發(fā)布時間：2018-03-31 11:04

  本文選題：滋養(yǎng)層細胞　切入點：miR-133a　出處：《第四軍醫(yī)大學》2015年碩士論文

【摘要】：反復(fù)自然流產(chǎn)(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)是指在妊娠前20周連續(xù)發(fā)生三次及三次以上自然流產(chǎn)的現(xiàn)象,是導(dǎo)致不孕不育高發(fā)的重要原因之一,其發(fā)病率占不孕不育人群的10%-15%,但由于其病因復(fù)雜且致病機理遠未闡明,目前,在世界范圍內(nèi)尚無理想的治療藥物或方法。因此,如何預(yù)防和治療RSA,已經(jīng)成為生殖醫(yī)學領(lǐng)域關(guān)注的熱點問題之一。胚胎種植學說認為,胚胎絨毛外滋養(yǎng)層細胞對子宮內(nèi)膜進行正常的侵襲,是保證子宮螺旋動脈的重塑和妊娠順利進行的重要基礎(chǔ)。一旦絨毛外滋養(yǎng)層細胞的遷徙及侵襲功能出現(xiàn)異常(滋養(yǎng)層細胞侵襲到母體組織不夠深入),即臨床上提示的胎盤著床過淺,便會造成血管重塑不完全,進而導(dǎo)致胎盤血液灌注出現(xiàn)障礙,從而引發(fā)先兆子癇、胎兒生長受限等妊娠相關(guān)疾病,更為甚者,便會造成流產(chǎn)或反復(fù)流產(chǎn)的發(fā)生,由此可見,絨毛外滋養(yǎng)層細胞的侵襲能力與反復(fù)流產(chǎn)的發(fā)生密切相關(guān)。近年來,miRNAs作為一種參與細胞生物學功能調(diào)控的新型因子和新型的臨床治療藥物而備受關(guān)注。大量研究顯示,miRNAs在調(diào)控胎盤的發(fā)育及功能方面起到重要作用,如,miRNAs參與調(diào)控胎盤的免疫耐受、侵襲、血管發(fā)生等。而且,課題組前期研究發(fā)現(xiàn)miR-133a在RSA患者流產(chǎn)絨毛中表達量顯著上調(diào)。鑒于絨毛外滋養(yǎng)細胞侵襲功能在妊娠建立過程中的重要性,因此,本研究擬在前期研究基礎(chǔ)上,深入探討miR-133a是否可以調(diào)控滋養(yǎng)層細胞的侵襲行為以及可能的分子機制,從而為RSA的臨床干預(yù)提供理論依據(jù)并為治療提供潛在的靶點,具有重要的臨床和社會意義。本研究結(jié)果主要分為如下三個部分:第一部分:miR-133a對HTR8-SVneo細胞粘附和侵襲功能的影響。根據(jù)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染因素分為三組,即對照組(轉(zhuǎn)染無關(guān)序列)、過表達組(轉(zhuǎn)染mimics)、抑制組(轉(zhuǎn)染inhibitor),借助實時熒光定量PCR的方法檢測各組細胞化學轉(zhuǎn)染后的miR-133a的表達,并運用MTT方法以檢測細胞粘附能力的變化,同時運用Transwell實驗觀察HTR8-SVneo細胞的侵襲功能的變化。結(jié)果顯示,與對照組相比,過表達組中,miR-133a的表達水平顯著增加(p0.05),而滋養(yǎng)層細胞的粘附能力(p0.01)和侵襲能力均顯著降低(p0.01);在抑制組中,miR-133a的表達水平顯著降低(p0.05),而滋養(yǎng)細胞的粘附能力(p0.01)和侵襲能力則顯著增強(p0.01)。第二部分:miR-133a對HTR8-SVneo侵襲相關(guān)分子轉(zhuǎn)錄水平的影響。根據(jù)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染因素分為三組,即對照組(轉(zhuǎn)染無關(guān)序列)、過表達組(轉(zhuǎn)染mimics)、抑制組(轉(zhuǎn)染inhibitor),通過實時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染48h后各組細胞中與侵襲相關(guān)的分子轉(zhuǎn)錄水平的變化。結(jié)果顯示,與對照組相比,過表達組中,滋養(yǎng)細胞中HLA-G的mRNA表達量顯著降低(p0.05);在抑制組中,基質(zhì)金屬蛋白酶9的mRNA水平顯著升高(p0.05)。第三部分:miR-133a對HTR8-SVneo細胞凋亡的影響。根據(jù)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染因素分為三組,即對照組(轉(zhuǎn)染無關(guān)序列)、過表達組(轉(zhuǎn)染mimics)、抑制組(轉(zhuǎn)染inhibitor),應(yīng)用凋亡試劑盒檢測各組細胞凋亡。結(jié)果顯示,與對照組相比,過表達組中,細胞凋亡率顯著增加(p0.05);在抑制組中,凋亡率沒有明顯的變化,表明過表達miR-133a時滋養(yǎng)層細胞凋亡率顯著增加。綜上所述,我們的研究表明,miR-133a在調(diào)控滋養(yǎng)層細胞的粘附和侵襲功能方面發(fā)揮著重要的作用。miR-133a可能通過調(diào)控侵襲相關(guān)基因HLA-G,MMP-9的表達及細胞的凋亡,從調(diào)控滋養(yǎng)層細胞的侵襲能力。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.21

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本文編號：1690454