本文選題：子宮內(nèi)膜異位癥　切入點(diǎn)：疼痛　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EMs)，簡稱內(nèi)異癥，是婦科常見病和多發(fā)病。臨床多以痛經(jīng)、不孕、盆腔痛為主癥。內(nèi)異癥疼痛嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。已知前列腺素與婦科疼痛的關(guān)系密切，近年的研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥疼痛的發(fā)生與神經(jīng)纖維增生密切相關(guān)。本研究通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型分析神經(jīng)標(biāo)記物蛋白基因產(chǎn)物PGP9.5(Protein gene Product9.5,PGP9.5)、神經(jīng)生長因子NGF(never growth factor,NGF)、前列腺素E2(ProstaglandinE2，PGE2)在內(nèi)異癥子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，以探討內(nèi)異癥疼痛發(fā)生的部分機(jī)制；并對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠采用補(bǔ)腎溫陽化瘀方進(jìn)行治療，探討補(bǔ)腎溫陽化瘀法治療內(nèi)異癥疼痛的作用機(jī)制。 方法：選用健康清潔級(jí)6~8周齡近交系BALB/c小鼠80只，體重20±2g，術(shù)前兩天以補(bǔ)佳樂0.5mg/kg灌胃，使手術(shù)時(shí)小鼠處于統(tǒng)一動(dòng)情期(陰道涂片為大量無核角化細(xì)胞)。隨機(jī)取65只小鼠參考王艷萍方法復(fù)制內(nèi)異癥模型，另外15只作為假手術(shù)組。將成功復(fù)制的內(nèi)異癥模型的小鼠60只，隨機(jī)分為4組:模型組；補(bǔ)腎溫陽化瘀方高劑量組(61.67g/kg，相當(dāng)于臨床用量20倍)，簡稱（“高劑量組”）；中藥低劑量組(15.42g/kg，相當(dāng)于臨床用量5倍)，簡稱（“低劑量組”）；孕三烯酮組(0.42mg/kg，相當(dāng)于臨床用量10倍)。假手術(shù)組正常清潔飼養(yǎng)。 術(shù)后1~12天采用補(bǔ)佳樂(0.5mg/kg)聯(lián)合縮宮素(2U/只)建立痛經(jīng)模型，同時(shí)給藥。給藥方案如下：假手術(shù)組給予純凈水灌胃1ml/100g，每日2次；模型組：上午純凈水灌胃1ml/100g，下午灌胃補(bǔ)佳樂；高劑量組：上午灌胃6.17g/ml濃縮液，下午灌胃補(bǔ)佳樂；低劑量組：上午灌胃1.54g/ml濃縮液，下午灌胃補(bǔ)佳樂；孕三烯酮組：每周2次上午灌胃孕三烯酮混懸液，其余時(shí)間上午給予純凈水灌胃，每天下午灌胃補(bǔ)佳樂；第12天末次給補(bǔ)佳樂后1小時(shí)，腹腔注射縮宮素2U/只(0.2ml)，誘發(fā)扭體反應(yīng)，假手術(shù)組腹腔注射生理鹽水0.2ml/只。扭體觀察半小時(shí)，結(jié)束后斷頭處死，無菌操作剖腹取出異位內(nèi)膜組織、在位子宮內(nèi)膜組織，假手術(shù)組取子宮內(nèi)膜組織，部分組織用4%多聚甲醛固定用于免疫組織化學(xué)染色，部分組織立即置于液氮中后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱用于Western-blotting及Real time PCR檢測，部分組織勻漿取上清液用于酶聯(lián)免疫法檢測。 結(jié)果: 1扭體反應(yīng) 除假手術(shù)組外，各組均發(fā)生扭體反應(yīng)，扭體發(fā)生率100%。高劑量組、低劑量組、孕三烯酮組扭體潛伏期明顯延長，與模型組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01)，扭體次數(shù)顯著減少，與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05，P0.01，P0.01)，各治療組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。 2PGP9.5表達(dá) 2.1免疫組化法檢測PGP9.5蛋白表達(dá) 異位內(nèi)膜表達(dá)：PGP9.5蛋白陽性主要表達(dá)于異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中。模型組PGP9.5蛋白表達(dá)高于各治療組（均P0.05）。PGP9.5蛋白在各治療組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 在位子宮內(nèi)膜：PGP9.5蛋白陽性主要表達(dá)于在位內(nèi)膜腺體細(xì)胞的胞漿中。模型組PGP9.5蛋白表達(dá)高于假手術(shù)組（P0.01）；PGP9.5蛋白在高劑量組、低劑量組表達(dá)高于假手術(shù)組(P0.05)；在各治療組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 2.2Western-blotting檢測PGP9.5蛋白表達(dá) 異位內(nèi)膜表達(dá)：模型組PGP9.5蛋白表達(dá)高于各治療組（均P0.01）。PGP9.5蛋白在各治療組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 在位子宮內(nèi)膜：模型組PGP9.5蛋白表達(dá)高于假手術(shù)組（P0.01）；PGP9.5蛋白在高劑量組、低劑量組的表達(dá)高于假手術(shù)組(P0.05)；PGP9.5蛋白在各治療組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 2.3Real time PCR檢測PGP9.5mRNA的表達(dá) 異位內(nèi)膜表達(dá)：模型組PGP9.5mRNA的表達(dá)高于各治療組（均P0.01）。