本文關(guān)鍵詞：腺病毒介導(dǎo)Foxo3a基因?qū)樸K所致的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞及竇前卵泡損傷的研究

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【摘要】：研究背景卵巢早衰(Premature Ovarian Failure, POF)是指女性在40歲以前發(fā)生的以閉經(jīng)、不育、雌激素缺乏及促性腺激素水平升高為特征的一種疾病。目前已知的病因有遺傳因素、自身免疫性疾病、醫(yī)源性損傷如化療、放療或手術(shù)所致的卵巢血供不良,或特發(fā)性原因引起。其中,化療性卵巢早衰(Chemotherapy-induced Premature Ovarian Failure, CIPOF)是導(dǎo)致POF的一個(gè)重要因素。眾所周知,化療藥物通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等多種機(jī)制抑制癌細(xì)胞增殖,從而改善腫瘤患者預(yù)后、延長(zhǎng)生存期。但不可置否,化療藥物的細(xì)胞毒性尤其是生殖毒性可對(duì)卵巢功能產(chǎn)生不良影響。研究表明,約有70-90%接受化療的女性腫瘤患者出現(xiàn)不同程度的卵巢功能受損。當(dāng)化療藥物破壞僅成熟卵泡時(shí)引起的閉經(jīng)通常為可逆性,但當(dāng)原始卵泡被破壞時(shí)則會(huì)導(dǎo)致持續(xù)閉經(jīng)或卵巢早衰,卵巢功能大多不能恢復(fù)。隨著女性罹患卵巢惡性腫瘤年輕化的趨勢(shì),卵巢功能提前衰退不僅降低了患者的生育能力,同時(shí)導(dǎo)致圍絕經(jīng)期綜合征提前發(fā)生、生活質(zhì)量下降,進(jìn)而引起一系列心理及社會(huì)問(wèn)題。目前針對(duì)化療性卵巢早衰的應(yīng)對(duì)措施有藥物治療、冷凍保存胚胎、冷凍卵母細(xì)胞、冷凍卵巢組織、卵巢組織移植、干細(xì)胞治療等。其中GnRH類(lèi)似物主要通過(guò)抑制性腺軸從而降低卵巢細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性,但因其具有“起爆效應(yīng)”,即在早期應(yīng)用時(shí)可刺激促性腺激素短暫升高,使卵巢細(xì)胞對(duì)化療藥物更為敏感,故應(yīng)在化療前1-2周使用較好,但這又違背了腫瘤“早發(fā)現(xiàn)早治療”的原則；同時(shí)對(duì)于罹患激素依賴(lài)性惡性腫瘤患者及化療劑量較高的患者在使用GnRH的安全性及有效性還存在爭(zhēng)議。卵巢組織冷凍、卵巢組織移植即干細(xì)胞治療等技術(shù)雖具有一定的發(fā)展前景,但由于此類(lèi)技術(shù)尚處于實(shí)驗(yàn)階段,其臨床療效、生物倫理及安全性仍需進(jìn)一步研究。因此,降低卵巢細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性從而降低化療藥物的細(xì)胞毒作用的同時(shí),又不影響化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,是解決化療性卵巢衰竭的關(guān)鍵。女性卵巢功能衰退的主要原因是卵泡數(shù)量和質(zhì)量的下降,其中卵巢始基卵泡的庫(kù)存大小和閉鎖程度直接影響雌性哺乳動(dòng)物的生殖年齡。顆粒細(xì)胞作為卵泡內(nèi)的主要細(xì)胞成分,其生長(zhǎng)分化是始基卵泡生長(zhǎng)啟動(dòng)以及卵泡發(fā)育的關(guān)鍵。研究表明靜止于Go/Gl期的顆粒細(xì)胞及卵泡對(duì)化療藥物不敏感,故研究參與調(diào)節(jié)這一過(guò)程的基因?qū)μ骄柯殉补δ艿谋Ｗo(hù)具有重要意義。業(yè)已證實(shí),化療藥物對(duì)卵巢損傷的程度與藥物種類(lèi)、用藥劑量等有關(guān)：在化療早期,藥物通過(guò)對(duì)細(xì)胞的直接殺傷作用誘導(dǎo)卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞及其他支持細(xì)胞凋亡,同時(shí)可過(guò)度激活靜止卵泡使原始卵泡過(guò)度耗竭；在化療后期,卵巢由于局部血供障礙、微環(huán)境紊亂導(dǎo)致卵泡成熟受阻,卵巢功能衰退。順鉑是一種常見(jiàn)的化療藥物,研究顯示其可通過(guò)PTEN/AKT通路使原始卵泡過(guò)度活化,從而增加卵泡對(duì)化療藥物的敏感性,加速早期卵母細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致大鼠卵巢儲(chǔ)備功能下降,進(jìn)一步導(dǎo)致POF。我們前期研究已表明順鉑對(duì)體外培養(yǎng)的卵巢顆粒細(xì)胞及大鼠竇前卵泡均具有明顯毒性作用。因此如何避免顆粒細(xì)胞的過(guò)度凋亡及卵泡的提前耗竭是預(yù)防化療藥物所致卵巢功能損傷的重要研究方向。Foxo3a作為叉頭轉(zhuǎn)錄因子FOXO亞家族成員之一,對(duì)生物的發(fā)育、增殖、衰老和腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有調(diào)控作用。