本文關(guān)鍵詞： 卵巢早衰 自身免疫性卵巢疾病 間充質(zhì)干細(xì)胞 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的自身免疫性卵巢疾病是卵巢早衰(POF)的重要病因之一,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)及相關(guān)細(xì)胞因子的異常可能參與其發(fā)病。在動(dòng)物模型上不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)均能修復(fù)受損的卵巢功能,但免疫調(diào)控機(jī)制是否參與其中,未曾報(bào)道。本研究首次從免疫調(diào)控的角度研究MSCs對(duì)免疫損傷的卵巢功能的修復(fù)作用,驗(yàn)證MSCs是否通過調(diào)控Treg細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子修復(fù)受損的卵巢功能,為闡明MSCs治療POF的作用機(jī)制、指導(dǎo)其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法第一章:檢測(cè)不同卵巢功能女性外周血雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)水平、CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞及干擾素-γ(IFN-γ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)和白介素-10(IL-10)水平。第二章:以透明帶3多肽免疫小鼠構(gòu)建POF模型,通過陰道脫落細(xì)胞涂片、血清性激素、卵巢組織形態(tài)、抗透明帶3抗體(AZP3Ab)及CD45鑒定建模成功,檢測(cè)脾臟CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞、卵巢Foxp3及外周血細(xì)胞因子。第三章:在細(xì)胞接觸或Transwell條件下,小鼠BMSCs與抗CD3/CD28激活的POF小鼠脾細(xì)胞增殖模型共培養(yǎng)96h,加入TGF-β1中和抗體、前列腺素E2(PGE2)抑制劑,檢測(cè)CD4+T細(xì)胞增殖、Treg細(xì)胞及上清細(xì)胞因子;分選POF小鼠脾臟CD4+CD25-T細(xì)胞,加入BMSCs共培養(yǎng)96h,檢測(cè)CD4+CD25+T細(xì)胞及上清細(xì)胞因子。第四章:POF小鼠經(jīng)尾靜脈或卵巢移植BMSCs,體內(nèi)示蹤,檢測(cè)卵巢內(nèi)分泌功能(血清性激素、卵巢組織形態(tài)、抗苗勒管激素(AMH)蛋白);免疫功能(脾臟Treg細(xì)胞、卵巢Foxp3及細(xì)胞因子);生育能力(移植后4w合籠,孕18.5天觀察胎鼠)。結(jié)果第一章:與健康育齡女性相比,POF患者血清E2下降、FSH上升,外周血CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞減少,TGF-β1和IL-10表達(dá)下調(diào),IFN-γ則上調(diào)。第二章:與對(duì)照組比較,模型組小鼠動(dòng)情周期紊亂比例增加,血清E2下降、FSH上升,各級(jí)卵泡減少,卵巢AZP3Ab和CD45表達(dá)上調(diào),Foxp3下調(diào),脾臟CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞減少,外周血TGF-β1和IL-10表達(dá)下調(diào),IFN-y上調(diào)。第三章:在細(xì)胞接觸條件下,高劑量BMSCs可抑制POF小鼠的CD4+T細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)Treg細(xì)胞生成,促進(jìn)TGF-β1和IL-10產(chǎn)生以及抑制IFN-γ分泌;在Transwell條件下,BMSCs與脾細(xì)胞增殖模型共培養(yǎng)所產(chǎn)生的免疫抑制效應(yīng)比細(xì)胞接觸條件更明顯,且TGF-β1中和抗體和PGE2抑制劑可以阻斷該效應(yīng)。高劑量BMSCs可以誘導(dǎo)CD4+CD25-T細(xì)胞分化為CD4+CD25+T細(xì)胞。第四章:BMSCs主要遷移至POF小鼠卵巢間質(zhì),卵泡部位未見其分布;使POF小鼠的血清E2上升,FSH下降;增加各級(jí)卵泡及黃體數(shù)量,上調(diào)卵巢AMH的表達(dá);改善小鼠的妊娠率和平均產(chǎn)鼠數(shù);增加小鼠脾臟Treg細(xì)胞比例以及卵巢Foxp3、TGF-β1和IL-10的表達(dá),抑制卵巢內(nèi)IFN-y的產(chǎn)生。結(jié)論BMSCs可以通過誘導(dǎo)POF小鼠體內(nèi)Treg細(xì)胞、TGF-β1和IL-10的生成以及抑制IFN-y分泌而發(fā)揮其免疫調(diào)控機(jī)制,恢復(fù)機(jī)體免疫耐受,從而改善免疫損傷的卵巢功能。
[Abstract]:Objective autoimmune ovarian disease is one of the important causes of premature ovarian failure (POF). The abnormalities of regulatory T cell Tregand related cytokines may be involved in the pathogenesis. In animal models, MSCs from different sources can repair the damaged ovarian function, but whether the immune regulation mechanism is involved, In this study, we first studied the effect of MSCs on the repair of immune damaged ovary function from the perspective of immune regulation, and verified whether MSCs can repair the damaged ovarian function by regulating Treg cells and related cytokines. In order to elucidate the mechanism of MSCs in the treatment of POF, Methods: in the first chapter, the levels of CD4 Foxp3 Treg cells and IFN- 緯, TGF- 尾 1 and IL-10 in peripheral blood of women with different ovarian functions were