本文關(guān)鍵詞： 子宮內(nèi)膜腺癌 SOX17 β-連環(huán)蛋白 DNA甲基化 Wnt/β-catenin信號通路　出處：《鄭州大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的 子宮內(nèi)膜癌(Endometrial Carcinoma，EC)是常見的發(fā)生于子宮內(nèi)膜上的一組上皮性惡性腫瘤，以腺癌最多見。近年來，其發(fā)病率有明顯的增加并呈現(xiàn)年輕化的世界趨勢。在一些歐美等發(fā)達(dá)國家，其發(fā)病率已位居女性生殖道惡性腫瘤的首位，對廣大女性的健康和生命造成嚴(yán)重威脅。因此，探索子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，對子宮內(nèi)膜癌患者及早做出準(zhǔn)確的診斷和有效的治療，為其預(yù)后延長生存期和提高生活質(zhì)量有很大幫助。但目前關(guān)于子宮內(nèi)膜癌的具體發(fā)病機(jī)制仍不是十分明確，近年來許多研究表明表觀遺傳機(jī)制與其發(fā)生發(fā)展有關(guān)。 表觀遺傳學(xué)機(jī)制是指不依賴DNA堿基序列的改變而能夠影響基因轉(zhuǎn)錄過程，進(jìn)而使基因表達(dá)水平發(fā)生了可穩(wěn)定遺傳并可逆的變化。DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳學(xué)修飾機(jī)制，尤其是抑癌基因啟動子區(qū)域CpG島的甲基化引起其表達(dá)的下調(diào)或缺失，在人類多種惡性腫瘤發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，使得DNA甲基化成為腫瘤研究中的熱點(diǎn)之一，并有希望成為早期診斷惡性腫瘤的一個(gè)有臨床價(jià)值的潛在指標(biāo)。 SOX17作為SOX家族的成員之一，它在胚胎發(fā)育的內(nèi)胚層分化中起關(guān)鍵的作用，但其具體的作用機(jī)制還不是很清楚。最近的研究顯示SOX17基因可能作為Wnt信號通路的拮抗因子，對許多人類惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程發(fā)揮腫瘤抑制基因的功能。β-連環(huán)蛋白（β-catenin）是一種具有多重功能的細(xì)胞內(nèi)糖蛋白，在正常細(xì)胞內(nèi)呈低表達(dá)，而在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)大量積累，引起Wnt通路的異常激活。目前研究認(rèn)為β-連環(huán)蛋白具有癌基因的功能，參與多種惡性腫瘤的發(fā)展過程。既往有研究表明子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與Wnt信號通路有關(guān)，我們的前期研究證實(shí)了SOX17基因在子宮內(nèi)膜腺癌中的蛋白表達(dá)及甲基化情況，其蛋白表達(dá)水平下降，但是，關(guān)于SOX17基因啟動子甲基化情況與Wnt通路關(guān)系的研究尚未見報(bào)道，其具體的信號通路激活機(jī)制尚不明確。 因此，本研究的目的是通過檢測SOX17和β-catenin基因在子宮內(nèi)膜腺癌中的mRNA表達(dá)水平，，以及SOX17在子宮內(nèi)膜腺癌中的甲基化情況，探討其mRNA表達(dá)與SOX17甲基化的關(guān)系，為進(jìn)一步探討SOX17基因與Wnt/β-catenin信號通路的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并且為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生機(jī)制提供一種新的參考思路。研究對象與方法 1.實(shí)驗(yàn)材料 1）細(xì)胞來源：本研究中所用的子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞株AN3CA（低分化）、HEC-1A（中分化）均由鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室饋贈。 2）組織標(biāo)本來源： 子宮內(nèi)膜腺癌組織和正常內(nèi)膜組織：收集2011年10月-2013年12月間鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦科行全子宮切除的子宮內(nèi)膜腺癌組織40例和正常增生期子宮內(nèi)膜組織10例。 健康女性外周血血液樣本：收集2013年07月-2013年12月間在鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院體檢的健康女性外周血樣本5例。 2.實(shí)驗(yàn)方法 1）實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)方法檢測SOX17和β-catenin基因的mRNA表達(dá)情況，用GAPDH作為內(nèi)參。 2）甲基化特異性PCR(MSP)法檢測SOX17基因的甲基化情況。 3.統(tǒng)計(jì)方法 將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)輸入SPSS17.0軟件，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，兩組樣本的均數(shù)比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組樣本間均數(shù)比較采用單因素方差分析；兩變量的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。定性資料的組間的比較采用2檢驗(yàn)或2檢驗(yàn)的連續(xù)性校正，以P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1．在子宮內(nèi)膜腺癌組和正常增生期內(nèi)膜組中SOX17基因mRNA的相對表達(dá)量分別為0.24±0.04、1.01±0.17，-catenin基因的mRNA相對表達(dá)量分別為4.17±0.37、1.03±0.28，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。并且SOX17和-cateninmRNA表達(dá)均與腫瘤的病理分級和肌層浸潤深度相關(guān)（P0.05），與患者年齡，腫瘤臨床分期等臨床病理學(xué)資料之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 2．子宮內(nèi)膜腺癌組織中SOX17和-catenin的mRNA相對表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)（r=－0.631，P=0.001）。 3．兩種子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞株AN3CA、HEC-1A中SOX17基因均表現(xiàn)為完全甲基化狀態(tài)。 4．SOX17基因在子宮內(nèi)膜腺癌組織的甲基化率為77.50%（31/40)，其中20例為完全甲基化，11例為部分甲基化；在正常增生期內(nèi)膜組的甲基化率為10.00%（1/10)，表現(xiàn)為部分甲基化。SOX17的甲基化率在子宮內(nèi)膜腺癌組顯著高于正常增生期內(nèi)膜組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=13.026,P0.01)。SOX17基因CpG島甲基化與子宮內(nèi)膜腺癌的病理分級（P=0.007）和肌層浸潤深度（P=0.035）有關(guān)，而與年齡，臨床分期均無明顯相關(guān)性（P0.05）。 5．在發(fā)生SOX17基因CpG島甲基化的子宮內(nèi)膜組織和SOX17非甲基化的子宮內(nèi)膜組織中，SOX17基因的mRNA表達(dá)量分別為0.25±0.14、0.64±0.40，-catenin基因的mRNA表達(dá)量分別為4.13±0.69、2.49±1.50，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 β結(jié)論 1．SOX17基因啟動子區(qū)CpG島的異常甲基化在子宮內(nèi)膜腺癌發(fā)生過程中是一個(gè)頻發(fā)的分子事件。 2．子宮內(nèi)膜腺癌中SOX17基因啟動子區(qū)CpG島的異常甲基化可能是導(dǎo)致其基因表達(dá)下調(diào)，并引起-catenin基因表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步激活Wnt/-catenin信號通路的一種重要機(jī)制。 3．SOX17基因CpG島甲基化狀態(tài)與子宮內(nèi)膜腺癌的病理分化程度和肌層浸潤深度相關(guān)，說明其可能在子宮內(nèi)膜腺癌的進(jìn)展過程中發(fā)揮作用，并可能作為一個(gè)有臨床價(jià)值的分子生物學(xué)指標(biāo)。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1495980