本文關(guān)鍵詞： 胚胎植入前遺傳檢測(cè) 單核苷酸多態(tài)性微陣列 染色體異常 多重置換單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增　出處：《天津大學(xué)》2014年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目前鑒于不孕不育人群的增加，輔助生殖技術(shù)，包括體外受精和胞漿內(nèi)精子注射技術(shù)的臨床操作逐漸增加。但與自然生產(chǎn)相比，這些技術(shù)由于鑒別異常胚胎缺陷的能力有限，以及植入多胚胎以確保受孕率等操作的使用，會(huì)增加胎兒出生缺陷的風(fēng)險(xiǎn)，影響嬰兒的出生率。胚胎植入前遺傳診斷是在常規(guī)體外受精將胚胎植入母體之前，通過(guò)一系列的遺傳檢測(cè)獲得胚胎的遺傳信息，發(fā)現(xiàn)遺傳缺陷，確保植入更少但質(zhì)量更優(yōu)的胚胎。 現(xiàn)在胚胎植入前遺傳檢測(cè)普遍采用的遺傳檢測(cè)方法包括PCR和熒光原位雜交，用以檢測(cè)單基因突變，以及有限分辨率的染色體異常。本研究旨在建立一種能全面分析胚胎遺傳信息的遺傳檢測(cè)方法，采用的是含有約300,000檢測(cè)位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性微陣列的方法。高密度芯片的位點(diǎn)覆蓋全基因的23對(duì)染色體，對(duì)于染色體片段的平均分辨長(zhǎng)度約10.6kb，因此可在一次檢測(cè)中探測(cè)到從整條染色體到染色體微小片段的缺失、增加、插入、非平衡易位和染色體數(shù)目異常等。 本研究的第一步是要建立多重置換單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增方法，，將胚胎植入前活體取樣的單個(gè)細(xì)胞基因組擴(kuò)增到單核苷酸多態(tài)性微陣列可以檢測(cè)的量。經(jīng)過(guò)產(chǎn)物濃度檢測(cè)、瓊脂糖凝膠電泳和384位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性微陣列驗(yàn)證，擴(kuò)增平均產(chǎn)量為2.70μg，產(chǎn)物片段長(zhǎng)度大于2kb，全基因組覆蓋率近99%，在數(shù)量和質(zhì)量上均完全符合下游遺傳檢測(cè)的要求 第二步采用12個(gè)DNA樣品，建立并驗(yàn)證了用以檢測(cè)細(xì)胞染色體異常的單核苷酸多態(tài)性微陣列高密度芯片方法。12個(gè)DNA樣品包括人類(lèi)染色體異常細(xì)胞系的標(biāo)準(zhǔn)gDNA樣品，以及經(jīng)醫(yī)院初步診斷的病理樣品。人類(lèi)染色體異常細(xì)胞系的標(biāo)準(zhǔn)gDNA樣品的通過(guò)本研究的遺傳檢測(cè)方法的染色體異常結(jié)果與其已知的測(cè)序結(jié)果相符，確證了高密度芯片檢測(cè)的準(zhǔn)確性；病理樣品的檢測(cè)結(jié)果與醫(yī)院的初步診斷已知，但更加具體和準(zhǔn)確。
[Abstract]:In view of the increasing number of infertile people, the clinical practice of assisted reproductive techniques, including in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection, is gradually increasing. However, compared with natural production, these techniques are limited in their ability to identify abnormal embryo defects, And the use of procedures such as implantation of multiple embryos to ensure pregnancy rates increases the risk of birth defects and affects the birth rate of babies. Preimplantation genetic diagnosis is before conventional in vitro fertilization implants the embryo into the mother. Genetic information of embryos is obtained through a series of genetic tests, genetic defects are found, and fewer but better-quality embryos are implanted. The current genetic methods commonly used in pre-implantation genetic testing include PCR and fluorescence in situ hybridization to detect single gene mutations. The purpose of this study is to establish a genetic detection method that can comprehensively analyze the genetic information of embryos. A single nucleotide polymorphic microarray containing about 300,000 loci was used. The loci of the high density microarray covered 23 pairs of chromosomes of the entire gene. The average resolution length of chromosomal fragments is about 10.6kb, so the deletion, increase, insertion, non-equilibrium translocation and abnormal number of chromosomes can be detected in a single test. The first step of this study was to establish a multiplex replacement single cell genome amplification method, in which the genome of a single cell sampled in vivo before embryo implantation was amplified to the amount that could be detected by single nucleotide polymorphism microarray. Agarose gel electrophoresis and microarray verification of 384 locus single nucleotide polymorphism showed that the average amplification yield was 2.70 渭 g, the length of the product was more than 2 kb, the whole genome coverage was nearly 99%, and the quantity and quality of the product met the requirements of downstream genetic detection. In the second step, 12 DNA samples were used to establish and verify the single-nucleotide polymorphism microarray microarray microarray method for the detection of chromosomal abnormalities in cells. 12 DNA samples included standard gDNA samples of human chromosomal abnormal cell lines. Standard gDNA samples of human chromosomal abnormal cell lines. The results of chromosomal abnormalities obtained by the genetic detection method in this study are consistent with the results of known sequencing. The accuracy of high density microarray detection was confirmed, and the detection results of pathological samples and the preliminary diagnosis of hospital were known, but more specific and accurate.
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R714.8

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