本文選題：卵巢癌　切入點：轉(zhuǎn)移　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：卵巢癌是致死率最高的婦科惡性腫瘤,且發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢。由于卵巢癌具有起病隱匿,早期缺乏典型臨床癥狀等特點,大多數(shù)患者確診時已為疾病晚期,此時已經(jīng)發(fā)生了大面積的轉(zhuǎn)移。發(fā)生了遠處轉(zhuǎn)移的卵巢癌,其治療效果差,死亡率高,5年生存率低于30%。轉(zhuǎn)移是卵巢癌重要的生物學(xué)特性,是導(dǎo)致卵巢癌患者死亡的主要原因。因此,尋找與卵巢癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的生物標(biāo)志物在卵巢癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的早期進行診斷是必要而迫切的。蛋白質(zhì)糖基化是最常見和最重要的翻譯后修飾之一。糖基化修飾的異常,包括糖蛋白量的異常變化和/或其糖鏈結(jié)構(gòu)的異常改變,與諸多病理過程密切相關(guān)。大量研究表明,腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中往往伴隨著糖基化修飾的異常。這些異常的糖鏈結(jié)構(gòu)是惡性腫瘤的普遍特征,其中有些異常變化的糖鏈參與其惡性生物學(xué)行為的形成,促進轉(zhuǎn)移并成為有用的腫瘤進程監(jiān)測生物標(biāo)志物。因而,腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中異常變化的糖鏈為新的生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)提供了可靠的來源。目前,也有研究表明糖基化修飾在卵巢癌轉(zhuǎn)移過程中起著非常重要的作用。例如,間皮素-MUC16結(jié)合促進卵巢癌腹腔轉(zhuǎn)移,但是這一過程依賴于其表面的N-糖鏈。通過去除卵巢癌腫瘤細胞表面糖鏈的方式能夠改變細胞粘附透明質(zhì)酸的能力。這些研究表明,糖鏈在卵巢癌的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用,然而,N-糖鏈在卵巢癌轉(zhuǎn)移過程中的準(zhǔn)確變化以及特定類型的N-糖鏈在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用尚不清楚。據(jù)報道,腫瘤細胞分泌上清中特異性改變的糖鏈有望成為腫瘤無創(chuàng)性診斷的生物標(biāo)志物。準(zhǔn)確而可靠地獲取這些糖鏈的結(jié)構(gòu)以及量的信息有助于腫瘤診斷標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)。定量糖組學(xué)為其提供了有效而可靠的手段,不僅能區(qū)分樣品中結(jié)構(gòu)不同的糖鏈,還能揭示各種糖鏈豐度的不同。本研究中,我們發(fā)展了適用于細胞上清的穩(wěn)定同位素代謝標(biāo)記定量糖組學(xué)的方法,并首次將其應(yīng)用到漿液性卵巢癌細胞株SKOV3及其高轉(zhuǎn)移株SKOV3-ip分泌上清N-糖鏈的定量研究。結(jié)果顯示,通過該方法我們首次揭示了漿液性卵巢癌細胞分泌上清中18種N-糖鏈的結(jié)構(gòu)和定量信息,發(fā)現(xiàn)其中17種N-糖鏈的表達水平存在差異。有意思的是,與低轉(zhuǎn)移的漿液性卵巢癌細胞株SKOV3相比,平分型N-糖鏈(bisecting GlcNAc)的表達水平在高轉(zhuǎn)移的漿液性卵巢癌細胞SKOV3-ip中顯著降低,而β-1,6分支的N-糖鏈的表達水平則顯著升高。隨后,我們利用了綜合的分子生物學(xué)手段,包括凝集素印跡,實時熒光定量PCR,蛋白質(zhì)印跡,免疫組化,細胞遷移實驗以及細胞侵襲實驗在糖基轉(zhuǎn)移酶水平上對這兩種糖鏈的改變進行了驗證,并對其在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的功能進行了研究。我們的實驗數(shù)據(jù)顯示,MGAT3及其催化產(chǎn)物平分型N-糖鏈(bisecting GlcNAc)在漿液性卵巢癌細胞的遷移與侵襲中起抑制作用,而MGAT5及其催化產(chǎn)物β-1,6分支的N-糖鏈在漿液性卵巢癌細胞的遷移和侵襲過程中起促進作用。此外,我們還證明了這兩種N-糖鏈在卵巢癌細胞中是陰陽的關(guān)系。實驗證明,穩(wěn)定同位素代謝標(biāo)記的定量糖組學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的綜合策略為尋找卵巢癌轉(zhuǎn)移過程中特異性改變的糖鏈提供了可靠的方法。本研究首次全面揭示了卵巢癌細胞分泌上清中轉(zhuǎn)移相關(guān)N-糖鏈的改變。在這些變化的糖鏈中,平分型N-糖鏈有望成為監(jiān)測卵巢癌早期轉(zhuǎn)移的潛在生物標(biāo)志物,從而提高卵巢癌的早期診斷率。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.31

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本文編號：1585775