本文關鍵詞：重疊PCR法構建PTEN基因3位點的融合重組載體

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【摘要】：目的構建包含與子宮內(nèi)膜癌相關的PTEN基因3位點的重組p MD19-exon 5-exon 8載體。方法以健康人全基因組DNA為模板,設計2對有重疊區(qū)的特異性引物分別擴增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重疊PCR技術,將exon 5和exon 8片段進行連接,再將連接產(chǎn)物exon 5-exon 8片段插入p MD19-T質(zhì)粒,構建成重組p MD19-exon 5-exon 8載體,轉化入大腸埃希菌感受態(tài)細胞DH5α進行表達,利用菌液PCR和基因組測序進行鑒定。結果 exon 5-exon 8片段經(jīng)凝膠電泳檢測,可在1 253 bp處見一清晰的目的條帶,PTEN基因融合重組質(zhì)粒經(jīng)菌液PCR及測序結果鑒定,均與預期結果一致。結論應用重疊PCR法將exon 5和exon 8片段進行融合,并成功構建了PTEN基因融合重組表達載體。
【作者單位】： 南華大學藥物藥理研究所;
【基金】：國家自然科學基金(81102516) 南華大學研究生創(chuàng)新項目(2016XCX36) 湖南省醫(yī)藥衛(wèi)生科研計劃項目(C2016083)
【分類號】：R737.33;R730.43
【正文快照】： 號染色體同源丟失性磷酸酶-張力蛋白基因)是繼P53后發(fā)現(xiàn)的又一抑癌基因,在子宮內(nèi)膜癌中突變率較高。通過COSMIC癌癥體細胞數(shù)據(jù)庫查找及參考文獻[1-4]對子宮內(nèi)膜癌中PTEN基因的突變譜進行分析,發(fā)現(xiàn)其突變主要發(fā)生在第5外顯子(exon5)的C388G、G389T和第8外顯子(exon 8)的968del

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本文編號：1251277