù)—病理分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P0.05），而與其病理學(xué)分型、肌層浸潤(rùn)深度無(wú)明顯相關(guān)性（P0.05）。經(jīng)RT-PCR及Western blot法檢測(cè)，AhR mRNA和蛋白在子宮內(nèi)膜癌和癌旁正常組織中均有表達(dá)。AhR蛋白的分子量大小約95kDa，經(jīng)與內(nèi)參GAPDH校準(zhǔn)后，AhR蛋白在腫瘤組織中的表達(dá)量約高于正常組織中AhR蛋白表達(dá)量的2倍（P 0.05）。因此，AhR在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá)，可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，具有一定的臨床意義。 2. AhR對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響研究 本實(shí)驗(yàn)部分將在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系（Ishikawa細(xì)胞和ECC-1細(xì)胞）中，檢測(cè)AhR基因和蛋白的表達(dá)情況，同時(shí)應(yīng)用RNA干擾技術(shù)、MTT法、Tanswell等方法，明確AhR對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響。結(jié)果顯示：AhR在Ishikawa和ECC-1兩種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，為一條95kDa的蛋白條帶。經(jīng)與GAPDH標(biāo)準(zhǔn)化校正后，AhR在兩種細(xì)胞系中的表達(dá)量與在第一部分子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)相當(dāng)（p＞0.05），高出正常組織2倍（p 0.05）。分別應(yīng)用特異性AhR siRNA和混雜siRNA作用于Ishikawa和ECC-1細(xì)胞后，AhR siRNA組AhR蛋白表達(dá)在24h、48h和72h都降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。應(yīng)用MTT法檢測(cè)AhR siRNA對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的影響發(fā)現(xiàn)，在Ishikawa和ECC-1細(xì)胞中，分別經(jīng)特異性AhR siRNA和混雜siRNA作用后，兩種腫瘤細(xì)胞的增殖程度相一致，并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。應(yīng)用Transwell法檢測(cè)AhR siRNA對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲的影響發(fā)現(xiàn)，經(jīng)特異性AhR siRNA和混雜siRNA作用后，兩種腫瘤細(xì)胞的侵襲程度相一致，并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。因此，無(wú)配體激活且AhR基因敲除后，子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力未受到明顯影響。 3. AhR配體3-MC對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響。 本實(shí)驗(yàn)部分將檢測(cè)AhR配體3-MC對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響，同時(shí)采用特異性siRNA將AhR基因敲除驗(yàn)證腫瘤細(xì)胞增殖與侵襲情況是否與AhR通路相關(guān)。結(jié)果顯示：分別經(jīng)不同劑量的3-MC處理后，Ishikawa和ECC-1兩種腫瘤細(xì)胞的呈現(xiàn)出不同程度的增殖抑制現(xiàn)象，增殖抑制程度與3-MC劑量呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。分別經(jīng)特異性AhR siRNA和混雜siRNA作用后，3-MC抑制的腫瘤細(xì)胞增殖過(guò)程被阻斷，各種腫瘤細(xì)胞增殖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。3-MC處理后的兩種腫瘤細(xì)胞的侵襲能力未發(fā)生明顯變化，并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。因此，3-MC抑制EC細(xì)胞增殖是由AhR通路介導(dǎo)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1711687