本文關(guān)鍵詞：BV6協(xié)同順鉑誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 卵巢癌 凋亡 BV6 核轉(zhuǎn)錄因子-κBp65 凋亡蛋白酶 3

【摘要】：目的:由體外實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞SKOV3,探究smac類似物BV6聯(lián)合DDP誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡的內(nèi)在機(jī)理。方法:1、MTT比色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各梯度DDP和BV6對(duì)SKOV3細(xì)胞干預(yù)不同時(shí)間后的增殖抑制作用并得出兩藥的IC50;后續(xù)分別測(cè)驗(yàn)3個(gè)適宜濃度的BV6聯(lián)合1.56ug/ml DDP在不同時(shí)間對(duì)SKOV3細(xì)胞抑制率的差異。2、光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài):將實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照、DDP、低BV6、中BV6、高BV6、低BV6+DDP、中BV6+DDP、高BV6+DDP八個(gè)組,通過(guò)光學(xué)顯微鏡分析以上分組干預(yù)SKOV3細(xì)胞48h后的生存變化同時(shí)留取圖片。3、RT-PCR實(shí)驗(yàn):藥物干預(yù)SKOV3細(xì)胞48h后檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子p65(NF-κBp65)和凋亡蛋白酶3(caspase-3)m RNA的差異。4、Western Blot蛋白印跡實(shí)驗(yàn):藥物干預(yù)SKOV3細(xì)胞48h后檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子p65和凋亡蛋白酶3在蛋白水平的差異。5、用SPSS19.0分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果:1、MTT實(shí)驗(yàn)顯示:DDP、BV6兩藥對(duì)SKOV3細(xì)胞均具有顯著的生長(zhǎng)抑制作用,呈劑量-時(shí)間依賴的共同特點(diǎn)。DDP、BV6對(duì)SKOV3細(xì)胞的IC50與干預(yù)時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。BV6/DDP聯(lián)合組對(duì)SKOV3細(xì)胞的抑制率顯著高于單藥組,差異有意義(P0.01);兩藥的聯(lián)合作用也與BV6濃度相關(guān),濃度越大,抑制率越大(P0.01),且表現(xiàn)為時(shí)間依賴性(P0.01)。2、倒置顯微鏡下可見(jiàn)SKOV3細(xì)胞經(jīng)藥物干預(yù)后,隨著B(niǎo)V6濃度增加及兩藥聯(lián)合作用,細(xì)胞的形狀由梭形變?yōu)槎嘟切?其密度和體積減小,增殖活性依次降低,最終漂浮于培養(yǎng)液而凋亡。3、RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比、兩藥聯(lián)合組與BV6、DDP單藥組相比,都表現(xiàn)為前者NF-κBp65m RNA含量降低、caspase-3m RNA升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);BV6濃度越大,NF-κBp65m RNA含量越低, caspase-3m RNA含量越高(P0.05);BV6、DDP單藥組間相比,中BV6、高BV6組NF-κBp65m RNA含量均低于DDP組、caspase-3m RNA均高于DDP組(P0.01),而兩者在低濃度BV6與DDP組無(wú)顯著差異(P0.05)。4、Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果:(1)NF-κBp65總蛋白表達(dá)變化:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比、兩藥聯(lián)合組與單藥組相比,都表現(xiàn)為前者NF-κBp65總蛋白表達(dá)降低(P0.05);隨BV6劑量增大,NF-κBp65總蛋白表達(dá)降低,差異明顯(P0.05);BV6單藥與DDP組比較,低BV6組NF-κBp65總蛋白含量與DDP組無(wú)顯著差異(P0.05),中BV6組、高BV6組均低于DDP組(P0.05)。核蛋白實(shí)驗(yàn)顯示,與對(duì)照組相比,DDP組NF-κBp65核蛋白的含量升高,其余六個(gè)實(shí)驗(yàn)組均下降(P0.05);BV6/DDP組與單藥組相比,聯(lián)合組NF-κBp65核蛋白含量低于DDP單藥組(P0.01),但與BV6單藥組比較無(wú)顯著不同(P0.05);BV6濃度越大,NF-κBp65核蛋白含量越低(P0.05)。(2)caspase-3蛋白表達(dá)變化:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組對(duì)比、BV6/DDP聯(lián)合組與單藥組對(duì)比,前者caspase-3蛋白含量均升高,差異顯著(P0.05);隨BV6藥物劑量增大,caspase-3蛋白含量升高(P0.05);BV6、DDP單藥組間比較,除低BV6組外,中、高BV6組caspase-3蛋白含量都比DDP組高(P0.01);高濃度BV6組、中濃度BV6+DDP組、高濃度BV6+DDP組能檢測(cè)到cleaved caspase-3的活性,且高濃度BV6+DDP組的活性最大(P0.05)。結(jié)論:1、Smac類似物BV6、DDP單藥都可以促進(jìn)SKOV3凋亡,具有劑量-時(shí)間依賴性。2、BV6聯(lián)合DDP以劑量-時(shí)間依賴的特點(diǎn)協(xié)同促進(jìn)SKOV3細(xì)胞凋亡。3、BV6促進(jìn)SKOV3凋亡可能與其抑制NF-κBp65核轉(zhuǎn)位激活,促進(jìn)caspase-3聚集活化引發(fā)凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)有關(guān)。4、DDP可能通過(guò)激活NF-κBp65核轉(zhuǎn)位,有誘導(dǎo)化療耐藥的趨勢(shì),BV6/DDP聯(lián)合用藥后可逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象,通過(guò)激活caspase-3協(xié)同發(fā)揮促凋亡作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王東生,袁肇凱,郭志華;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2000年12期

