發(fā)布時間：2017-10-30 03:21

  本文關(guān)鍵詞：過表達鈣周期蛋白S100A6對子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞生物學(xué)活性及β-catenin水平的影響

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【摘要】：目的:探討鈣周期結(jié)合蛋白S100A6對子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞增殖、遷移、凋亡的影響,以及對細胞中β-catenin表達水平的影響。方法:體外培養(yǎng)EMs在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞,將慢病毒載體和表達S100A6的重組慢病毒Lv-S100A6分別處理在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞分別作為干預(yù)組和實驗組,設(shè)立對照組(空白組),通過CCK-8法檢測細胞增殖,Transwell觀察細胞遷移,流式細胞儀觀察細胞凋亡,Western-blot和RT-PCR檢測細胞中β-catenin的蛋白和m RNA表達情況。結(jié)果:CCK-8實驗結(jié)果表明,Lv-S100A6組細胞的增殖活性明顯高于干預(yù)組(negative group)以及對照組(blank group)(p0.05),Transwell實驗表明Lv-S100A6組細胞的遷移數(shù)(180±14.2)明顯高于干預(yù)組(93±10.6)以及對照組(89±18.5)。細胞凋亡實驗表明,Lv-S100A6組細胞的凋亡率(2.99±1.12)%明顯低于對照組(13.48±1.20)%和干預(yù)組(14.40±1.08)%(p0.05)。Westren-blot結(jié)果顯示,Lv-S100A6組、干擾組和對照組中在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞中β-catenin的蛋白的IOD值分別為0.668±0.016、0.326±0.008和0.314±0.012(p0.05),RT-PCR結(jié)果顯示,Lv-S100A6組、干擾組和對照組中在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞中β-catenin m RNA的IOD值分別為0.837±0.010、0.512±0.011和0.498±0.012(p0.05),而S100A6 m RNA的IOD值分別為0.495±0.015、0.242±0.021和0.231±0.018(p0.05)。結(jié)論:通過上調(diào)細胞中S100A6的表達,能增加EMs在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞的增殖能力、促進細胞的遷移并且抑制細胞的凋亡,同時可以上調(diào)細胞中β-catenin的表達。
【關(guān)鍵詞】：S100A6 子宮內(nèi)膜異位癥 增殖 遷移 β-catenin
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R711.71
【目錄】：

• 摘要3-4
• 英文摘要4-8
• 中英文對照表8-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料11-15
• 2.1 實驗細胞11
• 2.2 主要試劑11-12
• 2.3 主要儀器12-13
• 2.4 主要液體的配置13-15
• 第3章 方法15-24
• 3.1 實驗分組15
• 3.2 細胞培養(yǎng)15-17
• 3.2.1 細胞復(fù)蘇15
• 3.2.2 細胞換液15
• 3.2.3 細胞傳代15-16
• 3.2.4 細胞凍存16
• 3.2.5 細胞計數(shù)16-17
• 3.3 S100A6 轉(zhuǎn)染17-18
• 3.3.1 S100A6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染17
• 3.3.2 重組慢病毒S100A6 轉(zhuǎn)染17-18
• 3.4 細胞增殖實驗18
• 3.5 細胞遷移實驗18
• 3.6 細胞凋亡實驗18-19
• 3.7 RT-PCR法檢測細胞中 β-catenin mRNA及S100A6 的表達19-21
• 3.7.1 總RNA提取19
• 3.7.2 逆轉(zhuǎn)錄過程19-21
• 3.7.3 瓊脂糖凝膠電泳21
• 3.8 Western-blot檢測細胞中 β-catenin蛋白表達水平21-23
• 3.8.1 總蛋白的提取 （使用總蛋白提取試劑盒操作）21-22
• 3.8.2 制膠及電泳22
• 3.8.3 轉(zhuǎn)膜22-23
• 3.8.4 免疫反應(yīng)及曝光23
• 3.9 統(tǒng)計學(xué)處理23-24
• 第4章 結(jié)果24-30
• 4.1 熒光顯微鏡下在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)染效果24-25
• 4.2 過表達S100A6 能促進EMs在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞增殖25
• 4.3 過表達S100A6 能增強EMs在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞遷移能力25-26
• 4.4 過表達S100A6 能抑制EMs在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞的凋亡26-27
• 4.5 過表達S100A6 能增強細胞內(nèi)S100A6 mRNA的表達27-28
• 4.6 過表達S100A6 能增強EMs在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞內(nèi) β-catenin mRNA的表達28-29
• 4.7 過表達S100A6 能上調(diào)EMs在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞中 β-catenin的表達29-30
• 第5章 討論30-33
• 第6章 結(jié)論與展望33-34
• 6.1 結(jié)論33
• 6.2 展望33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻35-38
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果38-39
• 綜述39-46
• 參考文獻44-46

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：1115890