本文關鍵詞：Lgr5與β-catenin在卵巢上皮性癌中的表達及對SKOV3細胞增殖遷移的影響　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： G蛋白偶聯(lián)受體(LGR5) β-catenin 卵巢上皮性癌 細胞增殖

【摘要】：背景與目的卵巢癌(ovarian cancer)是女性生殖器官三大惡性腫瘤之一,病理類型以上皮性腫瘤為主。卵巢癌的發(fā)病概率列居第三位,僅次于宮頸癌和子宮內膜癌,但其惡性程度最高,致死率位居第一,是婦女生命健康的最大殺手。雖然近年來有關卵巢癌的研究取得很大進展,但其發(fā)病機制尚不完全清楚。解決卵巢癌早期診斷,控制復發(fā)、轉移和化療耐藥等問題成為卵巢癌研究的熱點。G蛋白偶聯(lián)受體(leucine-rich repeat-containing g-protein coupled receptor5,Lgr5)在胚胎發(fā)育和成體干細胞自我更新及維持中起重要作用,是多種組織和成體干細胞的標志物。研究表明,Lgr5可以加速細胞周期,促進細胞增殖,在許多惡性腫瘤(如胃腸道腫瘤、肝癌、基底細胞癌、宮頸癌等)中高表達,而正常組織中表達量較低。Wnt/β-catenin信號通路與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關,其核心分子β-catenin的異常高表達可能參與腫瘤干細胞的形成,影響卵巢癌患者的化療耐受、腫瘤的復發(fā)、轉移及預后。近年來研究發(fā)現(xiàn),Lgr5在甲狀腺癌、宮頸癌中可能通過上調β-catenin的表達以促進腫瘤細胞的增殖和遷移能力。因此,本研究對卵巢上皮性癌組織中Lgr5、β-catenin的表達以及靶向抑制Lgr5表達對對卵巢癌細胞SKOV3增殖遷移能力的影響進行了觀察。方法實驗收集了鄭州大學第三附屬醫(yī)院2014年至2015年確診卵巢癌患者30例,利用免疫組織化學技術檢測Lgr5和β-catenin蛋白在卵巢癌組織中的表達情況。對卵巢癌SKOV3細胞轉染靶向LGR5基因的干擾RNA(sh RNA),實驗分為三組:空白對照組(未轉染對照組)、陰性對照組(NC sh RNA轉染組)和實驗組(LGR5 sh RNA轉染組)。Western Blot方法檢測各組細胞處理前后lgr5和β-catenin蛋白表達水平,RT-PCR檢測Lgr5和β-catenin的m RNA相對表達水平,分別采用CCK-8和劃痕試驗檢測SKOV3細胞的增殖、遷移能力。采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理,各組定性資料間分別采用卡方檢驗,定量資料以均數(shù)±標準差表示,符合正態(tài)分布的兩組數(shù)據(jù)間比較采用獨立樣本t檢驗,兩組定性資料間的關聯(lián)性分析采用Spearman分析。以α=0.05作為檢驗水準。結果卵巢癌組織的Lgr5陽性表達率為63.3%(19/30),β-catenin陽性表達率83.3%(25/30)二者表達水平均較良性腫瘤組、正常組顯著升高(P0.05),且兩者呈正相關(rs=0.40,P0.05);實驗組SKOV3細胞轉染sh RNA靶向沉默LGR5后,與空白對照組、陰性轉染對照組相比,LGR5和β-catenin的m RNA水平均顯著降低(P0.05);Lgr5和β-catenin的蛋白水平均顯著降低(P0.05);靶向抑制LGR5表達后SKOV3細胞的增殖能力和遷移能力顯著降低(P0.05)。結論(1)Lgr5和β-catenin在卵巢上皮性癌中均特異性高表達,且呈正相關性,提示兩者可能起協(xié)同作用,參與上皮性卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。(2)在卵巢癌SKOV3細胞中Lgr5與β-catenin的表達密切相關,提示Lgr5可能通過調節(jié)β-catenin對SKOV3細胞發(fā)生作用。(3)在卵巢癌SKOV3細胞中Lgr5可能協(xié)同β-catenin調控細胞增殖及遷移能力。
[Abstract]:Background and objective: ovarian cancer (ovarian cancer) is one of the three malignant tumors of the female reproductive organs, pathological types of tumor. The skin above the incidence of ovarian cancer ranks the third, after cervical cancer and endometrial cancer, but the highest degree of malignancy and mortality ranked first, is the biggest killer of women's health. Although in recent years, great progress on research related to ovarian cancer, but its pathogenesis is not clear. To solve the early diagnosis of ovarian cancer, recurrence, metastasis and chemotherapy resistance problem has become a hot spot of.G protein coupled receptor in ovarian cancer research (leucine-rich repeat-containing G-protein coupled Receptor5, Lgr5) in embryonic and adult stem cells self renewal and maintenance plays an important role, is a variety of tissues and adult stem cell markers. The results show that Lgr5 can accelerate cell cycle, promote cell proliferation, in Many malignant tumors (such as gastrointestinal tumor, hepatocellular carcinoma, basal cell carcinoma, cervical cancer) is highly expressed in normal tissues, and the expression of the occurrence and development of low amount of.Wnt/ beta -catenin signal pathway and tumor is closely related to abnormal expression of the core molecule beta -catenin may be involved in the formation