本文關(guān)鍵詞：探索新鮮羊膜促進傷口愈合的最佳保存方法和保存時間

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【摘要】：目的：本實驗隨機選取健康的剖宮產(chǎn)婦(年齡25-35歲)3名,產(chǎn)前母體均行血清學檢查,排除人類免疫缺陷性病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、巨細胞病毒、皰疹病毒、弓形體、梅毒及其他傳染病。無菌條件下分離獲取產(chǎn)婦羊膜,滅菌處理后以純甘油、無水酒精和50%DMEM培養(yǎng)基三種不同的方式保存不同月份,通過羊膜移植實驗、HE染色切片及羊膜細胞因子檢測研究羊膜在保留生物學功能的同時最佳的保存方法和保存時間。方法：將三種不同保存方式的羊膜不同保存條件下分別保存1-6個月,自羊膜起始保存日,每間隔一個月,取三種保存方式的羊膜對小鼠機械創(chuàng)傷模型進行羊膜移植實驗,比較不同保存方式的羊膜保存不同月份對小鼠創(chuàng)面的促進愈合效果；在不同的保存月份取三種保存方式的羊膜做HE染色切片,顯微鏡下觀察羊膜細胞隨保存時間的延長,羊膜細胞形態(tài)的變化；在不同保存月份取等量的三種保存羊膜,無菌條件下溶解羊膜細胞,通過ELISA法檢測羊膜在不同保存月份表皮生長因子(EGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、成纖維細胞生長因子(bFGF)及轉(zhuǎn)化生長因子-p1(TGF-β1)的含量,比較三種羊膜保存不同月份對羊膜細胞因子含量水平的影響。結(jié)果：羊膜移植小組的小鼠創(chuàng)傷愈合時間相比未做羊膜移植的小鼠明顯較短(P0.05),無水酒精羊膜組的小鼠創(chuàng)傷愈合時間相比純甘油羊膜組和50%DMEM培養(yǎng)基羊膜組短(P0.05),純甘油羊膜組的小鼠創(chuàng)傷愈合時間與50%DMEM培養(yǎng)基羊膜組相差較小(P0.05)。三種保存方式的羊膜,保存一個月,細胞形態(tài)基本完整,細胞間隙加大；保存兩個月,上皮細胞部分細胞核疏松,海綿層結(jié)構(gòu)疏松,純甘油組和50%DMEM培養(yǎng)基組羊膜海綿層出現(xiàn)空泡樣；保存三個月,上皮細胞部分破裂,細胞核脫失,致密層改變不大,纖維母細胞層和海綿層結(jié)構(gòu)疏松,三種保存羊膜海綿層均出現(xiàn)空泡樣,純甘油組羊膜海綿層部分缺失；保存四個月,細胞間隙再次增大,細胞核脫失情況加劇,海綿層均出現(xiàn)缺失,純甘油組羊膜上皮細胞層結(jié)構(gòu)不規(guī)整；保存五個月,上皮細胞少量缺失,細胞部分壞死,核固縮,羊膜細胞層結(jié)構(gòu)變薄,純甘油組和無水酒精組羊膜纖維母細胞層部分缺失,50%DMEM培養(yǎng)基組羊膜上皮細胞缺失和壞死情況較嚴重；保存六個月,純甘油組羊膜上皮細胞連續(xù)中斷,纖維母細胞層部分缺失,無水酒精組羊膜上皮細胞層結(jié)構(gòu)疏松,纖維母細胞層大面積脫落,50%DMEM培養(yǎng)基組羊膜上皮細胞固縮壞死,基質(zhì)層出現(xiàn)空炮樣變,基底膜模糊。ELISA法檢測三種保存羊膜在不同月份細胞因子含量水平,發(fā)現(xiàn)四種細胞因子含量隨羊膜保存時間延長而減少。表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(bFGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)含量均在羊膜保存5月份后下降趨勢顯著(P0.05),血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量在羊膜保存2月份后下降趨勢顯著(P0.05),結(jié)論：羊膜促進創(chuàng)傷愈合的效果、細胞形態(tài)的完整性及細胞因子的含量水平均隨保存時間的延長而降低；相同保存時間下無水酒精保存羊膜促進創(chuàng)傷愈合的效果及羊膜結(jié)構(gòu)保存的完整性較純甘油和50%DMEM培養(yǎng)基保存羊膜要好；三種保存羊膜的細胞因子含量變化整體水平上在保存5個月后下降趨勢明顯。
【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R714

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本文編號：1177138