本文關(guān)鍵詞：BV6協(xié)同順鉑誘導SKOV3細胞凋亡的作用機制研究

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【摘要】：目的:由體外實驗培養(yǎng)卵巢癌細胞SKOV3,探究smac類似物BV6聯(lián)合DDP誘導SKOV3細胞凋亡的內(nèi)在機理。方法:1、MTT比色實驗檢測各梯度DDP和BV6對SKOV3細胞干預不同時間后的增殖抑制作用并得出兩藥的IC50;后續(xù)分別測驗3個適宜濃度的BV6聯(lián)合1.56ug/ml DDP在不同時間對SKOV3細胞抑制率的差異。2、光鏡下觀察細胞形態(tài):將實驗分為對照、DDP、低BV6、中BV6、高BV6、低BV6+DDP、中BV6+DDP、高BV6+DDP八個組,通過光學顯微鏡分析以上分組干預SKOV3細胞48h后的生存變化同時留取圖片。3、RT-PCR實驗:藥物干預SKOV3細胞48h后檢測核轉(zhuǎn)錄因子p65(NF-κBp65)和凋亡蛋白酶3(caspase-3)m RNA的差異。4、Western Blot蛋白印跡實驗:藥物干預SKOV3細胞48h后檢測核轉(zhuǎn)錄因子p65和凋亡蛋白酶3在蛋白水平的差異。5、用SPSS19.0分析實驗結(jié)果。結(jié)果:1、MTT實驗顯示:DDP、BV6兩藥對SKOV3細胞均具有顯著的生長抑制作用,呈劑量-時間依賴的共同特點。DDP、BV6對SKOV3細胞的IC50與干預時間呈負相關(guān)。BV6/DDP聯(lián)合組對SKOV3細胞的抑制率顯著高于單藥組,差異有意義(P0.01);兩藥的聯(lián)合作用也與BV6濃度相關(guān),濃度越大,抑制率越大(P0.01),且表現(xiàn)為時間依賴性(P0.01)。2、倒置顯微鏡下可見SKOV3細胞經(jīng)藥物干預后,隨著BV6濃度增加及兩藥聯(lián)合作用,細胞的形狀由梭形變?yōu)槎嘟切?其密度和體積減小,增殖活性依次降低,最終漂浮于培養(yǎng)液而凋亡。3、RT-PCR實驗結(jié)果:實驗組與對照組相比、兩藥聯(lián)合組與BV6、DDP單藥組相比,都表現(xiàn)為前者NF-κBp65m RNA含量降低、caspase-3m RNA升高,具有統(tǒng)計學差異(P0.05);BV6濃度越大,NF-κBp65m RNA含量越低, caspase-3m RNA含量越高(P0.05);BV6、DDP單藥組間相比,中BV6、高BV6組NF-κBp65m RNA含量均低于DDP組、caspase-3m RNA均高于DDP組(P0.01),而兩者在低濃度BV6與DDP組無顯著差異(P0.05)。4、Western Blot實驗結(jié)果:(1)NF-κBp65總蛋白表達變化:實驗組與對照組相比、兩藥聯(lián)合組與單藥組相比,都表現(xiàn)為前者NF-κBp65總蛋白表達降低(P0.05);隨BV6劑量增大,NF-κBp65總蛋白表達降低,差異明顯(P0.05);BV6單藥與DDP組比較,低BV6組NF-κBp65總蛋白含量與DDP組無顯著差異(P0.05),中BV6組、高BV6組均低于DDP組(P0.05)。核蛋白實驗顯示,與對照組相比,DDP組NF-κBp65核蛋白的含量升高,其余六個實驗組均下降(P0.05);BV6/DDP組與單藥組相比,聯(lián)合組NF-κBp65核蛋白含量低于DDP單藥組(P0.01),但與BV6單藥組比較無顯著不同(P0.05);BV6濃度越大,NF-κBp65核蛋白含量越低(P0.05)。(2)caspase-3蛋白表達變化:實驗組與對照組對比、BV6/DDP聯(lián)合組與單藥組對比,前者caspase-3蛋白含量均升高,差異顯著(P0.05);隨BV6藥物劑量增大,caspase-3蛋白含量升高(P0.05);BV6、DDP單藥組間比較,除低BV6組外,中、高BV6組caspase-3蛋白含量都比DDP組高(P0.01);高濃度BV6組、中濃度BV6+DDP組、高濃度BV6+DDP組能檢測到cleaved caspase-3的活性,且高濃度BV6+DDP組的活性最大(P0.05)。結(jié)論:1、Smac類似物BV6、DDP單藥都可以促進SKOV3凋亡,具有劑量-時間依賴性。2、BV6聯(lián)合DDP以劑量-時間依賴的特點協(xié)同促進SKOV3細胞凋亡。3、BV6促進SKOV3凋亡可能與其抑制NF-κBp65核轉(zhuǎn)位激活,促進caspase-3聚集活化引發(fā)凋亡級聯(lián)反應有關(guān)。4、DDP可能通過激活NF-κBp65核轉(zhuǎn)位,有誘導化療耐藥的趨勢,BV6/DDP聯(lián)合用藥后可逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象,通過激活caspase-3協(xié)同發(fā)揮促凋亡作用。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31

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