本文關(guān)鍵詞：S100A4與卵巢癌鉑類耐藥的相關(guān)性研究　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景和目的 卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤之一，其中卵巢上皮惡性腫瘤為最常見的卵巢腫瘤，其在婦科腫瘤中致死率最高。由于卵巢特殊的解剖學(xué)位置，所以卵巢癌患者早期常常沒有明顯癥狀，起病隱匿，臨床中又缺乏有效的早期診斷，當(dāng)確診時大多患者已為晚期。目前理想的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和術(shù)后以鉑類為主的聯(lián)合化療是卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。多數(shù)患者可對首次術(shù)后的化療敏感，但是隨著化療的進(jìn)行，患者出現(xiàn)多藥耐藥，使卵巢癌患者的生存率仍未見明顯提高。因此，對于如何實現(xiàn)耐藥逆轉(zhuǎn)、提高化療藥物敏感性一直是卵巢癌治療研究的熱點。 鈣結(jié)合蛋白S100家族中鈣結(jié)合蛋白S100A4（S100calcium-binding proteinA4）是重要的成員之一。大量的研究證明，S100A4在許多惡性腫瘤中呈高表達(dá)，且被認(rèn)為與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移和侵襲、以及患者的預(yù)后相關(guān)的蛋白。我們推測S100A4在腫瘤基因治療方面有不錯的應(yīng)用前景，可能成為逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的靶點。本實驗室在前期實驗中，已證實在人卵巢癌順鉑敏感細(xì)胞株A2780中S100A4呈低表達(dá)，而在順鉑耐藥株CP70中呈高表達(dá)，用順鉑處理卵巢癌耐藥株CP70細(xì)胞后，S100A4可以隨著作用時間的延長，S100A4的表達(dá)量有上升的趨勢；綜合前期的實驗結(jié)果，我們推測S100A4可能與卵巢癌耐藥有密切關(guān)系。因此，本研究通過觀察卵巢上皮癌患者癌組織標(biāo)本中S100A4的表達(dá)，以及利用S100A4重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染卵巢癌A2780細(xì)胞和S100A4siRNA轉(zhuǎn)染卵巢癌CP70細(xì)胞,即上調(diào)和下調(diào)S100A4基因的表達(dá)，繼而檢測卵巢癌細(xì)胞相應(yīng)的生物學(xué)功能的改變，了解該基因與卵巢癌鉑類耐藥的相關(guān)性，為卵巢癌基因治療提供新的思路。 研究內(nèi)容 1.結(jié)合病人臨床資料與美國婦科腫瘤學(xué)組分型建議，將卵巢上皮癌患者分為鉑類耐藥組和鉑類敏感組，利用免疫組織化學(xué)法對S100A4基因進(jìn)行檢測，探討S100A4與卵巢上皮癌耐藥的相關(guān)性。 2.利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)將S100A4-pEGFP-N1重組質(zhì)粒和S100A4siRNA分別轉(zhuǎn)入A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞；利用qRT-PCR和Western Blot分別檢測轉(zhuǎn)染后卵巢癌A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞中S100A4在mRNA和蛋白水平的變化； 3. MTT法分別繪制卵巢癌A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染S100A4-pEGFP-N1重組質(zhì)粒和S100A4siRNA后細(xì)胞對順鉑敏感性的變化； 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染S100A4-pEGFP-N1重組質(zhì)粒和S100A4siRNA后在順鉑作用下，S100A4上調(diào)或下調(diào)后對卵巢癌A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞凋亡的影響； 5.流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染S100A4-pEGFP-N1重組質(zhì)粒和S100A4siRNA后對卵巢癌A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞周期的影響； 6. Transwell法觀察轉(zhuǎn)染S100A4-pEGFP-N1重組質(zhì)粒和S100A4siRNA后對卵巢癌A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞遷移侵襲能力的影響。 研究結(jié)果 1.卵巢癌中S100A4的表達(dá)明顯高于正常卵巢組織，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)卵巢癌鉑類耐藥組中S100A4高表達(dá)和核表達(dá)比例明顯高于鉑類敏感組患者，兩者之間比較，差異有意義（P＜0.05）。 2.利用qRT-PCR和Western Blot驗證S100A4重組質(zhì)粒S100A4-pEGFP-N1和S100A4siRNA分別有效的上調(diào)A2780細(xì)胞和下調(diào)CP70細(xì)胞中S100A4的表達(dá)。 3.轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒S100A4-pEGFP-N1，MTT法檢測轉(zhuǎn)染后A2780細(xì)胞對順鉑敏感性顯著下降（P＜0.05），上調(diào)S100A4的表達(dá)后，A2780細(xì)胞對順鉑的敏感性下降了約2.69倍。 4.轉(zhuǎn)染S100A4siRNA后CP70細(xì)胞對順鉑敏感性顯著增強（P＜0.05），抑制S100A4的表達(dá)后，CP70細(xì)胞對順鉑的敏感性增強了1.90倍。 5. S100A4-pEGFP-N1轉(zhuǎn)染組和陰性對照組相比，細(xì)胞凋亡率下降；S100A4siRNA轉(zhuǎn)染組和陰性對照組相比，凋亡率有所增加。 6. S100A4-pEGFP-N1轉(zhuǎn)染組與其他兩組比較，G1期比例下降，G2+S期比例增加；在S100A4siRNA轉(zhuǎn)染組中G1期比例增加，，G2+S期比例下降。 7. Transwell實驗觀察S100A4-pEGFP-N1轉(zhuǎn)染組穿膜細(xì)胞數(shù)顯著增多（P＜0.05）A2780細(xì)胞侵襲能力顯著增強；S100A4siRNA轉(zhuǎn)染組中穿膜細(xì)胞數(shù)顯著減少（P＜0.05），CP70細(xì)胞侵襲能力降低。 結(jié)論： 在本實驗中,研究發(fā)現(xiàn)在組織水平中S100A4在卵巢癌中多呈高表達(dá)，S100A4在細(xì)胞內(nèi)的定位與卵巢癌患者鉑類耐藥具有相關(guān)性。利用實驗室前期構(gòu)建S100A4-pEGFP-N1重組質(zhì)粒和S100A4siRNA從細(xì)胞水平觀察對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)特性、轉(zhuǎn)移和侵襲能力及鉑類敏感性的影響。上調(diào)S100A4可增強卵巢癌細(xì)胞對順鉑的耐藥性；并且上調(diào)S100A4的表達(dá)可進(jìn)一步的為S100A4參與卵巢癌鉑類耐藥機制提供證據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1439544