PGP9.5mRNA在高劑量組表達(dá)低于孕三烯酮組（P0.05）；低劑量組與孕三烯酮組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；高劑量組低于低劑量組（P0.05）。 在位子宮內(nèi)膜：模型組PGP9.5mRNA表達(dá)高于假手術(shù)組（P0.01）。PGP9.5mRNA在高劑量組、低劑量組表達(dá)高于假手術(shù)組(P0.05)；PGP9.5mRNA在高劑量組的表達(dá)低于孕三烯酮組(P0.01)；低劑量組與孕三烯酮組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；高劑量組低于低劑量組(P0.01)。 3NGF的表達(dá) 3.1免疫組化法檢測NGF蛋白表達(dá)（均P0.01） 異位內(nèi)膜：NGF蛋白陽性主要表達(dá)于異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中。模型組NGF蛋白表達(dá)高于各治療組（均P0.01）；NGF蛋白在各治療組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 在位子宮內(nèi)膜：NGF蛋白陽性主要表達(dá)于在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中。模型組NGF蛋白表達(dá)高于假手術(shù)組（P0.01）；NGF蛋白在高劑量組、低劑量組表達(dá)高于假手術(shù)組(P0.05)；NGF蛋白在各治療組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 3.2Western-blotting檢測NGF的表達(dá) 異位內(nèi)膜：模型組NGF蛋白表達(dá)高于各治療組（均P0.01）；NGF蛋白在各治療組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 在位子宮內(nèi)膜：模型組NGF蛋白表達(dá)高于假手術(shù)組（P0.01）；高劑量組、低劑量組與假手術(shù)組表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；NGF蛋白在各治療組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 3.3Real time PCR檢測NGF的表達(dá) 異位內(nèi)膜表達(dá)：模型組NGF mRNA表達(dá)高于各治療組（均P0.01）。NGF mRNA在高劑量組表達(dá)低于孕三烯酮組（P0.01）；低劑量組低于孕三烯酮組（P0.05）；高劑量組低于低劑量組（P0.05）。 在位子宮內(nèi)膜：模型組NGF mRNA的表達(dá)高于假手術(shù)組（P0.01）。NGF mRNA在高劑量組表達(dá)與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；高劑量組低于孕三烯酮組(P0.01)；低劑量組與孕三烯酮組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；高劑量組低于低劑量組(P0.01)。 4酶聯(lián)免疫法檢測組織勻漿中PGE2的水平 異位內(nèi)膜:模型組PGE2水平與各治療組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.01)。高劑量組PGE2水平低于孕三烯酮組(P0.05)；低劑量組與孕三烯酮組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；高劑量組PGE2水平低于低劑量組(P0.01)。 在位子宮內(nèi)膜:模型組PGE2水平高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。高劑量組PGE2水平高于假手術(shù)組（P0.05）；高劑量組低于孕三烯酮組（P0.05）；低劑量組與孕三烯酮組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；高劑量組低于低劑量組（P0.01）。5PGE2、PGP9.5、NGF的相關(guān)性： 異位內(nèi)膜及在位子宮內(nèi)膜PGE2、PGP9.5、NGF作直線相關(guān)性檢驗(yàn)。PGE2與PGP9.5(r=0.755,P=0.0005;r=0.456,P=0.044)；PGE2與NGF（r=0.747,P=0.0025;r=0.336,P=0.11）。NGF與PGP9.5(r=0.906,P0.01;r=0.964,P0.01),呈顯著正相關(guān)。 結(jié)論： 1行為學(xué)、大體標(biāo)本、病理學(xué)三方面證實(shí)了子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)模型的建立成功，可用于臨床疾病的研究。 2NGF、PGP9.5在內(nèi)異癥痛經(jīng)模型的在位子宮內(nèi)膜、異位內(nèi)膜表達(dá)升高，且二者呈正相關(guān)關(guān)系。提示NGF促進(jìn)神經(jīng)纖維生長，局部神經(jīng)纖維增生，參與內(nèi)異癥疼痛的發(fā)生。 3PGE2在內(nèi)異癥痛經(jīng)模型的在位子宮內(nèi)膜、異位內(nèi)膜組織中表達(dá)升高，PGE2與NGF、PGP9.5表達(dá)在異位內(nèi)膜呈正相關(guān)。提示PGE2可能促進(jìn)異位內(nèi)膜中NGF表達(dá)，進(jìn)而與局部神經(jīng)增生有關(guān)。 4補(bǔ)腎溫陽化瘀方可縮小移植內(nèi)膜組織體積并具有鎮(zhèn)痛作用。同時(shí)補(bǔ)腎溫陽化瘀方可以降調(diào)內(nèi)異癥異位內(nèi)膜及在位子宮內(nèi)膜中升高的NGF、PGP9.5、PGE2表達(dá)，提示該法可通過調(diào)節(jié)病灶局部及在位子宮內(nèi)膜NGF、PGP9.5、PGE2水平，，起到治療內(nèi)異癥疼痛的作用。該作用效果同孕三烯酮。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R711.71

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1697348