發(fā)布時間：2017-11-05 02:10

  本文關鍵詞：納秒電脈沖致人卵巢癌細胞及其順鉑耐藥株DNA損傷時間效應

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【摘要】：卵巢癌是女性生殖器常見惡性腫瘤之一,由于早期缺乏典型癥狀,且篩查手段有限,故診斷十分困難,就診時大多已發(fā)展為晚期,但晚期療效又不理想。雖然卵巢癌的發(fā)病率居婦科惡性腫瘤的第三位,低于宮頸癌和子宮內膜癌,但其死亡率卻位于婦科惡性腫瘤的首位。盡管已有多種治療手段應用于臨床,但其5年生存率仍較低。順鉑是臨床治療多種腫瘤重要的化療試劑,它的主要作用靶點是DNA。放、化療均通過損傷腫瘤細胞DNA來達到治療目的,治療過程中腫瘤細胞將逐漸產生抗性,導致治療失敗。納秒電脈沖(nanosecond electric pulses, nsEP)是一種很有潛力的治療方法,它可跨膜影響細胞內結構,能夠誘導細胞凋亡、抑制血管生成以及破壞腫瘤微環(huán)境等,從而導致腫瘤細胞壞死。nsEP作為一種不需要藥物的純電場治療,且無熱消融,有望成為腫瘤治療的一種新型手段。目的：本研究旨在通過研究nsEP對人卵巢癌順鉑敏感和耐藥細胞株DNA損傷的時間效應,探討nsEP引起的DNA損傷與細胞死亡之間的相關性。方法：取對數(shù)生長期的A2780細胞或者C30細胞制備密度為5×105/ml的單細胞懸液,將細胞置于漩渦混勻器上面混勻后取1ml細胞于24孔板中,每次脈沖處理時每一個24孔板只有一個孔中盛有細胞。然后調整電極間距離為1 cm,電壓6 kV(即場強為6kV/cm),脈寬為24 ns的脈沖電場處理60 s。對照組細胞給予假脈沖處理。每個時間點均設有實驗組和對照組。1,脈沖處理完畢后,將24孔板中所有的細胞回收到EP管中再次混勻以后用于后續(xù)實驗。nsEP處理后繼續(xù)培養(yǎng)細胞于0 h、4 h、8 h、12 h和24 h用CCK-8試劑盒測定細胞活性,并計算細胞死亡率。每個時間點均設置有實驗組(nsEP處理后)、對照組(nsEP假處理)和空白對照組(不含細胞,僅加入100μ1實驗用培養(yǎng)基)。2,nsEP處理后4 h、8 h、12 h、24 h,采用堿性單細胞凝膠電泳實驗(彗星實驗)檢測細胞DNA損傷。利用CASP軟件測定對照組尾DNA的95th百分位數(shù)設置為彗星形成的閾值。并測量實驗組75th百分位數(shù)尾長(Tail Length, TL),尾矩(Tail Moment, TM,尾部DNA%×尾長)和Olive尾矩(Olive Tail Moment, OTM,尾部DNA%×尾矩長),并計算彗星形成率(%)。結果：1,nsEP處理后0-8 h,C30和A2780細胞的生存率逐漸降低,8-24 h逐漸上升,8 h時細胞生存率最低(P0.05)：4h(86.46% vs 76.29%),8h(78.52% vs 65.96%),12h(84.28 %vs 75.29%),24h(85.11%vs80.87%)。C30細胞的生存率高于A2780細胞(P0.05)。2,從單細胞凝膠電泳結果圖可明顯看出對照組中A2780和C30細胞均未見彗尾出現(xiàn)。在4h、8h、12h和24h的彗星圖像中,A2780細胞的尾長均分別比C30細胞的長。這在某種程度上說明了A2780細胞更易受到nsEP的作用而受到損傷。A2780細胞的死亡率與彗星形成率在4-24 h均高于C30細胞。這又從另一方面證實了A2780的敏感性。統(tǒng)計學分析顯示,A2780和C30細胞的死亡率均與彗星形成率呈正相關(r=0.997,P0.05；r=0.998,P0.05)。這說明細胞的死亡與DNA損傷具有相關性。3,A2780和C30細胞的TL、TM、OTM和其75 th百分位數(shù)均隨時間變化而變化,最大值出現(xiàn)于8 h。這說明細胞的損傷于8h時達到了一個高峰,隨后的轉折有可能是DNA損傷修復機制的啟動所致。A2780的TL,TM和OTM均高于C30(P0.05)。結論：nsEP對順鉑敏感和耐藥卵巢癌細胞的DNA損傷具有時間效應；nsEP對人卵巢癌順鉑敏感細胞株和耐藥細胞株的DNA損傷效應存在差異,nsEP對順鉑敏感細胞株的損傷高于耐藥細胞株；nsEP所致細胞死亡與DNA損傷有關。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31

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本文編號：1142120