2 萬(wàn)曉艷,于蘇國(guó),郭玉芹,何慶;細(xì)胞凋亡與自身免疫性甲狀腺疾病的研究進(jìn)展[J];中國(guó)地方病防治雜志;2002年06期

3 祝偉民,林建棣,馬曉東,段小平;運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞凋亡[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年27期

4 王會(huì)玲,景文莉,張小紅,高維娟;細(xì)胞凋亡與心肌缺血-再灌注損傷[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年04期

5 梁薇;細(xì)胞凋亡的中藥調(diào)節(jié)機(jī)制[J];四川中醫(yī);2005年11期

6 張松彪;細(xì)胞凋亡與細(xì)胞養(yǎng)生[J];中國(guó)科技產(chǎn)業(yè);2005年01期

7 楊竹林,伍漢文;細(xì)胞凋亡調(diào)控因素有關(guān)基因的研究[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));1997年02期

8 劉恩梅,楊錫強(qiáng);細(xì)胞凋亡及其影響因素[J];重慶醫(yī)學(xué);1998年01期

9 ;美開(kāi)發(fā)調(diào)控細(xì)胞凋亡藥物[J];中國(guó)腫瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明陽(yáng);細(xì)胞凋亡在致畸中的作用[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2000年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳穎麗;李前忠;;不同亞細(xì)胞位置的細(xì)胞凋亡蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性分析[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

2 孫英麗;趙允;朱山;翟中和;;植物細(xì)胞凋亡及其機(jī)理的研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第七次會(huì)議論文摘要匯編[C];1999年

3 劉二龍;袁慧;;鋅與細(xì)胞凋亡[A];2003全國(guó)家畜內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文專輯[C];2003年

4 邱潔;高海青;;鋅在細(xì)胞凋亡中的作用研究進(jìn)展[A];山東省微量元素科學(xué)研究會(huì)第三屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

5 俞雅萍;;細(xì)胞凋亡的機(jī)制及途徑和影響因素[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