研究顯示[16,21]Foxo3a既可通過(guò)調(diào)控Fas/FasL、Bim、Caspases等凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,又可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期蛋白如p27、CyclinD等使細(xì)胞周期停滯在Go/G1期。目前關(guān)于Foxo3a基因的研究主要用于腫瘤領(lǐng)域,研究顯示該基因表達(dá)低下或缺失可引起腫瘤細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),導(dǎo)致預(yù)后不良。但近年來(lái)多項(xiàng)研究顯示Foxo3a基因可能在哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育中起到關(guān)鍵作用,然而關(guān)于其對(duì)哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞和卵泡發(fā)育調(diào)控及卵巢功能的保護(hù)作用卻眾說(shuō)紛紜。部分學(xué)者認(rèn)為Foxo3a基因?qū)β殉补δ芷鸨Ｗo(hù)作用,如Castrillon、Schneider和Pelosi等人發(fā)現(xiàn)Foxo3a-/-小鼠出現(xiàn)原始卵泡過(guò)度耗竭、卵母細(xì)胞閉鎖和卵泡發(fā)育停滯,表現(xiàn)為生育能力減退而；轉(zhuǎn)基因Foxo3a大鼠的卵巢儲(chǔ)備功能則明顯優(yōu)于野生型大鼠；孟春花等發(fā)現(xiàn)Foxo3a基因可抑制豬卵巢顆粒細(xì)胞凋亡。然而另有部分學(xué)者呈反對(duì)意見(jiàn)：如Liu.H[16]等發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Foxo3a基因可通過(guò)降低BMP-15和Smad蛋白從而抑制小鼠顆粒細(xì)胞增殖；隋旭霞等通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)推測(cè)Foxo3a及其下游靶基因Bim、FasL、Bax、p27kip1可促進(jìn)新生大鼠卵母細(xì)胞凋亡；Liu.L[15]等通過(guò)建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型證明卵母細(xì)胞內(nèi)Foxo3a基因持續(xù)表達(dá)引起卵母細(xì)胞及卵泡發(fā)育遲緩。哺乳動(dòng)物的卵泡中存在多種細(xì)胞死亡配體-受體系統(tǒng)調(diào)控卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡和卵泡的生長(zhǎng)閉鎖,其過(guò)程非常復(fù)雜。研究顯示,哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育早期由卵母細(xì)胞凋亡啟動(dòng)原始卵泡及初級(jí)卵泡閉鎖,繼而引起顆粒細(xì)胞凋亡,而成熟卵泡的閉鎖則由顆粒細(xì)胞凋亡啟動(dòng),說(shuō)明不同時(shí)期卵泡閉鎖的調(diào)控機(jī)制可能有所差異。有研究者發(fā)現(xiàn)某些蛋白如Smad3在卵巢功能調(diào)控中表現(xiàn)出階段特異性；與此同時(shí),翟立軍等研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)部分調(diào)控個(gè)體發(fā)育的基因如miRNA在小鼠不同發(fā)育階段的卵泡及卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞的表達(dá)規(guī)律不一致,表明同種信號(hào)分子在不同階段卵泡中的顆粒細(xì)胞和體內(nèi)外顆粒細(xì)胞的表達(dá)可能存在差異。綜上所述,是否能夠通過(guò)調(diào)控Foxo3a基因的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞的細(xì)胞周期停滯以及促進(jìn)使竇前卵泡處于相對(duì)靜止期,從而降低卵巢顆粒細(xì)胞及竇前卵泡對(duì)化療藥物的敏感性,達(dá)到保護(hù)卵巢功能、預(yù)防化療性卵巢早衰是本實(shí)驗(yàn)的主要研究目的。本實(shí)驗(yàn)將利用重組腺病毒介導(dǎo)Foxo3a基因體外感染大鼠原代卵巢顆粒細(xì)胞和竇前卵泡,觀察該基因?qū)β殉差w粒細(xì)胞和竇前卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的影響和可能的調(diào)控機(jī)制,并探究其是否可以降低順鉑導(dǎo)致的卵巢毒性作用,進(jìn)而探究Foxo3a基因防護(hù)順鉑損傷卵巢功能的可行性和有效性,為防治卵巢早衰尋找一種新的方法。目的1.