本文關(guān)鍵詞：IVF-ET周期中不同原核數(shù)受精卵的發(fā)育潛能及其囊胚染色體組成的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：背景與目的在人類體外授精-胚胎移植(in vitro fertilization embryo transfer,IVF-ET)助孕過程中,國(guó)內(nèi)外的大多數(shù)生殖中心一般于授精后16~18 h對(duì)胚胎行原核數(shù)目的觀察和評(píng)價(jià)。胚胎學(xué)家們通過對(duì)大量工作進(jìn)行總結(jié)后普遍認(rèn)為,正常受精的胚胎在授精后的16~18 h可觀察到明確存在的2個(gè)原核(pronucleus,PN)及2個(gè)極體(polar body,PB)。隨后再結(jié)合胚胎的卵裂及整體發(fā)育情況,將那些形態(tài)學(xué)評(píng)分較高的卵裂期胚胎或囊胚挑選出來,進(jìn)行移植或者冷凍。而在實(shí)際的胚胎實(shí)驗(yàn)室工作中,往往會(huì)出現(xiàn)一些異常受精胚胎,其中1PN胚胎和0PN(2PB)胚胎作為異常受精的胚胎,與多原核胚胎和發(fā)育停滯的2PN胚胎一起作為廢棄胚胎銷毀。實(shí)際上,有一定比例的1PN及0PN(2PB)胚胎可能是因?yàn)殄e(cuò)過了最適宜的觀察時(shí)間導(dǎo)致。如果把這兩類胚胎全部銷毀,將在一定程度上造成卵母細(xì)胞及胚胎資源的浪費(fèi)。已有不少報(bào)道指出,有相當(dāng)一部分的不孕癥患者移植1PN胚胎及0PN(2PB)胚胎后生育出健康的子代。在IVF-ET助孕過程中,挑選出健康的胚胎進(jìn)行移植是成功妊娠的關(guān)鍵所在。近年來,隨著遺傳學(xué)診斷方法的不斷發(fā)展,植入前胚胎的染色體診斷技術(shù)得到了長(zhǎng)足的發(fā)展,最主要的是胚胎植入前遺傳學(xué)診斷(preimplantation genetic diagnosis,PGD)及胚胎植入前遺傳學(xué)篩查(preimplantation genetic screening,PGS)。目前,用于PGD及PGS的實(shí)驗(yàn)技術(shù)主要有熒光原位雜交技術(shù)(fluorescencein situ hybridization,FISH)、微陣列比較基因組雜交分析(array-comparative genome hybridization,array-CGH)、單核苷酸多態(tài)微陣列技術(shù)(single nucleotide polymorphism microarray,SNP-microarray)和第二代測(cè)序法(next generation sequencing,NGS)。其中array-CGH具有高效率、高通量、高精度、低消耗等特點(diǎn),已在PGS臨床工作中得到了廣泛的應(yīng)用。本研究的開展經(jīng)鄭州大學(xué)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過,研究進(jìn)行過程中做到充分尊重患者的知情權(quán)和自主選擇權(quán)。研究通過對(duì)787個(gè)IVF周期和298個(gè)ICSI周期患者的胚胎培養(yǎng)情況及基本資料進(jìn)行分析,探討1PN胚胎及0PN(2PB)胚胎這類“異常受精”胚胎的發(fā)育潛能及與形成這兩類胚胎的可能影響因素。并觀察研究中IVF周期患者胚胎的原核情況及卵裂情況,并將其體外培養(yǎng)至囊胚階段(最多培養(yǎng)至第6日),觀察其囊胚形成情況,檢測(cè)0PN(2PB)、1PN及2PN囊胚的染色體組成,以探尋選擇高發(fā)育潛能的1PN及0PN(2PB)胚胎的方法。材料和方法本研究選取了鄭州大學(xué)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)研究所自2014年7月至2014年10月行IVF-ET助孕的患者(IVF周期數(shù)=787;ICSI周期數(shù)=298),經(jīng)患者知情同意后,觀察并記錄其胚胎繼續(xù)培養(yǎng)情況,探討1PN及0PN(2PB)胚胎這類“異常受精”胚胎的發(fā)育潛能,同時(shí)分析這些患者的臨床資料,研究與1PN及0PN(2PB)胚胎形成的相關(guān)影響因素。同時(shí)對(duì)787個(gè)IVF周期患者的胚胎于體外培養(yǎng)至第6日,觀察其囊胚形成情況。取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行活檢,采用微陣列比較基因組雜交分析(array-CGH)檢測(cè)0PN(2PB)、1PN及2PN來源囊胚的染色體組成(其中2PN囊胚來源于同期行PGS助孕的患者),以探尋選擇高發(fā)育潛能的1PN及0PN(2PB)胚胎的方法。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料結(jié)果用x±s(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)或中位數(shù)(最小值-最大值)表示,組間比較采用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用率表示,組間比較采用c2檢驗(yàn)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1不同原核數(shù)來源胚胎發(fā)育潛能的比較1PN來源胚胎和0PN(2PB)來源胚胎均可卵裂并形成囊胚,但卵裂率(分別為90.16%和88.11%)和囊胚形成率(分別為17.09%和30.03%)均顯著低于2PN胚胎(卵裂率和囊胚形成率分別為98.40%和45.71%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說明1PN及0PN(2PB)來源胚胎有一定的發(fā)育潛能,但較2PN胚胎的發(fā)育潛能低。2女方年齡與不同原核數(shù)胚胎形成之間的關(guān)系根據(jù)患者的年齡對(duì)患者進(jìn)行分組,界值為30歲、35歲。與35歲組的患者相比較,30-35歲組患者的2PN胚胎卵裂率、0PN(2PB)胚胎形成率及其卵裂率較高,且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而2PN胚胎的形成率、1PN胚胎形成率及其卵裂率則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。