6 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細(xì)胞凋亡的機(jī)制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨鋒;;調(diào)控細(xì)胞凋亡的線粒體因素[A];腫瘤病因?qū)W研究與中西醫(yī)結(jié)合腫瘤綜合診療交流研討會(huì)論文集[C];2009年

8 吳經(jīng)緯;湯長(zhǎng)發(fā);;運(yùn)動(dòng)中細(xì)胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2006年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

9 蒲小平;李長(zhǎng)齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆全國(guó)生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2000年

10 江鍵;宋誠(chéng)榮;崔黎麗;方影;王小平;;靜電場(chǎng)對(duì)細(xì)胞凋亡作用的初步探討[A];中國(guó)物理學(xué)會(huì)第九屆靜電學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2000年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 商?hào)|;“細(xì)胞凋亡”與臨床醫(yī)學(xué)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

2 張志軍;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

3 ;“細(xì)胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

4 記者張建松;治療癌癥新途徑：細(xì)胞凋亡療法[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

5 李明輝;“細(xì)胞凋亡”治癌癥[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2002年

6 洪敏;細(xì)胞凋亡研究引人關(guān)注[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

7 陶春祥;細(xì)胞凋亡對(duì)心臟疾病的影響[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

8 本報(bào)實(shí)習(xí)記者 梁媛媛;薛定：發(fā)現(xiàn)癌癥“開(kāi)關(guān)”[N];北京科技報(bào);2010年

9 高書(shū)明;誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

10 勇匯;中藥誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊利;系列多氮類化合物的抗腫瘤活性研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 張浩;從分子、細(xì)胞和動(dòng)物水平研究鉛誘發(fā)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的效應(yīng)與機(jī)理[D];山東大學(xué);2015年

3 何欣怡;家蠶微孢子蟲(chóng)（Nosema bombycis）抑制家蠶BmN細(xì)胞凋亡的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

4 馮全服;從線粒體途徑研究川芎嗪誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡效應(yīng)機(jī)制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 張曉倩;高糖誘導(dǎo)Bim蛋白高表達(dá)而促腎近曲小管上皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討[D];山東大學(xué);2015年

6 孫健瑋;PTEN基因負(fù)調(diào)控Raf1磷酸化的作用及其對(duì)PC3細(xì)胞凋亡的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

7 徐林艷;腫瘤細(xì)胞凋亡過(guò)程中TNFRSF10B和CFLAR調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 樊慶端;生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的建模與動(dòng)力學(xué)行為研究[D];上海大學(xué);2015年

9 王德選;WNK_3對(duì)鈉氯協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)運(yùn)子的調(diào)節(jié)及在胚腎細(xì)胞凋亡中的保護(hù)作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 葉嘉;Nogo-B在急性肺損傷肺泡上皮細(xì)胞凋亡中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曹璐璐;2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚(BDE-47)對(duì)人胚腎細(xì)胞(HEK293)的毒理效應(yīng)及作用機(jī)制研究[D];中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所;2015年

2 張薇;蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞凋亡的研究[D];云南民族大學(xué);2015年

3 唐建國(guó);視黃醇X受體出核抑制對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 安璐;3-氯-1,2-丙二醇細(xì)胞毒性及其誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡途徑探究[D];江南大學(xué);2015年

5 楊翔;Procaspase-8的異常表達(dá)抑制TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[D];昆明理工大學(xué);2015年

6 張昌明;I3C通過(guò)調(diào)控p53泛素化對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡的影響[D];延邊大學(xué);2015年

7 彭涵;共軛亞油酸對(duì)仔豬脂肪細(xì)胞凋亡的影響[D];西南大學(xué);2015年

8 李立輝;ΔFosB通過(guò)MMP-9調(diào)控山羊乳腺上皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

9 楊鑫鋮;Hedgehog信號(hào)通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細(xì)胞凋亡中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 賈瓊瓊;MicroRNA-214對(duì)H_2O_2損傷L6骨骼肌成肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1163417