本文選題：FOXC2　切入點(diǎn)：宮頸癌　出處：《吉林大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：子宮頸癌（cervical cancer）是女性生殖器最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率居高不下,每年新增宮頸癌病例1/3在中國，宮頸癌發(fā)病呈青年化趨勢。特別嚴(yán)重困擾了中國中青年女性的生殖健康。2013年中國衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā)布的《2011中國衛(wèi)生統(tǒng)計年鑒》統(tǒng)計，2010年中國城鄉(xiāng)宮頸癌死亡率為2.45/10萬~4.31/10萬。因此早期發(fā)現(xiàn)、早期治療宮頸癌能有效地延長病人生存期，降低病死率。 大量的研究表明，人乳頭瘤病毒（HPV）感染是宮頸癌最常見的發(fā)病因素，其感染率高達(dá)99.7%。但是HPV感染后到最終發(fā)展成宮頸癌是多階段、多種途徑、多分子因素綜合作用的結(jié)果。近年來腫瘤發(fā)生的胚胎源性越來越受到重視，有研究已發(fā)現(xiàn)胚胎發(fā)育相關(guān)性基因Oct-4、Twist、VEGF-C、Wnt等在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。FOXC2是胚胎發(fā)生早期發(fā)揮重要作用的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，與胚胎淋巴管的發(fā)生、血管的發(fā)生、形態(tài)塑建、結(jié)構(gòu)分化密切相關(guān)。2007年國外有報道，F(xiàn)OXC2基因在乳腺癌細(xì)胞中易位表達(dá)，F(xiàn)OXC2蛋白能夠使乳腺癌細(xì)胞獲得間質(zhì)形態(tài)，使細(xì)胞的遷移和侵襲能力增加。2011年又有文獻(xiàn)報道，F(xiàn)OXC2與食道鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，F(xiàn)OXC2靶向RNA干擾可以降低食道鱗癌細(xì)胞的增殖遷移能力。因此，研究FOXC2在宮頸癌增殖與侵襲力、淋巴管形成上的作用和作用模式，探討宮頸癌組織淋巴管發(fā)生機(jī)制，對解明宮頸癌發(fā)生過程、預(yù)防宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移及發(fā)現(xiàn)新的腫瘤診治方法有重要的意義。 目的： 本文通過分析FOXC2基因在子宮頸癌病變組織、宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)水平、siRNA靶向干擾宮頸癌細(xì)胞FOXC2基因表達(dá)對其生物學(xué)行為的影響等研究，試圖探討FOXC2在宮頸癌增殖與侵襲力、癌組織血管與淋巴管形成以及宮頸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等方面上的作用及調(diào)控機(jī)制，以期發(fā)現(xiàn)新的預(yù)防宮頸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和診治靶點(diǎn)。 方法： 1、用免疫組織化學(xué)方法研究FOXC2在人正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的表達(dá)模式，，分析FOXC2表達(dá)與宮頸癌臨床病變程度的相關(guān)性； 2、在細(xì)胞水平用實時熒光PCR方法、Western Blot分析了人Hela、SiHa宮頸癌細(xì)胞及小鼠U14細(xì)胞中FOXC2表達(dá)模式； 3、合成了FOXC2基因序列的siRNA表達(dá)載體，利用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染入人Hela、SiHa宮頸癌細(xì)胞、小鼠U14宮頸癌細(xì)胞； 4、用實時熒光PCR及Western Blot方法分析了FOXC2siRNA對宮頸癌細(xì)胞FOXC2基因表達(dá)的抑制作用； 5、CCK8法分析干擾前后宮頸癌細(xì)胞增殖活性，用劃痕法檢測干擾前后宮頸癌細(xì)胞體外遷移能力的改變。 結(jié)果： 1、25%的正常宮頸組織表達(dá)低強(qiáng)度的FOXC2蛋白，65%的CIN病例宮頸組織表達(dá)中等強(qiáng)度的FOXC2蛋白；而91.8%的宮頸癌組織表達(dá)高強(qiáng)度的FOXC2蛋白，其中宮頸腺癌組織全部高強(qiáng)度表達(dá)FOXC2蛋白。 2、宮頸鱗癌I期患者中FOXC2陽性表達(dá)率為88.5%，II期為100%，與正常宮頸及宮頸CIN患者比較差異顯著，P0.05。宮頸癌II期患者FOXC2表達(dá)強(qiáng)度高于I期患者FOXC2表達(dá)強(qiáng)度，兩者均顯著高于正常婦女，P0.05。 3、宮頸鱗癌癌灶中存在新生血管，其周邊組織存在豐富的新生微淋巴管，均有FOXC2表達(dá)陽性。 4、淋巴轉(zhuǎn)移者癌組織FOXC2表達(dá)強(qiáng)度高于未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移者，但兩組比較差異無顯著性，P0.05。 5、人宮頸癌HeLa、SiHa細(xì)胞和小鼠宮頸癌U14細(xì)胞均高水平的表達(dá)FOXC2mRNA和FOXC2蛋白表達(dá)，各種細(xì)胞間FOXC2表達(dá)無明顯差異。 6、FOXC2-siRNA可抑制HeLa、SiHa和U14細(xì)胞FOXC2mRNA的表達(dá)，抑制率分別達(dá)到76.2%、75.7%和90.8%。 7、FOXC2-siRNA完全抑制HeLa、SiHa細(xì)胞FOXC2蛋白的表達(dá)。 8、FOXC2-siRNA作用48h后，Hela細(xì)胞增殖開始能力減弱；72h后Hela細(xì)胞和SiHa細(xì)胞增殖能力均明顯減弱；U14細(xì)胞增殖能力也明顯減弱。 9、 FOXC2-siRNA作用24h后，HeLa、SiHa細(xì)胞侵襲能力均顯著低于對照組（P0.05）。 結(jié)論： 1、宮頸癌病變組織存在FOXC2蛋白，F(xiàn)OXC2蛋白的表達(dá)水平及表達(dá)強(qiáng)度與宮頸癌的病變程度呈正相關(guān)，證明FOXC2蛋白參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程。 2、FOXC2參與了宮頸鱗癌新生微血管和新生微淋巴管的形成，表明與宮頸鱗癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。 3、FOXC2shRNA可抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖能力。 4、FOXC2shRNA可抑制宮頸癌細(xì)胞的體外遷移能力。5、FOXC2基因可能成為治療宮頸癌的分子靶點(diǎn)。
