本文關鍵詞： NTE 子癇前期 滋養(yǎng)層細胞 遷移 侵潤　出處：《南昌大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 滋養(yǎng)層細胞侵入異常是子癇前期發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，其病因未明。近年，研究顯示神經(jīng)病靶酯酶（neuropathy target esterase，NTE）與胎盤的發(fā)育密切相關，其代謝調(diào)節(jié)的磷脂酰膽堿，注射至妊娠小鼠體內(nèi)可誘導出子癇前期的模型，且與滋養(yǎng)層細胞侵潤密切相關，故推測NTE可能參與子癇前期疾病的發(fā)生。本研究擬探討NTE在子癇前期表達變化及其對胎盤滋養(yǎng)層細胞遷移及侵潤的影響和作用機制。 方法： （1）通過實時定量PCR方法和免疫組化技術，檢測NTE mRNA和蛋白在正常妊娠和子癇前期胎盤組織表達變化； （2）通過轉(zhuǎn)染pEGFP-N3-NTE和pGenesil-1-shNTE質(zhì)粒，在人HTR-8/SV-neo滋養(yǎng)層細胞的產(chǎn)生NTE過表達或抑制； （3）通過劃痕實驗和Transwell方法，觀察NTE對HTR-8/SVneo滋養(yǎng)層細胞遷移和侵潤的影響；通過MTS實驗，觀察NTE過表達或抑制后對HTR-8/SVneo滋養(yǎng)層細胞增殖的影響； （4）通過明膠酶譜和ELISA方法檢測細胞上清液MMP-2，9和TIMP-1，2的變化； （5）通過Western blot方法，觀察NTE對HTR-8/SVneo滋養(yǎng)層細胞ERK-1/2和AKT信號通路的影響. 結果： （1）通過實時定量PCR檢測顯示，相對于正常妊娠的胎盤組織，在子癇前期胎盤組織中，NTE mRNA表達水平明顯下降（p0.01）。 （2）通過免疫組織化學檢測顯示，正常妊娠胎盤和子癇前期胎盤組織中，NTE蛋白表達于胎盤組織的細胞滋養(yǎng)層細胞和合體滋養(yǎng)層細胞中。相對于正常妊娠的胎盤組織，在子癇前期胎盤組織中，NTE蛋白的表達水平明顯下降。 （3）通過實時定量PCR和Western blot方法檢測顯示，相對于未轉(zhuǎn)染Blan-k組，pGenesil-1組和Control shRNA組NTE mRNA和蛋白表達均無明顯變化（p0.05）。相對于Control shRNA組，，NTE shRNA組，NTE mRNA（p0.05）和蛋白（p0.05）表達均明顯降低。相對于pGenesil-1組，NTE-EGFP組NTEmRNA（p0.01）和蛋白（p0.001）表達均顯著性增加。 （4）通過劃痕實驗和Transwell方法觀察顯示，相對于Blank組，pGenesil-1組和Control shRNA組HTR-8/SVneo細胞遷移和侵潤能力均無明顯變化（p0.05）。相對于Control shRNA組，NTE shRNA組HTR-8/SVneo細胞遷移和侵潤能力均明顯減弱（p0.01）。NTE-EGFP組相對于pGenesil-1組，HTR-8/SVneo細胞遷移和侵潤能力均顯著增強（p0.05）。 （5）MTS分析顯示，在體外培養(yǎng)24h，36h，48h，相對于同時點各組，20%FBS陽性對照組，均明顯促進HTR8/SVneo細胞的增殖（p0.01），而在體外培養(yǎng)1h，24h，36h，48h及72h，Blank組, pGenesil-1組, NTE-EGFP組,Control shRNA組，NTE shRNA組之間，HTR-8/SVneo細胞的增殖均無明顯變化（p0.05）。 （6）通過明膠酶譜實驗分析顯示，轉(zhuǎn)染后24h和48h，相對于未轉(zhuǎn)染Bla-nk組， pGenesil-1組和Control shRNA組，HTR-8/SVneo分泌MMP-9均無明顯變化（p0.05）。相對于Control shRNA組，NTE shRNA組HTR-8/SVneo細胞分泌MMP-9顯著性減少（p0.01）。相對于pGenesil-1組，NTE-EGFP組HTR-8/SVneo細胞分泌的MMP-9明顯增加（p0.05）。而各組之間，MMP-2表達均沒有明顯變化。 （7）ELISA方法分析顯示，基因轉(zhuǎn)染后24h和48h，Blank組、pGenesil-1組、NTE-EGFP組、Control shRNA組以及NTE shRNA組之間，HTR-8/SVneo細胞所分泌TIMP-1、TIMP-2量均無顯著差異（p0.05）。 （8）Western blot檢測顯示，轉(zhuǎn)染后48h，相對于未轉(zhuǎn)染Blank組，pGenesil-1組和Control shRNA組，HTR-8/SVneo細胞ERK1/2和AKT磷酸化均無顯著影響（p0.05）。相對于Control shRNA組，NTE shRNA組能顯著抑制HTR-8/SVneo細胞ERK1/2磷酸化（p0.01）和AKT磷酸化（p0.05）。相對于pGenesil-1組，NTE-EGFP組明顯促進HTR-8/SVneo細胞ERK1/2磷酸化（p0.01）和AKT磷酸化（p0.001）。 結論： （1）相對于正常妊娠的胎盤組織，在子癇前期胎盤組織中，NTE mRNA和蛋白的表達水平均明顯下降。 （2）NTE通過MMP-9影響HTR-8/SVneo滋養(yǎng)層細胞的遷移和侵潤。 （3）ERK1/2和AKT信號通路參與了NTE對HTR-8/SVneo滋養(yǎng)層細胞的調(diào)節(jié)。
[Abstract]:Objective:
Abnormal trophoblast invasion is an important link in the pathogenesis of preeclampsia, its etiology is still unknown. In recent years, research shows that neuropathy target esterase (neuropathy target, esterase, NTE) is closely related to the development of the placenta, phosphatidylcholine metabolism regulation, injection to pregnancy mice induced preeclampsia model, which is closely related with the trophoblast cells the invasion, suggesting that NTE may be involved in preeclampsia disease. This study was designed to investigate the expression of NTE in preeclampsia and its effect on trophoblast cell migration and invasion and the mechanism.
Method錛

本文編號：1509228