本文關(guān)鍵詞：不同冷凍方法對人精子受精能力的影響　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：精子冷凍技術(shù)可以有效地保存男性生育能力,與輔助生殖技術(shù)結(jié)合使用為眾多不孕夫婦帶來了新希望。經(jīng)過專家學(xué)者們多年來不懈的研究和探索,目前有多種冷凍方法可供選擇,包括程序化慢速冷凍、液氮蒸汽冷凍以及精子玻璃化冷凍等,各種方法各有優(yōu)缺點,程序化冷凍效果值得肯定,但儀器價格高昂,操作費時;液氮蒸汽法利用液氮蒸汽產(chǎn)生的溫度梯度進行冷凍,因其操作簡便、耗時較少得到廣泛應(yīng)用,但冷凍速率不夠穩(wěn)定可能會對精子產(chǎn)生損傷;玻璃化冷凍技術(shù)通過超高降溫速率減少胞內(nèi)冰晶形成帶來的機械損傷,不使用高濃度的冷凍保護劑,減小了對精子的滲透性損傷,復(fù)蘇后精子活力、活率、精子核DNA完整率得到提高,但冷凍體積小,常用于嚴(yán)重少弱精子癥和睪丸附睪穿刺取精患者微量精子的保存。因此,如何增加玻璃化冷凍的體積,從而將玻璃化冷凍應(yīng)用于常規(guī)精液成為精子冷凍技術(shù)的研究熱點。目的:使用常規(guī)塑料冷凍管作為載體對正常人群精液進行大體積快速冷凍和常規(guī)液氮蒸汽冷凍,觀察比較兩組精液冷凍前后精子活力、存活率、形態(tài)、頂體酶含量、精子核DNA完整性等參數(shù)的變化。通過與常規(guī)冷凍技術(shù)進行比較,探討分析大體積精液快速冷凍對精子受精能力的影響,以及該技術(shù)在臨床應(yīng)用的可行性。方法:精液標(biāo)本取自2016年9月~2017年1月期間就診于河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科的35位患者,患者無梅毒、艾滋、乙肝等傳染疾病,在征得患者同意后進行實驗。患者年齡27~38歲,禁欲時間控制在2~7天,通過手淫法收集精液于無菌取精杯中,待精液液化后,根據(jù)《世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第五版)對樣本進行精液常規(guī)分析和形態(tài)學(xué)檢查。納入標(biāo)準(zhǔn):液化時間≤1h,精液量≥1.5ml,精子濃度≥40×106/ml,活動率≥40%。將符合標(biāo)準(zhǔn)的精液樣本進行密度梯度離心處理,處理后精子懸液平均分為3組:A組,新鮮精液組;B組,采用常規(guī)液氮蒸汽法,使用自制蛋黃-甘油-檸檬酸鈉精子冷凍液冷凍;C組,采用大體積快速冷凍法,使用蔗糖溶液冷凍,與精液混合后蔗糖終濃度為0.25M。B、C兩組中精液與保護劑比例為1:1,逐滴向精液中加入冷凍保護劑,邊加入邊搖晃。精液標(biāo)本冷凍儲存1周后,從液氮中取出,立即放入36℃水浴箱內(nèi)解凍復(fù)溫10分鐘,加入1ml洗精液(36℃、6%CO2平衡過夜),200g離心10分鐘,棄上清,加入0.5ml洗精液重懸精子。對各組精液活力、存活率、形態(tài)、頂體酶含量、精子核DNA完整性、處理后前向運動精子總數(shù)(Post-wash total mobile sperm count,PTMC)進行檢測。結(jié)果:1冷凍后前向運動精子百分比、存活率、精子DNA完整性、頂體酶含量均低于新鮮精液,畸形率則高于新鮮組,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。2 C組前向運動精子百分比、存活率、處理后前向運動精子總數(shù)稍高于B組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P均0.05。3 B組精子畸形率高于C組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。4 C組精子DNA完整性稍高于B組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。5 C組精子頂體酶活性高于B組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。結(jié)論:以常規(guī)塑料冷凍管為載體,蔗糖溶液作為冷凍保護劑,對密度梯度離心處理后精液進行大體積快速玻璃化冷凍,可以取得與常規(guī)冷凍法相同的效果,并沒有對精子受精能力產(chǎn)生過多額外的影響,復(fù)蘇后前向運動精子總數(shù)可以滿足人工授精要求。且這種冷凍方法操作更加簡便,無需制備特殊的冷凍載體,耗時更少,價格低廉。
[Abstract]:This paper deals with the changes of sperm motility , survival , morphology , acrosomal enzyme content , sperm nuclear DNA integrity and so on . The results show that the freezing rate of semen is less than 1h , the sperm concentration is 鈮，

本文編號：1438925