克隆大鼠Foxo3a基因并構(gòu)建大鼠Foxo3a基因腺病毒過(guò)表達(dá)載體,包裝純化重組腺病毒；體外培養(yǎng)原代大鼠卵巢顆粒細(xì)胞,觀察不同滴度重組腺病毒體外感染大鼠顆粒細(xì)胞的表達(dá)情況及表達(dá)效率。2.探討過(guò)表達(dá)Foxo3a基因?qū)Υ笫舐殉差w粒細(xì)胞體外發(fā)育的影響及調(diào)控機(jī)制,觀察該基因?qū)熕幬镯樸K誘導(dǎo)的卵巢顆粒細(xì)胞凋亡是否具有保護(hù)作用。3.建立體外分離培養(yǎng)大鼠竇前卵泡系統(tǒng),觀察順鉑對(duì)其的毒性作用,并探討重組腺病毒體外轉(zhuǎn)染大鼠竇前卵泡的可行性及過(guò)表達(dá)Foxo3a基因?qū)Υ笫蟾]前卵泡體外發(fā)育的影響。方法1.重組腺病毒構(gòu)建：在Genebank中查詢(xún)大鼠Foxo3a基因序列,合成大鼠Foxo3a cDNA序列,克隆至pUC57載體中；選取經(jīng)酶切電泳分析及DNA測(cè)序鑒定正確的大鼠Foxo3a基因,經(jīng)過(guò)質(zhì)粒提取、酶切連接反應(yīng)連接到腺病毒載體質(zhì)粒pDC315中,構(gòu)建重組腺病毒載體pDC315-rFoxo3a;通過(guò)酶切電泳分析和測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證目的基因的正確性后,將攜帶目的基因的重組質(zhì)粒和骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染人胚胎腎上皮細(xì)胞系293T細(xì)胞,包裝出重組腺病毒AD-rFoxo3a,進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證和滴度測(cè)定(TCID50法)。2.體外分離培養(yǎng)大鼠原代卵巢顆粒細(xì)胞,利用HE染色及FSHR免疫熒光法進(jìn)行原代顆粒細(xì)胞鑒定,確定重組腺病毒體外感染大鼠卵巢原代顆粒細(xì)胞最佳感染復(fù)數(shù)(MOI),通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)方法檢測(cè)目的基因Foxo3a的表達(dá)情況。3.實(shí)驗(yàn)分為3組：實(shí)驗(yàn)組(重組腺病毒AD-rFoxo3a)、陰性對(duì)照組(空載腺病毒rAD)及空白對(duì)照組。觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)；利用Western-blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中cyclinD1、p27、pax、Bim蛋白表達(dá)；利用流式細(xì)胞術(shù)、Hoechst33342/PI染色法分別檢測(cè)各組細(xì)胞的細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況。各組轉(zhuǎn)染48h后加入最適濃度的順鉑,觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。4.體外分離培養(yǎng)大鼠竇前卵泡(直徑120-150μm),實(shí)驗(yàn)分組同前(30個(gè)卵泡/組)。利用不同滴度的重組腺病毒體外轉(zhuǎn)染卵泡,觀察卵泡生長(zhǎng)發(fā)育形態(tài)及綠色熒光蛋白EGFP和目的蛋白Foxo3a的表達(dá)情況；各組轉(zhuǎn)染一定時(shí)間后加入最適濃度的順鉑,觀察各組卵泡形態(tài)學(xué)變化及閉鎖情況。結(jié)果1.本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的攜帶大鼠Foxo3a基因的質(zhì)粒經(jīng)酶切電泳可見(jiàn)約2000bp DNA條帶,與Genebank中大鼠Foxo3a基因片段長(zhǎng)度(2019bp)一致,經(jīng)測(cè)序鑒定后行同源性分析為99%。重組腺病毒質(zhì)粒pDC315-rFoxo3a經(jīng)酶切鑒定及測(cè)序證實(shí)重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。重組腺病毒質(zhì)粒以及骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞15d可見(jiàn)病毒空斑,培養(yǎng)21d收毒,經(jīng)病毒擴(kuò)增后行瓊脂糖電泳鑒定及DNA測(cè)序證明重組腺病毒AD-rFoxo3a構(gòu)建成功,測(cè)定滴度為1.106×1010PFU/mL。2.分離培養(yǎng)的大鼠原代卵巢顆粒細(xì)胞經(jīng)鑒定表明細(xì)胞純度及存活率均90%。當(dāng)MOI為50時(shí),重組腺病毒對(duì)顆粒細(xì)胞的感染效率最高,且對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組Foxo3a mRNA表達(dá)量明顯高于對(duì)照組,且在轉(zhuǎn)染后36h表達(dá)水平最高；Western-blot法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組有分子量約80KD蛋白的表達(dá),而對(duì)照組中無(wú)表達(dá)。