[Abstract]:Cervical cancer (cervical cancer) is the most common female genital malignant tumors, the high incidence of cervical cancer cases, an annual increase of 1/3 in China, the incidence of cervical cancer in young trend. Especially serious problem <2011 Chinese Health Statistics Yearbook > China statistics released the young women's reproductive health.2013 health plan and China the family planning committee, 2010 Chinese and cervical cancer mortality rate was 2.45/10 million ~4.31/10 million. Therefore early detection, can effectively prolong the survival of patients with early treatment of cervical cancer, reduce the mortality rate.
A number of studies have shown that human papilloma virus (HPV) infection is the most common etiological factors of cervical cancer, the infection rate of 99.7%. after HPV infection, but eventually develop into cervical cancer is a multi stage, a variety of ways, the comprehensive effect of many molecular factors. Embryonal tumors in recent years more and more attention, some studies have found that embryonic development related genes Oct-4, Twist, VEGF-C, Wnt in cervical cancer occurrence and development play an important role in.FOXC2 transcription factors play an important role in early embryogenesis, embryonic lymphatic occurrence, angiogenesis, shape modeling, structural differentiation is closely related to.2007 abroad reported that the FOXC2 gene in breast cancer cells expressing FOXC2 protein translocation, can cause breast cancer cells to acquire mesenchymal morphology, the cell migration and invasion ability increased.2011 and reported, FOXC2 and esophageal squamous cell carcinoma The invasion and metastasis of FOXC2 interference targeting RNA can reduce esophageal squamous cell carcinoma cell proliferation and migration. Therefore, the research of FOXC2 in cervical cancer cell proliferation and invasion, lymphatic function and mode of action on the formation of cervical cancer, lymph tube mechanism, process to understand prevention of cervical cancer, cervical cancer and lymph metastasis that has important significance in tumor diagnosis and treatment methods.
Objective:
In this paper, through the analysis of the FOXC2 gene in cervical cancer tissues, the expression level of cervical cancer cells in the study of siRNA targeting FOXC2 gene expression in cervical cancer cell interference effect on biological behavior, attempts to explore the FOXC2 in cervical cancer cell proliferation and invasion, formation and metastasis of cervical cancer and other aspects of the mechanism and regulation of carcinoma of blood and lymph vessels, in order to find the new cervical cancer prevention and treatment of distant metastasis targets.
Method錛

本文編號：1636161