本文關鍵詞：胎盤Hofbauer細胞FcγRⅢ介導HBV宮內(nèi)感染

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【摘要】：目的：探討HBV感染孕產(chǎn)婦胎盤組織Hofbauer細胞表面FcyRⅢ的表達水平,探討絨毛Hofbauer細胞FcyRⅢ表達與宿主體內(nèi)HBV復制水平的相互關系以及其在介導HBV垂直傳播中的作用。 方法：篩選58例HBV感染足月分娩產(chǎn)婦的和60例感染HBV的孕婦流產(chǎn)胎盤絨毛。以Ficoll-Hypaque分離HBV感染產(chǎn)婦的外周血PBMCs和其新生兒的臍血CBMCs, PCR法檢測足月分娩HBV感染產(chǎn)婦的外周血和其新生兒臍血HBV-DNA的載量。以胰酶聯(lián)合EDTA消化液消化新鮮的絨毛組織,以RPMI1640完全培養(yǎng)液懸浮制備細胞懸液,分別采用Ficoll-Hypaque和Percoll密度梯度離心法分離Hofbauer細胞,以臺盼藍染色檢測分離純化的Hofbauer細胞的活度。取分離提純后的Hofbauer細胞懸液,以RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整純化后的細胞濃度為(1-2)×106/mL,以PCR法檢測Hofbauer細胞內(nèi)HBV-DNA載量。取分離純化的Hofbauer細胞懸液以Trizol進行總RNA的提取,逆轉(zhuǎn)錄以隨機引物合成cDNA,檢測Hofbauer細胞FcyRⅢ的mRNA表達,以lgcDNA/lgGAPDH的比值代表FcyRⅢ mRNA的最終含量,對比分析FcyRⅢ mRNA的表達和HBV-DNA載量間相互關系；HE染色和SP法免疫組織化學染色進一步檢測HBV感染孕婦絨毛Hofbauer細胞FcyRⅢ表達與HBV感染水平的關系,分析不同的HBV感染類型孕產(chǎn)婦組織Hofbauer細胞FcyRⅢ表達水平。 結(jié)果：HBeAg(+)足月分娩產(chǎn)婦的PBMCs及其新生兒CBMCs內(nèi)HBV-DNA檢出率和HBV病毒載量都高于HBeAg(-)者,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。其中,PBMCs內(nèi)高病毒載量組的新生兒血清和CBMCs內(nèi)HBV-DNA檢出率均較高。在早期流產(chǎn)孕婦標本檢測發(fā)現(xiàn)HBeAg(+)孕婦流產(chǎn)絨毛Hofbauer細胞內(nèi)HBV-DNA陽性率較高,達46.4%(13/28),且陽性者病毒載量較高,與HBeAg(-)者相比,HBeAg(+)孕婦流產(chǎn)絨毛Hofbauer細胞內(nèi)HBV-DNA陽性檢出率較高,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。以PCR法對Hofbauer細胞內(nèi)HBV-DNA(+)進一步檢測發(fā)現(xiàn)CD16mRNA較正常者增加,與HBV-DNA(-)者相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),且Hofbauer細胞CD16mRNA表達與其HBV-DNA載量有較好的相關性(r=0.65,P0.05)。HBV-DNA(+)組Hofbauer細胞內(nèi)FcyRⅢ表達明顯強于HBV-DNA(-)組,經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。細胞免疫組化染色法結(jié)果顯示HBV感染孕婦和正常流產(chǎn)絨毛Hofbauer細胞內(nèi)均見CD16表達,細胞胞膜和在細胞質(zhì)可見棕色顆粒,其中HBV感染產(chǎn)婦絨毛中的Hofbauer細胞數(shù)量增加且CD16著色較正常對照明顯增強,同時HBV-DNA(+)者的Hofbauer細胞著色較HBV-DNA(-)者的Hofbauer細胞更明顯。HBV感染組胎盤FcyRⅢ mRNA表達較正常組有所升高,差異統(tǒng)計學意義(P0.05),其中宮內(nèi)感染組的FcyRⅢ mRNA表達較非宮內(nèi)感染組明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結(jié)論：Hofbauer細胞為胎盤的巨噬細胞,主要存在于絨毛間質(zhì)中,Hofbauer細胞在抵抗病原微生物感染胎盤的同時,亦可受HBV侵染。Hofbauer細胞是否能被HBV感染與宿主HBeAg表達和HBV-DNA載量相關。FcyRⅢ是Hofbauer細胞的關鍵受體,是細胞活化的重要標志。Hofbauer細胞表面FcyRⅡ的表達與宿主乙肝病毒的載量相關。SP法免疫組織化學染色顯示FcyRⅢ主要表達在Hofbauer細胞胞膜和胞質(zhì)中,呈棕色顆粒其表達強弱與宿主體內(nèi)病毒復制水平和HBV載量正相關。HBV感染Hofbauer細胞后,可激活細胞體內(nèi)級聯(lián)信號傳導系統(tǒng),使Hofbauer細胞內(nèi)FcyRⅢ表達增強,FcyRⅢ與母體循環(huán)的HBsAg-抗HBsAg等免疫復合物結(jié)合引起細胞免疫或淋巴因子的轉(zhuǎn)錄,介導HBV宮內(nèi)感染。
【學位授予單位】：安徽理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.251

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本文編號：1152892