3.(1)通過(guò)繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組卵巢顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)較對(duì)照組受到抑制,而空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)良好,呈現(xiàn)S型生長(zhǎng)曲線(xiàn),兩組細(xì)胞增值率無(wú)明顯差異；(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在G1期的比例較對(duì)照組明顯增加,S期細(xì)胞所占比例明顯減少(P均0.01)；(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡及Hoechst33342/PI染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組增加(P0.01),而空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組之間細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯差異。(4) Western-blot檢測(cè)相關(guān)蛋白結(jié)果發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組Bim、p27、CyclinD1蛋白較對(duì)照組明顯高表達(dá),空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組之間各個(gè)蛋白表達(dá)無(wú)差異；同時(shí),各組均為發(fā)現(xiàn)明顯Bax蛋白表達(dá)；(5)各組細(xì)胞加入順鉑24h后行流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組卵巢顆粒細(xì)胞凋亡率高于空白對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P0.01),后兩組細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.機(jī)械法聯(lián)合酶消化法分離的大鼠竇前卵泡體外培養(yǎng)24h可貼壁,平均培養(yǎng)7d后出現(xiàn)卵母細(xì)胞逸出、基底膜破裂等卵泡閉鎖表現(xiàn),在加入順鉑后卵泡閉鎖率明顯增加。用不同滴度的重組腺病毒體外轉(zhuǎn)染大鼠竇前卵泡結(jié)果顯示,卵泡內(nèi)部及基膜表面均未見(jiàn)明顯綠色熒光蛋白表達(dá),RT-PCR法未檢測(cè)Foxo3a的表達(dá)。結(jié)論1.本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了大鼠重組慢病毒AD-rFoxo3a,具有滴度高、體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率高的特點(diǎn),并能成功感染體外培養(yǎng)的大鼠原代卵巢顆粒細(xì)胞,使目的基因Foxo3a在細(xì)胞中得以有效轉(zhuǎn)錄及表達(dá),為進(jìn)一步研究該基因的對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的調(diào)控作用及對(duì)化療藥物導(dǎo)致的卵巢功能衰退的防治奠定了基礎(chǔ)。2.過(guò)表達(dá)Foxo3a基因在體外可通過(guò)促進(jìn)cyclinD1、p27蛋白表達(dá)促使大鼠卵巢顆粒細(xì)胞周期停滯在靜止期,并可通過(guò)促進(jìn)Bim蛋白表達(dá)誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡；同時(shí),本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Foxo3a基因可以逆轉(zhuǎn)順鉑誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的作用。3.重組腺病毒對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠竇前卵泡轉(zhuǎn)染效率極低下,可能因病毒無(wú)法通過(guò)卵泡表面的基底膜以及體外環(huán)境缺少相關(guān)因子刺激有關(guān)；同時(shí)本實(shí)驗(yàn)未觀察到重組腺病毒AD-rFoxo3a與卵泡共培養(yǎng)對(duì)順鉑的卵泡毒性有保護(hù)作用。4.關(guān)于Foxo3a基因?qū)β雅莅l(fā)育和閉鎖的調(diào)控以及卵巢功能的影響還有賴(lài)于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R711.75

