本文關(guān)鍵詞： 卵巢癌 腹水微環(huán)境 腹水腫瘤細(xì)胞 致密球體 整合素α5 腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞 細(xì)胞因子 自噬 EGFR抑制 卵巢癌 球體 耐藥 3-MA　出處：《華中科技大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：本試驗(yàn)旨在探索比較與配對(duì)原位和轉(zhuǎn)移灶腫瘤細(xì)胞相比,高級(jí)別漿液性卵巢癌患者腹水中腫瘤細(xì)胞的表型特征。以及腹水微環(huán)境對(duì)腹水腫瘤細(xì)胞表型的影響和調(diào)控其粘附侵襲機(jī)制。 方法：磁珠分選得到臨床高級(jí)別漿液性卵巢癌患者原位灶,腹水和網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移灶配對(duì)腫瘤上皮細(xì)胞；體外比較它們的粘附展開,侵襲以及免疫缺陷小鼠體內(nèi)成瘤能力；高通量芯片比較5例配對(duì)腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)差異以及差異基因富集通路；惡性腹水懸浮培養(yǎng)觀察其對(duì)腫瘤細(xì)胞表型的影響；體內(nèi)靶向腹水中腫瘤細(xì)胞或其它細(xì)胞成分觀察其對(duì)腹腔播散的影響； 結(jié)果：配對(duì)細(xì)胞中腹水腫瘤細(xì)胞的粘附侵襲和體內(nèi)成瘤能力最強(qiáng)；nRNA芯片結(jié)果顯示腹水腫瘤細(xì)胞的基因表型與原位轉(zhuǎn)移差異較大,并且這些差異主要是富集在細(xì)胞粘附相關(guān)通路,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)腹水腫瘤細(xì)胞高表達(dá)ITGA5;腹水中ITGA5高表達(dá)腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)間質(zhì)表型并且是腹腔粘附侵襲的關(guān)鍵；惡性腹水中的細(xì)胞因子(EGF和TGF-β1)特異性地升高腫瘤細(xì)胞ITGA5表達(dá)；惡性腹水使腫瘤細(xì)胞和腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)形成致密球體結(jié)構(gòu),促進(jìn)和維持了腹水腫瘤細(xì)胞ITGA5表型；用ITGA5受體FN的結(jié)構(gòu)類似物CH50可以中和腹腔中高表達(dá)ITGA5腫瘤細(xì)胞,進(jìn)而抑制腹水中腫瘤細(xì)胞腹腔播散：用imatinib靶向腹水中的CAF細(xì)胞可以遏制CAF對(duì)腫瘤細(xì)胞的改造進(jìn)而抑制卵巢癌腹腔播散；結(jié)論：體外腫瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)試驗(yàn)以及高通量芯片均表明腹水中腫瘤細(xì)胞具有獨(dú)特的表型和惡性行為。而腹水微環(huán)境中的因子成分和其它細(xì)胞成分影響并維持了腹水中腫瘤細(xì)胞的特定表型。故而針對(duì)腹水中惡性表型的腫瘤細(xì)胞或針對(duì)引起和維持該表型的微環(huán)境的靶向治療將為遏制卵巢癌的腹腔播散提供全新的方向。 目的：惡性腹水和廣泛腹腔播散是卵巢癌進(jìn)展期的主要特征,腹水中腫瘤細(xì)胞脫離ECM形成球體是腹腔播散的根源,EGFR激活在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用。本課題研究EGFR抑制劑對(duì)于脫離ECM卵巢癌球體細(xì)胞的殺傷效應(yīng)以及機(jī)制探討。 方法：Cell Counting kit-8細(xì)胞活性試驗(yàn)比較腫瘤細(xì)胞增殖和藥物處理后細(xì)胞活性。體內(nèi)外粘附試驗(yàn)比較細(xì)胞粘附ECM能力。Matrigel侵襲試驗(yàn)比較細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。蛋白印跡,免疫組化和免疫熒光檢測(cè)基因的蛋白表達(dá)水平。自噬小體試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的自噬反應(yīng)。KMplot在線分析卵巢癌中EGFR和自噬指標(biāo)與預(yù)后的關(guān)系。用The Cancer Genome Atlas (TCGA)數(shù)據(jù)庫來源的人卵巢癌測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行基因表達(dá)關(guān)聯(lián)分析。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞在不同細(xì)胞周期中所占的比例�？寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)用來分析腫瘤細(xì)胞的體外增殖。腫瘤的體內(nèi)生長采用卵巢癌腹腔移植模型,通過活體生物發(fā)光成像進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)。 結(jié)果：體外懸浮培養(yǎng)形成的卵巢癌球體結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出更強(qiáng)的增殖活性,更強(qiáng)的粘附侵襲能力,同時(shí)對(duì)化療藥物耐藥抵抗。同時(shí)卵巢癌球體對(duì)EGFR抑制劑耐藥,并且EGFR抑制特異性的在球體結(jié)構(gòu)中引起自噬。在原代卵巢癌患者腹水中,腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)高的基礎(chǔ)自噬狀態(tài),并且相對(duì)對(duì)EGFR抑制劑耐藥,EGFR抑制劑AG1478可明顯誘導(dǎo)產(chǎn)生自噬。KM分析表明卵巢癌中EGFR通路和自噬指標(biāo)均是卵巢癌預(yù)后不良的標(biāo)志,EGFR和自噬指標(biāo)之間有明顯的負(fù)相關(guān)性。體外聯(lián)用抗自噬藥物3MA顯著增加AG1478在卵巢癌球體中的殺傷效應(yīng)。小鼠體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果也表明抗EGFR能夠引起自噬,靶向自噬能夠增加EGFR抑制劑控制腹腔播散的效應(yīng)。 結(jié)論：卵巢癌細(xì)胞脫離ECM部位后處于高的自噬狀態(tài),并且對(duì)EGFR抑制劑耐藥,同時(shí)EGFR抑制劑可以引起保護(hù)性的自噬反應(yīng)。抑制腫瘤細(xì)胞自噬在卵巢癌球體細(xì)胞中可以增加EGFR抑制劑的敏感性,這種聯(lián)用方案可能為遏制卵巢癌腹腔播散提供新的契機(jī)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31

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