本文關(guān)鍵詞：胎盤Hofbauer細(xì)胞FcγRⅢ介導(dǎo)HBV宮內(nèi)感染

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【摘要】：目的：探討HBV感染孕產(chǎn)婦胎盤組織Hofbauer細(xì)胞表面FcyRⅢ的表達(dá)水平,探討絨毛Hofbauer細(xì)胞FcyRⅢ表達(dá)與宿主體內(nèi)HBV復(fù)制水平的相互關(guān)系以及其在介導(dǎo)HBV垂直傳播中的作用。 方法：篩選58例HBV感染足月分娩產(chǎn)婦的和60例感染HBV的孕婦流產(chǎn)胎盤絨毛。以Ficoll-Hypaque分離HBV感染產(chǎn)婦的外周血PBMCs和其新生兒的臍血CBMCs, PCR法檢測足月分娩HBV感染產(chǎn)婦的外周血和其新生兒臍血HBV-DNA的載量。以胰酶聯(lián)合EDTA消化液消化新鮮的絨毛組織,以RPMI1640完全培養(yǎng)液懸浮制備細(xì)胞懸液,分別采用Ficoll-Hypaque和Percoll密度梯度離心法分離Hofbauer細(xì)胞,以臺(tái)盼藍(lán)染色檢測分離純化的Hofbauer細(xì)胞的活度。取分離提純后的Hofbauer細(xì)胞懸液,以RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整純化后的細(xì)胞濃度為(1-2)×106/mL,以PCR法檢測Hofbauer細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA載量。取分離純化的Hofbauer細(xì)胞懸液以Trizol進(jìn)行總RNA的提取,逆轉(zhuǎn)錄以隨機(jī)引物合成cDNA,檢測Hofbauer細(xì)胞FcyRⅢ的mRNA表達(dá),以lgcDNA/lgGAPDH的比值代表FcyRⅢ mRNA的最終含量,對(duì)比分析FcyRⅢ mRNA的表達(dá)和HBV-DNA載量間相互關(guān)系；HE染色和SP法免疫組織化學(xué)染色進(jìn)一步檢測HBV感染孕婦絨毛Hofbauer細(xì)胞FcyRⅢ表達(dá)與HBV感染水平的關(guān)系,分析不同的HBV感染類型孕產(chǎn)婦組織Hofbauer細(xì)胞FcyRⅢ表達(dá)水平。 結(jié)果：HBeAg(+)足月分娩產(chǎn)婦的PBMCs及其新生兒CBMCs內(nèi)HBV-DNA檢出率和HBV病毒載量都高于HBeAg(-)者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中,PBMCs內(nèi)高病毒載量組的新生兒血清和CBMCs內(nèi)HBV-DNA檢出率均較高。在早期流產(chǎn)孕婦標(biāo)本檢測發(fā)現(xiàn)HBeAg(+)孕婦流產(chǎn)絨毛Hofbauer細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA陽性率較高,達(dá)46.4%(13/28),且陽性者病毒載量較高,與HBeAg(-)者相比,HBeAg(+)孕婦流產(chǎn)絨毛Hofbauer細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA陽性檢出率較高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。以PCR法對(duì)Hofbauer細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA(+)進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)CD16mRNA較正常者增加,與HBV-DNA(-)者相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且Hofbauer細(xì)胞CD16mRNA表達(dá)與其HBV-DNA載量有較好的相關(guān)性(r=0.65,P0.05)。HBV-DNA(+)組Hofbauer細(xì)胞內(nèi)FcyRⅢ表達(dá)明顯強(qiáng)于HBV-DNA(-)組,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。細(xì)胞免疫組化染色法結(jié)果顯示HBV感染孕婦和正常流產(chǎn)絨毛Hofbauer細(xì)胞內(nèi)均見CD16表達(dá),細(xì)胞胞膜和在細(xì)胞質(zhì)可見棕色顆粒,其中HBV感染產(chǎn)婦絨毛中的Hofbauer細(xì)胞數(shù)量增加且CD16著色較正常對(duì)照明顯增強(qiáng),同時(shí)HBV-DNA(+)者的Hofbauer細(xì)胞著色較HBV-DNA(-)者的Hofbauer細(xì)胞更明顯。HBV感染組胎盤FcyRⅢ mRNA表達(dá)較正常組有所升高,差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中宮內(nèi)感染組的FcyRⅢ mRNA表達(dá)較非宮內(nèi)感染組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：Hofbauer細(xì)胞為胎盤的巨噬細(xì)胞,主要存在于絨毛間質(zhì)中,Hofbauer細(xì)胞在抵抗病原微生物感染胎盤的同時(shí),亦可受HBV侵染。Hofbauer細(xì)胞是否能被HBV感染與宿主HBeAg表達(dá)和HBV-DNA載量相關(guān)。FcyRⅢ是Hofbauer細(xì)胞的關(guān)鍵受體,是細(xì)胞活化的重要標(biāo)志。Hofbauer細(xì)胞表面FcyRⅡ的表達(dá)與宿主乙肝病毒的載量相關(guān)。SP法免疫組織化學(xué)染色顯示FcyRⅢ主要表達(dá)在Hofbauer細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)中,呈棕色顆粒其表達(dá)強(qiáng)弱與宿主體內(nèi)病毒復(fù)制水平和HBV載量正相關(guān)。HBV感染Hofbauer細(xì)胞后,可激活細(xì)胞體內(nèi)級(jí)聯(lián)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng),使Hofbauer細(xì)胞內(nèi)FcyRⅢ表達(dá)增強(qiáng),FcyRⅢ與母體循環(huán)的HBsAg-抗HBsAg等免疫復(fù)合物結(jié)合引起細(xì)胞免疫或淋巴因子的轉(zhuǎn)錄,介導(dǎo)HBV宮內(nèi)感染。
【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.251

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1152892