detected. The levels of estradiol E _ 2 and follicle stimulating hormone (FSH) in peripheral blood of female patients with different ovarian functions were determined, and the levels of IFN- 緯 -IFN- 緯, TGF- 尾 _ (1) and IL-10) were determined. Chapter: POF model was established by immunizing mice with pellucida 3 peptide. Vaginal exfoliative cell smear, serum sex hormone, ovarian tissue morphology, anti-pellucida 3 antibody AZP3Aband CD45 were used to identify the spleen CD4 CD25 Foxp3 Treg cells. Ovarian Foxp3 and peripheral blood cytokines. Chapter 3: in the presence of cell contact or Transwell, mouse BMSCs was co-cultured for 96 h with the spleen cell proliferation model of POF mice activated by anti-#en3#. TGF- 尾 1 neutralizing antibody, prostaglandin E2PGE2) inhibitor was added. The proliferation of CD4 T cells and their supernatant cytokines were detected, the spleen CD4 CD25-T cells of POF mice were isolated and co-cultured with BMSCs for 96 h, and the CD4 CD25 T cells and supernatant cytokines were detected. Ovarian endocrine function (serum sex hormone, ovarian histopathology, anti-mullerian hormone Treg) protein, immune function (spleen Treg cell, ovarian Foxp3 and cytokine), fertility (4 weeks after transplantation) were detected. Results: compared with healthy women of childbearing age, serum E2 decreased and FSH increased, while the expression of TGF- 尾 1 and IL-10 decreased in peripheral blood CD4 Foxp3 Treg cells. Chapter 2: compared with the control group, the expression of TGF- 尾 1 and IL-10 was down-regulated. In the model group, the proportion of estrous cycle disorder increased, serum E2 decreased and FSH increased, follicle decreased, AZP3Ab and CD45 expression in ovary increased and Foxp3 down-regulated, spleen CD4 CD25 Foxp3 Treg cells decreased. The expression of TGF- 尾 1 and IL-10 in peripheral blood was down-regulated and IFN-y was up-regulated. Chapter 3: under the condition of cell contact, high dose BMSCs could inhibit the proliferation of CD4 T cells, induce the production of Treg cells, promote the production of TGF- 尾 1 and IL-10 and inhibit the secretion of IFN- 緯 in POF mice. The immunosuppressive effect of co-culture of Transwell and spleen cells was more obvious than that of cell contact. TGF- 尾 1 neutralizing antibody and PGE2 inhibitor could block the effect. High dose BMSCs could induce CD4 CD25-T cells to differentiate into CD4 CD25 T cells. 4th% BMSCs mainly migrated to the ovary stroma of POF mice. Serum E2 of POF mice was increased and decreased, the number of follicles and corpus luteum was increased, the expression of ovarian AMH was up-regulated, the pregnancy rate and the average number of mice were improved, the percentage of Treg cells in spleen and the expression of Foxp3TGF- 尾 1 and IL-10 in ovary were increased. Conclusion BMSCs can induce the production of TGF- 尾 1 and IL-10 in Treg cells and inhibit the secretion of IFN-y in POF mice, which can restore the immune tolerance and improve the ovarian function of immune injury.
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R711.75

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本文編號(hào)：1512587