of cancer stem cells, effect of chemotherapy tolerance ovarian cancer, tumor recurrence, metastasis and prognosis. In recent years, the study found that Lgr5 in thyroid cancer, may be to promote the proliferation and migration of tumor cells through upregulating the expression of beta -catenin in cervical cancer. Therefore, the study of Lgr5 in epithelial ovarian cancer, -catenin expression and targeting effect of Lgr5 expression on migration ability of ovarian cancer cell SKOV3 proliferation were observed. Methods the experiment collected 30 cases of the Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University from 2014 to 2015 were diagnosed with ovarian cancer by immunohistochemistry The expression of textile chemical detection of Lgr5 and beta -catenin protein in ovarian cancer tissues. The ovarian cancer cells were transfected with SKOV3 targeting RNA LGR5 gene (SH RNA), were divided into three groups: blank control group (blank control group), negative control group (NC sh RNA transfection group) and experimental group (LGR5 SH RNA.Western Blot transfection group) method for the detection of cells in each group before and after treatment of Lgr5 and beta -catenin protein expression level, the relative expression level of M RNA RT-PCR detection of Lgr5 and beta -catenin, SKOV3 cells were used to detect CCK-8 and scratch test proliferation, migration ability. The data were analyzed with SPSS22.0 statistical software, group the qualitative data were chi square test, quantitative data to mean + standard deviation that is consistent with the data of the two groups of normal distribution were compared using independent samples t test, correlation analysis between two groups of qualitative data using Spearman A =0.05 analysis. As the standard test. Results the positive expression of Lgr5 in ovarian cancer tissue was 63.3% (19/30), beta -catenin positive expression rate was 83.3% (25/30) expression level were benign tumor group two, normal group increased significantly (P0.05), and there is a positive correlation (rs=0.40, P0.05); group SKOV3 the SH cell targeting RNA LGR5, compared with the blank control group, negative control group transfected with -catenin, LGR5 and beta m RNA levels were significantly decreased (P0.05); protein levels of Lgr5 and beta -catenin were significantly decreased (P0.05); targeting ability of proliferation and migration of SKOV3 cells after inhibition of LGR5 expression decreased significantly (P0.05). Conclusion (1) Lgr5 and beta -catenin in epithelial ovarian cancer were highly specific expression, and positive correlation, suggesting that they may play a synergistic effect, participate in the occurrence and development of epithelial ovarian cancer. (2) Lgr5 and ~ -catenin in SKOV3 cells of ovarian cancer Expression is closely related, suggesting that Lgr5 may play a role in regulating SKOV3 cells by regulating beta -catenin. (3) in ovarian cancer SKOV3 cells, Lgr5 may cooperate with beta -catenin to regulate cell proliferation and migration.

【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

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