本文關(guān)鍵詞：重疊PCR法構(gòu)建PTEN基因3位點(diǎn)的融合重組載體

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【摘要】：目的構(gòu)建包含與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)的PTEN基因3位點(diǎn)的重組p MD19-exon 5-exon 8載體。方法以健康人全基因組DNA為模板,設(shè)計(jì)2對(duì)有重疊區(qū)的特異性引物分別擴(kuò)增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重疊PCR技術(shù),將exon 5和exon 8片段進(jìn)行連接,再將連接產(chǎn)物exon 5-exon 8片段插入p MD19-T質(zhì)粒,構(gòu)建成重組p MD19-exon 5-exon 8載體,轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α進(jìn)行表達(dá),利用菌液PCR和基因組測(cè)序進(jìn)行鑒定。結(jié)果 exon 5-exon 8片段經(jīng)凝膠電泳檢測(cè),可在1 253 bp處見(jiàn)一清晰的目的條帶,PTEN基因融合重組質(zhì)粒經(jīng)菌液PCR及測(cè)序結(jié)果鑒定,均與預(yù)期結(jié)果一致。結(jié)論應(yīng)用重疊PCR法將exon 5和exon 8片段進(jìn)行融合,并成功構(gòu)建了PTEN基因融合重組表達(dá)載體。
【作者單位】： 南華大學(xué)藥物藥理研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81102516) 南華大學(xué)研究生創(chuàng)新項(xiàng)目(2016XCX36) 湖南省醫(yī)藥衛(wèi)生科研計(jì)劃項(xiàng)目(C2016083)
【分類號(hào)】：R737.33;R730.43
【正文快照】： 號(hào)染色體同源丟失性磷酸酶-張力蛋白基因)是繼P53后發(fā)現(xiàn)的又一抑癌基因,在子宮內(nèi)膜癌中突變率較高。通過(guò)COSMIC癌癥體細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)查找及參考文獻(xiàn)[1-4]對(duì)子宮內(nèi)膜癌中PTEN基因的突變譜進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其突變主要發(fā)生在第5外顯子(exon5)的C388G、G389T和第8外顯子(exon 8)的968del

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1251277