發(fā)布時間：2017-12-06 04:15

  本文關鍵詞：SDF-1在豬小腸黏膜下基質代陰道中的表達研究

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【摘要】：目的:有研究表明,在損傷中,來自損傷器官的細胞高度表達基質細胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)并引起局部SDF-1水平的增高,這會導致CD34+表達的干/祖細胞通過SDF-1濃度梯度的趨化作用在損傷部位募集與停留,并參與到組織損傷修復中。本實驗的主要研究目的為探討SDF-1在豬小腸黏膜下基質代陰道中隨時間的變化規(guī)律,指導外源性干細胞移植的最佳時機。方法:選取體重在200g-250g雌性SD大鼠,手術切除正常陰道組織,將豬小腸黏膜下基質(Small intestinal submucosa,SIS)植入切除陰道組織后形成的腔穴內,同時放入模具支撐,以防止閉鎖。SIS的頂端與宮頸外口相連,底端與陰道外口切緣縫合。在術后1天、3天、5天、7天、14天處死動物,取出重建的陰道組織。檢測SDF-1在基因和蛋白水平上的表達變化:1提取各個時間點重建陰道組織和正常陰道組織的總RNA,各取4μl,分別與2μl溴酚藍混合,在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳,當溴酚藍電泳出一段距離后,移至紫外線透視儀在波長為300nm的光照射下進行觀察,檢測RNA的完整性。RNA完整性檢測合格后再行RT-q PCR,檢測SDF-1的在基因水平的表達情況。2提取不同時間點重建陰道組織和正常陰道組織的蛋白質,通過Western blotting方法檢測各個時間點的SDF-1在蛋白水平的表達變化。結果:1分別提取正常陰道組織、術后第1天、3天、5天、7天、14天的重建陰道組織總RNA后,RNA的電泳帶28s、18.5s、8s清晰,證實提取的RNA完整性良好。2反應完成后將所有的總RNA用全波長紫外/可見光掃描分光光度計進行擴增曲線分析,SDF-1和GAPDH的擴增曲線指數增長期基本平行,提示擴增效率基本一致,結果以GAPDH作為內參進行相對定量分析,按公式X_0=2~(Ct GAPDH-Ct),計算目的基因的相對表達量,結果顯示在手術植入SIS支架后,SDF-1的表達呈上升趨勢,SDF-1的表達量在術后第5天達到高峰,第7天開始下降。3 Western blotting檢測結果顯示手術切除大鼠陰道并植入SIS支架后第5天SDF-1的表達量達到峰值,術后第7天開始下降,進一步驗證了RT-q PCR的結果。結論:通過手術方法切除大鼠陰道并置入SIS后,損傷部位代陰道組織的SDF-1表達隨時間推移呈上升趨勢,在術后第5天達到高峰,第7天SDF-1的表達量開始下降,推測SDF-1對干/祖細胞遷移的趨化作用在術后第5天最強,研究結果為干細胞治療時移植外源性干細胞窗口期的選擇提供了依據。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R713

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前9條

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本文編號：1257320