本文選題：宮頸癌　切入點(diǎn)：Hela　出處：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:本課題旨在探討p38δ在宮頸癌組織細(xì)胞和Hela細(xì)胞系中蛋白表達(dá)水平的變化,及p38δ高表達(dá)對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的影響,同時(shí)初步探討p38δ在該調(diào)控過(guò)程中可能存在的分子機(jī)制,從而為宮頸癌的篩查、診斷及臨床治療提供新的思路。方法:1利用蛋白免疫印跡(western blot)法檢測(cè)宮頸癌組織細(xì)胞及Hela細(xì)胞系中p38δ蛋白表達(dá)水平;2利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染p38δ哺乳動(dòng)物表達(dá)質(zhì)粒,在Hela細(xì)胞中瞬時(shí)過(guò)表達(dá)p38δ;3利用Annexin V-FITC/PI雙染色熒光顯微鏡觀察法檢測(cè)Hela細(xì)胞瞬時(shí)過(guò)表達(dá)p38δ后細(xì)胞凋亡水平的變化;4利用慢病毒轉(zhuǎn)染及細(xì)胞耐藥性篩選構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)p38δHela細(xì)胞株;5利用蛋白免疫印跡法和細(xì)胞免疫熒光染色法檢測(cè)穩(wěn)定表達(dá)p38δHela細(xì)胞株中p38δ的表達(dá)情況;6利用Annexin VFITC/PI雙染色熒光顯微鏡觀察法檢測(cè)對(duì)照Hela細(xì)胞株和穩(wěn)定表達(dá)p38δHela細(xì)胞株在缺氧條件(1%O2,24h)和順鉑處理?xiàng)l件(10ug/ml,24h)下細(xì)胞凋亡水平;7利用免疫沉淀(immunoprecipitation)法和蛋白免疫印跡法檢測(cè)缺氧條件(1%O2,24h)和順鉑(10ug/ml,24h)處理?xiàng)l件下p38δ磷酸化水平;8利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染野生型p38δ表達(dá)質(zhì)粒和激酶失活突變體p38δ(K54R)表達(dá)質(zhì)粒,以及Annexin V-FITC/PI雙染色熒光顯微鏡觀察法,檢測(cè)野生型p38δ和激酶失活突變p38δ(K54R)對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的影響;9采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)對(duì)照Hela細(xì)胞株和穩(wěn)定表達(dá)p38δHela細(xì)胞株在缺氧條件(1%O2,24h)和順鉑處理?xiàng)l件(10ug/ml,24h)下,細(xì)胞中凋亡調(diào)控因子p53、Bcl-2及Bax的表達(dá)水平。結(jié)果:1與正常宮頸組織相比,宮頸癌組織中p38δ蛋白表達(dá)水平顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與非癌性細(xì)胞系HEK293(human embryonic kidney 293)細(xì)胞、MEF(Mouse embryo fibroblast)細(xì)胞相比,宮頸癌細(xì)胞系Hela細(xì)胞中p38δ蛋白表達(dá)水平顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);2與轉(zhuǎn)染空白對(duì)照載體Hela細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染p38δ表達(dá)載體Hela細(xì)胞凋亡水平顯著提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);3與對(duì)照Hela細(xì)胞株相比,穩(wěn)定表達(dá)p38δHela細(xì)胞株在缺氧條件及順鉑處理?xiàng)l件下細(xì)胞凋亡水平顯著提高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均0.05);4與對(duì)照處理細(xì)胞相比,缺氧及順鉑處理后Hela細(xì)胞中p38δ第180位蘇氨酸和第182位酪氨酸磷酸化水平顯著提高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均0.05);5與轉(zhuǎn)染野生型p38δ表達(dá)載體Hela細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染p38δ激酶失活突變表達(dá)載體Hela細(xì)胞凋亡水平顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);6與對(duì)照Hela細(xì)胞株相比,穩(wěn)定表達(dá)p38δHela細(xì)胞株在缺氧及順鉑處理?xiàng)l件下,凋亡調(diào)控因子Bax和p53蛋白表達(dá)量顯著上調(diào),而B(niǎo)cl-2蛋白表達(dá)量顯著下調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均0.05)。結(jié)論:1在宮頸癌組織細(xì)胞和在宮頸癌Hela細(xì)胞中,p38δ的蛋白表達(dá)水平降低;2 Hela細(xì)胞中高表達(dá)p38δ促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生,并且促進(jìn)Hela細(xì)胞對(duì)低氧環(huán)境及順鉑的敏感度;3低氧環(huán)境及順鉑誘導(dǎo)p38δ活性的增加,并且p38δ對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的調(diào)控依賴于其激酶活性;4 p38δ誘導(dǎo)在低氧環(huán)境和順鉑處理?xiàng)l件下Hela細(xì)胞中促凋亡因子p53、Bax的高表達(dá)和抗凋亡因子Bcl-2的低表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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