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5 楊宏敏;宋翠淼;杜惠蘭;;逍遙丸含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的人卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)分泌功能及FSHR表達(dá)的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)暨生殖醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2014年

6 倪江;朱輝;;大鼠多囊卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

7 何曉紅;楊利國(guó);曹少先;;質(zhì)粒pEGS/2SS轉(zhuǎn)染對(duì)豬和牛卵巢顆粒細(xì)胞增殖和激素分泌的影響[A];第十次全國(guó)畜禽遺傳標(biāo)記研討會(huì)論文集[C];2006年

8 邵康;吳小雪;盛晟;張佳;李維新;周杰;;組脂聯(lián)素對(duì)皖南花豬卵巢顆粒細(xì)胞性激素生成的影響[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

9 肖蘊(yùn)祺;倪迎冬;;Kisspeptin-10對(duì)雞卵巢顆粒細(xì)胞孕酮分泌的影響及機(jī)制研究[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

10 郝紅娟;王惠蘭;張琰;張艷彬;;順鉑、VP-16、長(zhǎng)春新堿、博來(lái)霉素對(duì)人卵巢顆粒細(xì)胞影響的比較[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三次全國(guó)絕經(jīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨絕經(jīng)相關(guān)問(wèn)題學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 吳少亙;微小RNA-132在卵巢顆粒細(xì)胞中的功能研究[D];南京大學(xué);2016年

2 龍旭;基于PI3K/AKT信號(hào)通路研究新加歸腎丸調(diào)節(jié)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖、凋亡的分子機(jī)制[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 陸湘;子宮內(nèi)膜異位癥卵巢顆粒細(xì)胞SF-1的表達(dá)及其啟動(dòng)子甲基化的研究[D];上海交通大學(xué);2015年

4 程靜;微囊化卵巢顆粒細(xì)胞長(zhǎng)期體外培養(yǎng)及同種異體體內(nèi)移植的研究[D];浙江大學(xué);2010年

5 鄔靜;大鼠卵巢顆粒細(xì)胞體外生殖毒性評(píng)價(jià)替代模型的建立與應(yīng)用[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 孫美艷;鈣激活氯離子通道ANO1在卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)與功能[D];吉林大學(xué);2014年

7 夏天;補(bǔ)腎調(diào)沖方對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖與分泌及其相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];天津中醫(yī)學(xué)院;2005年

8 李沛霖;補(bǔ)腎調(diào)沖含藥血清對(duì)離體大鼠卵巢顆粒細(xì)胞分泌功能與結(jié)構(gòu)的影響[D];天津中醫(yī)學(xué)院;2005年

9 魏兆蓮;二甲雙胍對(duì)PCOS患者卵巢顆粒細(xì)胞胰島素受體底物-1及P450芳香化酶的作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李攀;間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源微囊泡對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張永芳;二甲雙胍對(duì)多囊卵巢綜合征卵巢顆粒細(xì)胞胰島素受體底物-1及其磷酸化表達(dá)的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

3 鄒文兵;多種營(yíng)養(yǎng)素對(duì)燃煤型氟中毒雌鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡干預(yù)作用研究[D];貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院;2015年

4 唐曉靜;黨參炔苷和木犀草素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌的影響及其作用機(jī)制[D];中央民族大學(xué);2015年

5 雷夢(mèng)媛;FSTL3基因在綿羊常年發(fā)情中的功能研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 袁明明;微囊藻毒素-LR長(zhǎng)時(shí)期低劑量暴露對(duì)雌性小鼠生殖功能的影響及其機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2014年

7 王梧蘇;BMAL1對(duì)豬卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌與凋亡的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

8 王珊;miR-4110對(duì)奶山羊卵巢顆粒細(xì)胞周亡調(diào)控作用的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

9 孫麗萍;干細(xì)胞來(lái)源的exosomes對(duì)化療誘導(dǎo)卵巢損傷保護(hù)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2016年

10 楊s，

本文編號(hào)：1221925