本文關(guān)鍵詞： PLOD2 宮頸癌 轉(zhuǎn)移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 黏著斑　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景腫瘤缺氧及細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)的表達(dá)升高是惡性腫瘤的常見特征,二者均可促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生。腫瘤轉(zhuǎn)移是包括宮頸癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤患者死亡的首要原因。已有研究表明PLOD2基因編碼的賴氨酸羥化酶Ⅱ(LH2)在低氧環(huán)境和TGF-β1的刺激下表達(dá)升高,且在乳腺癌、肺癌、肉瘤、宮頸癌等多種腫瘤中高表達(dá),其高表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后密切相關(guān)。目的和意義本次研究的主要目的是通過體外實驗分析PLOD2基因?qū)m頸癌細(xì)胞株遷移侵襲能力的影響及其分子機制,并通過體內(nèi)實驗進(jìn)一步驗證PLOD2基因?qū)m頸癌轉(zhuǎn)移的促進(jìn)作用。研究的意義是為宮頸癌的侵襲轉(zhuǎn)移分子機制研究提供新的信息,為預(yù)后分析和分子治療提供新的靶點。研究方法使用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)靶向敲除宮頸癌HeLa細(xì)胞和SiHa細(xì)a細(xì)胞的PLOD2基因,通過Transwell實驗、劃痕實驗、基質(zhì)膠Transwell實驗、黏附實驗等分析PLOD2對細(xì)胞遷移、侵襲、粘附能力的影響;采用熒光定量PCR實驗、Western blot實驗、免疫熒光實驗分析基因的表達(dá)變化;通過鬼筆環(huán)肽染色等觀察細(xì)胞形態(tài)的變化;宮頸癌患者PLOD2基因的表達(dá)分析及預(yù)后分析通過數(shù)據(jù)庫Oncomine及TCGA獲得。最后,采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定穩(wěn)定沉默PLOD2基因的HeLa細(xì)胞株,通過尾靜脈注射穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建動物轉(zhuǎn)移模型,并進(jìn)行小動物活體實驗觀察PLOD2基因?qū)m頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響。研究結(jié)果低氧環(huán)境及TGF-β1的刺激均可誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞和SiHa細(xì)胞PLOD2基因的表達(dá)升高;通過siRNA技術(shù)靶向沉默PLOD2可降低細(xì)胞的遷移、侵襲和粘附能力,并抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生以及黏著斑的形成;此外,PLOD2的敲除還可以抑制缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移侵襲能力的提高;還可以通過抑制β-catenin的核轉(zhuǎn)位及AKT的磷酸化,阻遏TGF-β1誘導(dǎo)的EMT樣細(xì)胞表型改變。最后,數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果表明PLOD2基因在宮頸癌患者中高表達(dá)且提示不良預(yù)后。小動物活體成像實驗表明沉默PLOD2基因顯著抑制宮頸癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移灶的形成。結(jié)論缺氧及TGF-β 1誘導(dǎo)的PLOD2基因通過參與調(diào)節(jié)TGF-β 1誘導(dǎo)的EMT,以及細(xì)胞黏著斑的形成,促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移侵襲能力,從而推動宮頸癌的轉(zhuǎn)移及進(jìn)展。
[Abstract]:The effect of PLOD2 gene on cell migration , invasion and adhesion of cervical cancer cells was investigated by means of siRNA transfection .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

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