本文關(guān)鍵詞：MiR-494調(diào)控蛻膜MSCs影響子癇前期發(fā)病的機(jī)制研究

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【摘要】：子癇前期(PE)是妊娠期特發(fā)性多器官功能障礙性疾病,也是危害母兒健康的首要原因之一。胎盤血管生成不良是造成PE發(fā)病的重要因素。正常妊娠時(shí),母胎界面促血管與抗血管生成因子之間的平衡狀態(tài)保證了胎盤血管生成與發(fā)育過程。但是,PE患者的血管生成因子無論在母胎界面還是血循環(huán)中均發(fā)生了明顯的改變。已報(bào)道母胎界面的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)可通過分泌多種因子調(diào)控血管生成,而母胎界面MSCs功能的改變可能造成母胎界面處血管生成失調(diào),可能是PE發(fā)生的病理機(jī)制。然而,迄今關(guān)于母胎界面處影響MSCs調(diào)控血管生成的具體分子機(jī)制尚不完全清楚。MicroRNAs(miRs)是一類調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)的短鏈、非編碼RNAs,其影響細(xì)胞的增殖、周期、凋亡和功能,在多種疾病中發(fā)揮著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn),miRs在PE患者的胎盤、血清以及MSCs中的表達(dá)也發(fā)生了變化。一些研究報(bào)道m(xù)iR-494-3p (miR-494)參與血管生成的調(diào)控；我們前期的研究發(fā)現(xiàn)PE來源的蛻膜MSCs (dMSCs)中miR-494高表達(dá),推測PE患者母胎界面異常表達(dá)的miR-494可能調(diào)控dMSCs,進(jìn)而影響胎盤的血管生成。本文探討了miR-494對dMSCs細(xì)胞特性和功能的影響,以揭示PE患者母胎界面血管生成發(fā)生異常的機(jī)制。1、PE來源的dMSCs培養(yǎng)上清抑制HTR8/SVneo遷移和HUVEC血管生成,且該dMSCs中miR-494高表達(dá)首先,我們培養(yǎng)了正常妊娠孕婦和PE孕婦來源的dMSCs,通過鏡下觀察和運(yùn)用流式技術(shù)檢測,并未發(fā)現(xiàn)兩者在細(xì)胞形態(tài)和表面標(biāo)志上有明顯差異；隨后,我們又通過trans well遷移實(shí)驗(yàn)和Matrigel成血管實(shí)驗(yàn),比較了正常妊娠孕婦和PE孕婦來源的dMSCs功能上的差異,發(fā)現(xiàn)PE患者來源的dMSCs的培養(yǎng)上清抑制了HTR8/SVneo細(xì)胞的遷移和HUVEC的血管生成。最后通過Q-PCR檢測發(fā)現(xiàn)PE患者來源的dMSCs中miR-494高表達(dá),而VEGF的表達(dá)下調(diào)。以上結(jié)果提示,PE患者的dMSCs中miR-494高表達(dá),可能與該dMSCs對HTR8/SVneo遷移和HUVEC血管生成的調(diào)控作用受抑有關(guān)。2、高表達(dá)miR-494可抑制dMSCs對血管生成的調(diào)控潛能我們隨后探討了miR-494是否影響dMSCs對血管生成的調(diào)控潛能。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將miR-494 mimic和miR-494 mimic negative control片段轉(zhuǎn)染至dMSCs中,用Q-PCR和ELISA方法檢測了dMSCs中VEGF的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)高表達(dá)miR-494的dMSCs中VEGF的表達(dá)下調(diào)：雙熒光素酶報(bào)告基因檢測進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)miR-494與VEGF之間具有直接靶向關(guān)系；通過trans well遷移實(shí)驗(yàn)和Matrigel成血管實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)高表達(dá)miR-494的dMSCs的培養(yǎng)上清可顯著抑制HTR8/SVneo的遷移和HUVEC的血管生成；利用VEGF干擾技術(shù)的陽性對照發(fā)現(xiàn),miR-494通過靶向VEGF而影響dMSCs對血管生成的調(diào)控潛能。3、高表達(dá)miR-494可抑制dMSCs的生長MiR-494不僅有調(diào)控血管生成的功能,而且也能調(diào)控細(xì)胞增殖和周期方面的作用。因此,我們進(jìn)一步探討了miR-494對dMSCs生長潛能的影響。首先,我們利用CCK-8試劑檢測dMSCs細(xì)胞的活性,結(jié)果顯示高表達(dá)miR-494后,dMSCs細(xì)胞活力下降；進(jìn)一步我們通過流式的方法檢測了dMSCs增殖、凋亡和周期的情況,發(fā)現(xiàn)高表達(dá)miR-494可抑制dMSCs的增殖、阻滯dMSCs周期的進(jìn)展,但不影響dMSCs的凋亡。最后應(yīng)用Q-PCR和Western Blot檢測,發(fā)現(xiàn)高表達(dá)miR-494抑制了dMSCs中CDK6和CCND1周期相關(guān)基因的表達(dá)。綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)miR-494具有抑制dMSCs的生長及其對血管生成的調(diào)控作用。高表達(dá)miR-494的dMSCs的培養(yǎng)上清可抑制HTR8/SVneo的遷移和HUVEC的血管生成；miR-494可通過靶向VEGF的表達(dá)降低dMSCs的血管生成調(diào)控潛能；miR-494通過抑制CDK6和CCND1等周期相關(guān)基因的表達(dá)引起dMSCs細(xì)胞周期阻滯。結(jié)論：母胎界面異常表達(dá)miR-494的dMSCs可能參與PE的發(fā)病機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R714.244

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1179096