本文關鍵詞：S100A4與卵巢癌鉑類耐藥的相關性研究　出處：《第四軍醫(yī)大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究背景和目的 卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤之一，其中卵巢上皮惡性腫瘤為最常見的卵巢腫瘤，其在婦科腫瘤中致死率最高。由于卵巢特殊的解剖學位置，所以卵巢癌患者早期常常沒有明顯癥狀，起病隱匿，臨床中又缺乏有效的早期診斷，當確診時大多患者已為晚期。目前理想的腫瘤細胞減滅術和術后以鉑類為主的聯合化療是卵巢癌的標準治療方案。多數患者可對首次術后的化療敏感，但是隨著化療的進行，患者出現多藥耐藥，使卵巢癌患者的生存率仍未見明顯提高。因此，對于如何實現耐藥逆轉、提高化療藥物敏感性一直是卵巢癌治療研究的熱點。 鈣結合蛋白S100家族中鈣結合蛋白S100A4（S100calcium-binding proteinA4）是重要的成員之一。大量的研究證明，S100A4在許多惡性腫瘤中呈高表達，且被認為與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉移和侵襲、以及患者的預后相關的蛋白。我們推測S100A4在腫瘤基因治療方面有不錯的應用前景，可能成為逆轉腫瘤耐藥的靶點。本實驗室在前期實驗中，已證實在人卵巢癌順鉑敏感細胞株A2780中S100A4呈低表達，而在順鉑耐藥株CP70中呈高表達，用順鉑處理卵巢癌耐藥株CP70細胞后，S100A4可以隨著作用時間的延長，S100A4的表達量有上升的趨勢；綜合前期的實驗結果，我們推測S100A4可能與卵巢癌耐藥有密切關系。因此，本研究通過觀察卵巢上皮癌患者癌組織標本中S100A4的表達，以及利用S100A4重組質粒轉染卵巢癌A2780細胞和S100A4siRNA轉染卵巢癌CP70細胞,即上調和下調S100A4基因的表達，繼而檢測卵巢癌細胞相應的生物學功能的改變，了解該基因與卵巢癌鉑類耐藥的相關性，為卵巢癌基因治療提供新的思路。 研究內容 1.結合病人臨床資料與美國婦科腫瘤學組分型建議，將卵巢上皮癌患者分為鉑類耐藥組和鉑類敏感組，利用免疫組織化學法對S100A4基因進行檢測，探討S100A4與卵巢上皮癌耐藥的相關性。 2.利用細胞轉染技術將S100A4-pEGFP-N1重組質粒和S100A4siRNA分別轉入A2780細胞和CP70細胞；利用qRT-PCR和Western Blot分別檢測轉染后卵巢癌A2780細胞和CP70細胞中S100A4在mRNA和蛋白水平的變化； 3. MTT法分別繪制卵巢癌A2780細胞和CP70細胞分別轉染S100A4-pEGFP-N1重組質粒和S100A4siRNA后細胞對順鉑敏感性的變化； 4.流式細胞術檢測轉染S100A4-pEGFP-N1重組質粒和S100A4siRNA后在順鉑作用下，S100A4上調或下調后對卵巢癌A2780細胞和CP70細胞凋亡的影響； 5.流式細胞術檢測轉染S100A4-pEGFP-N1重組質粒和S100A4siRNA后對卵巢癌A2780細胞和CP70細胞周期的影響； 6. Transwell法觀察轉染S100A4-pEGFP-N1重組質粒和S100A4siRNA后對卵巢癌A2780細胞和CP70細胞遷移侵襲能力的影響。 研究結果 1.卵巢癌中S100A4的表達明顯高于正常卵巢組織，進一步發(fā)現卵巢癌鉑類耐藥組中S100A4高表達和核表達比例明顯高于鉑類敏感組患者，兩者之間比較，差異有意義（P＜0.05）。 2.利用qRT-PCR和Western Blot驗證S100A4重組質粒S100A4-pEGFP-N1和S100A4siRNA分別有效的上調A2780細胞和下調CP70細胞中S100A4的表達。 3.轉染重組質粒S100A4-pEGFP-N1，MTT法檢測轉染后A2780細胞對順鉑敏感性顯著下降（P＜0.05），上調S100A4的表達后，A2780細胞對順鉑的敏感性下降了約2.69倍。 4.轉染S100A4siRNA后CP70細胞對順鉑敏感性顯著增強（P＜0.05），抑制S100A4的表達后，CP70細胞對順鉑的敏感性增強了1.90倍。 5. S100A4-pEGFP-N1轉染組和陰性對照組相比，細胞凋亡率下降；S100A4siRNA轉染組和陰性對照組相比，凋亡率有所增加。 6. S100A4-pEGFP-N1轉染組與其他兩組比較，G1期比例下降，G2+S期比例增加；在S100A4siRNA轉染組中G1期比例增加，，G2+S期比例下降。 7. Transwell實驗觀察S100A4-pEGFP-N1轉染組穿膜細胞數顯著增多（P＜0.05）A2780細胞侵襲能力顯著增強；S100A4siRNA轉染組中穿膜細胞數顯著減少（P＜0.05），CP70細胞侵襲能力降低。 結論： 在本實驗中,研究發(fā)現在組織水平中S100A4在卵巢癌中多呈高表達，S100A4在細胞內的定位與卵巢癌患者鉑類耐藥具有相關性。利用實驗室前期構建S100A4-pEGFP-N1重組質粒和S100A4siRNA從細胞水平觀察對卵巢癌細胞生物學特性、轉移和侵襲能力及鉑類敏感性的影響。上調S100A4可增強卵巢癌細胞對順鉑的耐藥性；并且上調S100A4的表達可進一步的為S100A4參與卵巢癌鉑類耐藥機制提供證據。
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【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.31

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 高靜;辛曉燕;張穎;;S100A4與卵巢癌細胞順鉑耐藥相關性的研究[J];現代婦產科進展;2012年04期

相關博士學位論文 前1條

1 張穎;雙功能酶APE1/Ref-1參與卵巢癌鉑類耐藥的機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2011年

本文編號：1439544