本文關(guān)鍵詞： miR-370 卵巢癌 化療劑cDDP ENG　出處：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：卵巢癌作為致命的婦科惡性腫瘤,造成每年在全世界范圍內(nèi)大約12.5萬人死亡,近年來,卵巢癌的起始和進(jìn)展包括在卵巢癌細(xì)胞中異常或失調(diào)的基因的分子機制研究正在深入進(jìn)行。越來越多證據(jù)表明微RNA (miRNAs)與卵巢癌的惡性增殖程度相關(guān),本論文發(fā)現(xiàn)miR-370在子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞中失調(diào),從其宮內(nèi)作用和其作用靶基因預(yù)測驗證兩個方面對其作用機制進(jìn)行進(jìn)一步的探究,進(jìn)一步提供新的針對這種惡性腫瘤治療的策略的線索。方法：本論文首先利用qRT-PCR和Northern Blotting實驗檢測子宮內(nèi)膜樣卵巢癌組織和細(xì)胞中的miR-370的異常表達(dá),然后進(jìn)行功能試驗檢測miR-370對子宮內(nèi)膜樣卵巢癌的影響,利用細(xì)胞克隆形成實驗和MTT實驗檢測miR-370對子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞系IGROV1和TOV112D增殖能力的影響,利用Transwell實驗檢測miR-370對兩株子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞系IGROV1和TOV112D遷移能力的影響,利用流氏細(xì)胞儀檢測miR-370對子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響,又利用Annexin V/PI雙染色法檢測miR-370對子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡的影響。接下來本論文利用生物信息學(xué)軟件TargetScan和miRanda對miR-370作用的功能靶基因進(jìn)行預(yù)測,預(yù)測到ENG基因是miR-370的靶標(biāo),接著首先本論文構(gòu)建含有ENG基因3'UTR-wt的質(zhì)粒,又利用雙熒光素報告基因?qū)iR-370作用的直接靶基因進(jìn)行驗證。又進(jìn)一步采用Western Blotting和免疫組織化學(xué)的方法檢測miR-370與ENG蛋白表達(dá)量之間的關(guān)系,同時進(jìn)一步驗證miR-370作用靶基因的方式及負(fù)相關(guān)性,文獻(xiàn)表明ENG蛋白與藥物的耐藥性相關(guān),計算miR-370對子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞的IC50值,觀察miR-370對藥物耐藥性的影響。最后又進(jìn)行細(xì)胞水平的營救實驗證實miR-370調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞的是通過靶向作用ENG基因?qū)崿F(xiàn)的,本論文又構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)miR-370的IGROV1/miR-370細(xì)胞株,進(jìn)行動物異體腫瘤移植模型,在體內(nèi)水平同時證實了miR-370可以抑制子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞的增殖,以及miR-370對化療藥物cDDP的敏感性的影響。結(jié)果：首先,與正常卵巢上皮細(xì)胞相比,miR-370在子宮內(nèi)膜樣卵巢癌組織或細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào),表明miR-370可能在惡性腫瘤中具有潛在的腫瘤抑制基因的作用。功能實驗表明miR-370在子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞系IGROV1和TOV112D中可以抑制細(xì)胞的增殖和細(xì)胞克隆形成,同時也能促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。第二,MIR-370和ENG在子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞系中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,miR-370可以直接靶向降低ENG蛋白的表達(dá),,過度表達(dá)miR-370的子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞可使這些細(xì)胞對化療藥物順鉑更加敏感,進(jìn)一步突出了miR-370的潛在的抗腫瘤作用。然而,當(dāng)細(xì)胞經(jīng)另一種化療劑紫杉醇處理,miR-370并不影響其對子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞的敏感性。第三,細(xì)胞水平的營救實驗表明miR-370對子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞的增殖抑制和克隆形成能力的影響是通過影響ENG蛋白的表達(dá)而實現(xiàn)的。接下來的在體內(nèi)動物異體腫瘤移植模型動物實驗結(jié)果表明,由過表達(dá)miR-370的卵巢癌細(xì)胞IGROV1成長起來的異體移植的腫瘤與對照組的腫瘤相比有一個更低的增長率。這些有趣的結(jié)果引起了本論文去尋找鑒定miR-370的功能靶基因以及對miR-370和它的靶基因在上皮性卵巢癌的調(diào)控機制的研究。結(jié)論：總的來說,本論文揭示了子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞中的一個新的調(diào)控途徑：miR-370在子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞中的低表達(dá)水平,同時可以提高其直接靶基因ENG的表達(dá)。ENG的過表達(dá)會增強子宮內(nèi)膜樣卵巢癌細(xì)胞的惡性增殖程度,包括高水平增殖能力、低水平細(xì)胞凋亡或細(xì)胞死亡能力、并增強順鉑的耐藥性。這方面的研究可能會揭示miRNA調(diào)節(jié)卵巢癌的機制,也可能有助于開發(fā)新的治療策略來克服這種惡性腫瘤。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of miR - 370 on the proliferation of ovarian carcinoma cell line IGROV1 and TOV112D in ovarian cancer cells . At the same time , the expression of direct target gene ENG can be improved . The overexpression of ENG can enhance the malignant proliferation degree of endometrial ovarian cancer cells , including high - level proliferative ability , low - level cell apoptosis or cell death capacity , and enhance cisplatin resistance . The research in this area may reveal the mechanism of miRNA regulation of ovarian cancer , and may also help to develop new treatment strategies to overcome this malignant tumor .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李立亮;趙子琴;;microRNA在心血管疾病中的作用及其法醫(yī)學(xué)意義[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

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本文編號：1459365