本文關(guān)鍵詞： Matirptase HAI-1 子宮內(nèi)膜癌 侵襲遷移 凋亡　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:檢測(cè)Matriptase和HAI-1基因在三株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況,探討Matriptase和HAI-1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株侵襲遷移能力及細(xì)胞凋亡情況的相關(guān)性。方法:體外培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株,采用Real-time q PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)HEC-1A、HEC-1B和RL952三株子宮子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中Matriptase、HAI-1 m RNA和蛋白表達(dá)水平;構(gòu)建Matriptase基因Si RNA慢病毒載體,采用RNA干擾技術(shù),對(duì)Matriptase高表達(dá)的HEC-1A和RL952細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,從而達(dá)到抑制Matriptase基因表達(dá)水平的目的,并應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及穿膜小室實(shí)驗(yàn),觀察干擾前后癌細(xì)胞體外侵襲及遷移能力的改變。采用Real-time q PCR及Western blot技術(shù),檢測(cè)不同濃度順鉑作用下Matriptase和HAI-1表達(dá)水平的改變;并采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及穿膜小室實(shí)驗(yàn)測(cè)定其侵襲遷移能力的改變,流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)順鉑對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:1.Matriptase m RNA在HEC-1A、HEC-1B和RL952細(xì)胞的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.2123±0.021)、(6.95E-4±1.2E-4)和(0.1778±0.013),HAI-1m RNA在三株細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.2827±0.049)、(0.0263±0.0043)和(0.2420±0.032);Matriptase和HAI-1蛋白在HEC-1A和RL952中均呈陽(yáng)性表達(dá),但二者在HEC-1B中均為陰性表達(dá)或低于可測(cè)水準(zhǔn),與m RNA水平相吻合。2.采用Matriptase基因Si RNA慢病毒載體(Ma-Si RNA-89873)建立Matriptase低表達(dá)組(Knock down,KD),以加入正常培養(yǎng)基和陰性慢病毒載體NO53分別為空白對(duì)照組(Control,CON)和陰性對(duì)照組(Negative control,NC)。KD組Matriptase m RNA表達(dá)水平顯著下調(diào)(HEC-1A:0.2157±0.0124 vs0.0358±0.0111;RL952:0.1849±0.0053 vs 0.0341±0.0017),抑制率分別達(dá)到83.4%和81.5%。KD組HAI-1 m RNA表達(dá)較CON組均有略微上調(diào)(HEC-1A:0.3142±0.0277 vs 0.2900±0.0292;RL952:0.2829±0.0021 vs0.2611±0.0192),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Matriptase和HAI-1蛋白水平改變情況與m RNA水平相一致。3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,HEC-1A CON、KD和NC組遷移距離分別為(206.67±28.38)μm、(79.2±6.82)μm和(197.96±16.83)μm;RL952 CON CON、KD89873和NC組遷移距離分別為(184.57±21.97)μm、(76.8±5.48)μm和(175.34±14.73)μm;P(CON vs KD89873)0.001,P(CON vs NC)0.05。Person相關(guān)性分析顯示,Matriptase m RNA表達(dá)水平與遷移距離呈正相關(guān)(r HEC-1A=0.97,r RL952=0.982)。4.腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與CON組相比,KD組穿膜細(xì)胞數(shù)顯著減少(HEC-1A:139.25±12.3112 vs 48.6±4.8496;RL952:150±7.0710 vs 53.3±5.6376),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),NC組穿膜細(xì)胞數(shù)為(HEC-1A:132±8.3120;RL952:145±6.0711),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Person相關(guān)性分析顯示,Matriptase m RNA表達(dá)水平與穿膜細(xì)胞數(shù)亦呈正相關(guān)(r HEC-1A=0.975,r RL952=0.994)。5.Real-time q PCR結(jié)果顯示,不同濃度順鉑處理后Matriptase m RNA表達(dá)水平均表現(xiàn)為低濃度組表達(dá)水平增高(P0.05),高濃度組表達(dá)水平降低(P0.05);HEC-1A和RL952細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中HAI-1 m RNA表達(dá)水平呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì);HEC-1B細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中HAI-1 m RNA表達(dá)水平呈下降趨勢(shì)。各實(shí)驗(yàn)組Matriptase和HAI-1蛋白表達(dá)水平的改變與m RNA相吻合。6.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞不同濃度組改變趨勢(shì)相一致,即低濃度組子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移距離較空白株明顯增寬(P0.05),高濃度遷移距離顯著縮短(P0.05)。7.腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞不同濃度組改變趨勢(shì)相一致,即低濃度組子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)較空白株增多(P0.05),中濃度和高濃度組穿膜細(xì)胞數(shù)顯著減少(P0.05)。8.流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示,HEC-1A細(xì)胞濃度組(0、2、10、50 mg/L DDP)細(xì)胞存活率分別為84.4%、82.8%、75.0%和41.4%;HEC-1B細(xì)胞濃度組(0、2、10、50 mg/L DDP)細(xì)胞存活率分別為76.9%、73.5%、65.6%和31.8%;RL952細(xì)胞濃度組(0、1、2、5 mg/L DDP)細(xì)胞存活率分別為89.4%、86.3%、65.8%和31.1%;單因素方差分析,三組實(shí)驗(yàn)組組內(nèi)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FHEC-1A=34.548,PHEC-1A0.001;FHEC-1B=64.141,PHEC-1B0.001;FRL952=115.043,P RL9520.001),兩兩方差分析:PHEC-1A(0 mg/L vs 2 mg/L)=0.418,PHEC-1B(0 mg/L vs 2 mg/L)=0.412,P RL952(0 mg/L vs 1 mg/L)=0.418,余P值均小于0.05。結(jié)論:1.應(yīng)用RNAi技術(shù),特異性下調(diào)Matriptase基因表達(dá)水平,子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的侵襲遷移能力明顯受限,可見(jiàn)Matriptase表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲遷移能力密切相關(guān)。2.Matriptase和HAI-1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的侵襲遷移能力密切相關(guān),且此二者的表達(dá)水平與順鉑所致的腫瘤細(xì)胞凋亡比例相關(guān),可有望成為順鉑療效評(píng)估的指標(biāo)。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of Matriptase and HAI - 1 gene in three endometrial carcinoma cells , and to investigate the relationship between the expression of Matrixpression and HAI - 1 in human endometrial carcinoma cells . Compared with CON group , there was a slight increase in the level of mRNA expression in the KD group ( 184.57 鹵 21.97 ) 渭m , ( 76.8 鹵 6.82 ) 渭m and ( 175.34 鹵 14.73 ) 渭m ; P ( CON vs KD89873 ) 0.001 , P ( CON vs NC ) 0.05 . Person correlation analysis showed that there was significant difference in the expression level of the mRNA in the KD group compared with CON group ( P < 0.05 ) . The results showed that the survival rates of the cells in different concentration groups were 84.4 % , 82.8 % , 65.6 % and 41.4 % , respectively , and the survival rates of the cells of HEC - 1B were 89.4 % , 82.8 % , 65.6 % and 41.4 % , respectively . Conclusion : 1 . The expression level of Matriptase and HAI - 1 is closely related to the invasion and migration ability of endometrial carcinoma cells .

【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：1468731