發(fā)布時(shí)間：2018-03-05 17:50

  本文選題：卵巢腺癌　切入點(diǎn)：卵巢透明細(xì)胞癌　出處：《四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年05期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的研究細(xì)胞密度是否會(huì)對(duì)從人卵巢透明細(xì)胞癌系ES-2和卵巢腺癌細(xì)胞A2780中分離的癌干細(xì)胞產(chǎn)生影響。方法將ES-2、A2780細(xì)胞置于含生長(zhǎng)因子、牛血清白蛋白和人胰島素的無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng),采用連續(xù)傳代誘導(dǎo)培養(yǎng)癌干細(xì)胞。觀察不同細(xì)胞密度下ES-2、A2780細(xì)胞形態(tài)變化,流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)含血清培養(yǎng)基(SSM)組、無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)組細(xì)胞誘導(dǎo)前后細(xì)胞表面標(biāo)志CD133、CD44表達(dá)的改變。軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同誘導(dǎo)條件下ES-2癌干細(xì)胞球生長(zhǎng)速度和成瘤能力。結(jié)果 2×10~4 mL~(-1)密度下,ES-2細(xì)胞能在SFM中存活,但不能形成癌干細(xì)胞球;5×10~4、1×10~4 mL~(-1) ES-2細(xì)胞能在SFM中存活、增殖并形成癌干細(xì)胞球。與貼壁的細(xì)胞及誘導(dǎo)前相比,誘導(dǎo)后形成的癌干細(xì)胞球(1×10~5 mL~(-1)組、5×10~5 mL~(-1)組)高表達(dá)CD133+、CD44+(P0.05),傳代后具有更高的增殖能力和克隆形成能力,且5×10~4 mL~(-1)密度下,癌干細(xì)胞球成瘤能力更強(qiáng)。A2780細(xì)胞分別以1×10~4、3×10~4、5×10~4 mL~(-1)的密度接種于SFM中,10d后,1×10~4、3×10~4 mL~(-1)組中形成細(xì)胞團(tuán),但3×10~4 mL~(-1)組中形成的細(xì)胞團(tuán)更大,透光性更強(qiáng),細(xì)胞更致密,5×10~4 mL~(-1)組未形成細(xì)胞懸浮球。流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)A2780細(xì)胞3×10~4 mL~(-1)組中細(xì)胞與1×10~4 mL~(-1)組相比,CD133~+細(xì)胞陽(yáng)性率更高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3×10~4 mL~(-1)組的細(xì)胞生長(zhǎng)速度最快。結(jié)論細(xì)胞密度5×10~4 mL~(-1)和3×10~4 mL~(-1)分別是誘導(dǎo)ES-2、A2780細(xì)胞株卵巢腫瘤干細(xì)胞球的合適條件。
[Abstract]:Objective to study whether cell density may affect cancer stem cells isolated from human ovarian clear cell carcinoma (ES-2) and ovarian adenocarcinoma cell line A2780. Cancer stem cells were cultured in serum-free medium of bovine serum albumin (BSA) and human insulin. The morphological changes of ES-2A2780 cells were observed under different cell densities, and the serum-containing medium (SSM) was detected by flow cytometry. Before and after induction, the expression of CD133hCD44, a cell surface marker, in serum-free medium (SFM) group was changed. Soft Agar Clone formation assay was used to detect the growth rate and tumorigenic ability of ES-2 cancer stem cell spheres under different induction conditions. Results: at 2 脳 10 ~ 4 mL / L ~ (-1) density, the expression of CD133T CD44 was detected. Cells can survive in SFM, However, ES-2 cells could survive, proliferate and form cancer stem cell spheres in SFM. Compared with adherent cells and pre-induction cells, cancer stem cells could not be formed in 5 脳 10 ~ (4) C ~ (-1) or 1 脳 10 ~ (4) mL ~ (-1) ES-2 cells. The high expression of CD133 CD44 and P0.05 was found in the cancer stem cell spheroids (1 脳 10 ~ (5) mL / L ~ (-1)) group. The cells were subcultured with higher proliferative and clone forming ability, and 5 脳 10 ~ (4) mL / L ~ (-1) density, and the expression of CD _ (44) CD _ (44) was higher than that in the control group (P _ (0.05)), and at 5 脳 10 ~ (4) mL / L ~ (-1) density. The tumor forming ability of cancer stem cells was stronger. A2780 cells were inoculated with 1 脳 10 ~ (4) ~ (3 脳 10 ~ (4)) ~ (5 脳 10 ~ (4) L ~ (-1)) density to form a cell mass in SFM group 10 days after inoculation, but in 3 脳 10 ~ (4) mLL ~ (-1) group, the cell mass was larger and the light transmittance was stronger than that in the group of 3 脳 10 ~ (4) mL ~ (-1) ~ (-1). The positive rate of CD133~ cells in the A2780 cell group was higher than that in the 1 脳 10 ~ 4 mL / L ~ (-1) group, and that in the A2780 cell group was higher than that in the 1 脳 10 ~ (4) mL / L ~ (-1) group, and the positive rate of CD133~ cells in the A2780 cell group was higher than that in the 1 脳 10 ~ (4) mL / L ~ (-1) group. Conclusion the cell density of 5 脳 10 ~ 4 mL ~ (-1) and 3 脳 10 ~ (4) mL / L ~ (-1) are the suitable conditions for inducing ovarial tumor stem cell spheres of ES-2A2780 cell line, respectively.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西第二醫(yī)院婦產(chǎn)科;出生缺陷與相關(guān)婦兒疾病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(四川大學(xué));
【基金】：四川省學(xué)術(shù)帶頭人培養(yǎng)基金(No.2012DTPY0028,No.2013RST004) 四川省衛(wèi)計(jì)委基金(No.130113) 四川省科技廳科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2014KJT057-2014SZ)資助
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：1571285