發(fā)布時(shí)間：2017-11-17 14:26

  本文關(guān)鍵詞：ALEX1在宮頸癌組織中的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞生物學(xué)特性的影響

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【摘要】：宮頸癌是一種嚴(yán)重影響女性身心健康的疾病,據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告發(fā)病率占所有癌癥的12%,僅次于乳腺癌。ALEX1(Arm proteins lost in epithelial cancers on chromosome X1)蛋白是Arm重復(fù)蛋白家族成員之一,蛋白序列中含有兩個(gè)Armadillo repeat結(jié)構(gòu),在蛋白N端具有一個(gè)疏水的跨膜區(qū)。ALEX1在正常組織中除肝臟、胸腺組織低表達(dá),外周血白細(xì)胞未見(jiàn)表達(dá)外均有廣泛的表達(dá);在上皮組織來(lái)源的腫瘤組織中低表達(dá)或不表達(dá)。有關(guān)報(bào)道也證明ALEX1參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,過(guò)表達(dá)ALEX1能抑制直腸癌細(xì)胞的克隆形成。但有關(guān)ALEX1在宮頸癌中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本論文將探討ALEX1在宮頸癌組織中的表達(dá)情況,并研究其對(duì)宮頸癌細(xì)胞的相關(guān)生物學(xué)行為的影響。第一部分ALEX1在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義目的:研究ALEX1蛋白在宮頸癌臨床組織與癌旁組織中的表達(dá)差異,并分析其表達(dá)差異與其臨床意義。方法:收集53對(duì)臨床宮頸癌和癌旁組織,多聚甲醛固定,乙醇脫水,石蠟包埋及切片,應(yīng)用免疫組化檢測(cè)臨床宮頸癌組織與癌旁組織中ALEX1的表達(dá)差異,并分析其臨床特性對(duì)ALEX1的表達(dá)影響。結(jié)果:在53例宮頸癌組織中有44例組織標(biāo)本高表達(dá)ALEX1蛋白(83.0%);在53例癌旁組織中有13例組織標(biāo)本高表達(dá)alex1蛋白(24.5%)(*p㩳0.05);此外,在癌旁組織中alex1的表達(dá)主要定位在細(xì)胞核中,而在癌組織中alex1的表達(dá)主要定位在細(xì)胞質(zhì)中。結(jié)論:alex1基因在宮頸癌組織中表達(dá)高,而在癌旁組織中低表達(dá);在癌旁組織中alex1蛋白的表達(dá)主要為核質(zhì)表達(dá),而在癌組織中alex1蛋白的表達(dá)主要為胞質(zhì)表達(dá)。第二部分干擾alex1對(duì)宮頸癌細(xì)胞hela增殖、周期及凋亡的影響目的:設(shè)計(jì)針對(duì)alex1的干擾rna,并探討干擾alex1對(duì)宮頸癌細(xì)胞株hela生物學(xué)特性的影響。方法:設(shè)計(jì)并合成三條針對(duì)alex1基因的小干擾rna,轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞株hela細(xì)胞,并篩選出最佳干擾序列。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)沉默alex1對(duì)宮頸癌細(xì)胞hela的周期、凋亡變化情況,利用cck-8檢測(cè)沉默alex1對(duì)宮頸癌hela增殖情況的影響。結(jié)果:實(shí)時(shí)熒光定量pcr和westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示,三組小干擾rna序列中rnai-3對(duì)宮頸癌細(xì)胞hela干擾效果最佳。流式周期和凋亡檢測(cè)顯示:alex1沉默組中s期細(xì)胞比例(30.00±1.77%)較未處理組(16.53±0.93%)和陰性對(duì)照組(14.41±0.86%)中s期細(xì)胞比例顯著升高(*p㩳0.05);alex1沉默組中細(xì)胞凋亡率(16.41±0.59%)較未處理組(2.31±0.23%)和陰性對(duì)照組(3.15±0.33%)中細(xì)胞凋亡率顯著升高(*p㩳0.05)。cck-8檢測(cè)結(jié)果顯示:ALEX1沉默組相對(duì)未處理組和陰性對(duì)照組在72、96 h細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制(*P㩳0.05)。結(jié)論:沉默ALEX1的表達(dá)能促進(jìn)人宮頸癌細(xì)胞Hela的凋亡和阻滯細(xì)胞周期的進(jìn)程并抑制其細(xì)胞增殖。第三部分沉默ALEX1增強(qiáng)Res對(duì)宮頸癌細(xì)胞的敏感性目的:研究沉默ALEX1后抗癌藥物Res對(duì)宮頸癌細(xì)胞存活率及細(xì)胞凋亡率的影響,并測(cè)定不同時(shí)間Res處理后,其IC50的變化。方法:利用CCK-8檢測(cè)沉默ALEX1宮頸癌對(duì)抗癌藥物Res敏感性的影響,Res濃度設(shè)定為0、50、100、200、400、600、800μmol·L-1。結(jié)果:ALEX1沉默組經(jīng)抗癌藥物Res處理后相對(duì)空白組和陰性對(duì)照組經(jīng)Res抗癌藥物處理后細(xì)胞生長(zhǎng)顯著受到抑制;且在處理48、72 h后,AEX1沉默組與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組的IC50有顯著降低;流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率結(jié)果顯示,siRNA轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞24 h后用濃度為300μmol·L-1的Res處理細(xì)胞48 h中,沉默組Hela細(xì)胞凋亡率(36.33±3.17%)比例顯著高于陰性對(duì)照組(16.58±1.95%)和空白組(12.28±1.28%)中細(xì)胞凋亡率(*P㩳0.05)。結(jié)論:沉默ALEX1在48、72 h時(shí)增強(qiáng)了Res對(duì)宮頸癌的致死能力,提高了Res對(duì)宮頸癌的藥物敏感性;沉默ALEX1表達(dá)后,增強(qiáng)了Res促進(jìn)Hela細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33

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2 朱明s，

本文編號(hào)：1196364