30歲組患者與35歲組患者比較后,只有0PN(2PB)胚胎的卵裂率較高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其他各項(xiàng)之間則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3體外受精方式與不同原核數(shù)胚胎形成的關(guān)系常規(guī)IVF周期中,患者的平均獲卵數(shù)、1PN胚胎形成率和0PN(2PB)胚胎形成率均高于ICSI周期(3.65%vs.3.01%,P0.05;4.93%vs.1.07%,P0.05);而兩組之間的1PN胚胎及0PN(2PB)胚胎的卵裂率(90.16%vs.92.96%,P0.05;88.11%vs.84.0%,P0.05)及囊胚形成率(17.09%vs.7.58%,P0.05;30.03%vs.14.29%,P0.05)并無顯著性差異。4不同獲卵數(shù)對(duì)不同原核數(shù)胚胎形成的關(guān)系根據(jù)患者的獲卵數(shù)對(duì)患者進(jìn)行分組,界值分別為5、10、15、20。各組患者的1PN胚胎形成率、卵裂率以及0PN(2PB)胚胎的形成率之間,并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但各組之間的2PN胚胎形成率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率以及0PN(2PB)胚胎卵裂率則存在顯著性的差異(P0.05)。分別以是否有1PN胚胎形成和是否有0PN(2PB)胚胎形成為因變量,納入患者的年齡、基礎(chǔ)性激素(FSH、LH、E2、P、T、PRL)水平、體重指數(shù)(Body Mass Index,BMI)、受精方式(IVF/ICSI)、獲卵數(shù)、MⅡ卵子數(shù)和正常受精胚胎數(shù)為自變量,行Logistic回歸分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為α=0.05,若P0.05則認(rèn)為組間的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Logistic回歸分析的結(jié)果顯示,1PN胚胎及0PN(2PB)胚胎的形成均與患者的受精方式、MⅡ卵子數(shù)、2PN胚胎數(shù)顯著相關(guān)(P0.05),而與患者的年齡、基礎(chǔ)性激素水平、BMI和獲卵數(shù)等無關(guān)(P0.05)。另外,與ICSI周期相比較而言,IVF周期更可能形成0PN(2PB)及1PN胚胎(P0.05)。當(dāng)患者的MⅡ卵數(shù)越多,2PN胚胎數(shù)越少時(shí),越易形成1PN胚胎和0PN(2PB)胚胎(P0.05)。6 IVF周期不同原核數(shù)來源囊胚染色體組成的比較對(duì)787個(gè)IVF周期患者的胚胎進(jìn)行體外培養(yǎng),觀察其原核數(shù)目、卵裂情況及囊胚的形成情況。采用囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞活檢+array-CGH技術(shù)對(duì)形成的囊胚行染色體檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果顯示:與2PN來源的囊胚(69.39%)相比,0PN(2PB)及1PN來源囊胚的正常染色體率(64.71%和50.0%)明顯較低,且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。然而,對(duì)0PN(2PB)與1PN來源的囊胚進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn),與1PN囊胚相比較,0PN(2PB)囊胚的染色體正常率略高,但兩組間的差異并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7不同發(fā)育天數(shù)的不同原核數(shù)來源囊胚的比較對(duì)于1PN及0PN(2PB)來源的囊胚而言,D6囊胚比D5囊胚正常染色體比例高,但1PN囊胚組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(72.22%vs.37.50%,P0.05),而0PN(2PB)囊胚組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(71.79%vs.55.17%,P0.05)。而2PN囊胚組則與此相反,其D5形成的囊胚較D6形成的囊胚染色體正常的比例略高,并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(82.14%vs.52.38%,P0.05)。5采用Logistic回歸分析研究1PN及0PN(2PB)胚胎形成的相關(guān)影響因素結(jié)論1 1PN及0PN(2PB)胚胎均有一定的發(fā)育潛能,但較2PN胚胎低;且染色體組成分析顯示,1PN及0PN(2PB)囊胚染色體正常的比例明顯低于2PN囊胚;2體外受精方式的不同可能導(dǎo)致1PN和0PN(2PB)胚胎的形成率不同,IVF周期較ICSI周期的1PN和0PN(2PB)胚胎形成率高;3 0PN(2PB)囊胚的染色體二倍體率較1PN囊胚高;發(fā)育至D6的0PN(2PB)及1PN囊胚較D5囊胚染色體二倍體率高,尚需進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：單原核(1PN)胚胎 0PN(2PB)胚胎 囊胚 Logistic回歸分析 微陣列比較基因組雜交分析(a-CGH)
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R714.8
【目錄】：

• 摘要4-9
• Abstract9-15
• 主要英文縮略詞索引15-18
• 前言18-24
• 材料與方法24-41
• 結(jié)果41-47
• 討論47-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 綜述 體外受精-胚胎移植周期中1PN胚胎的研究進(jìn)展61-69
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷69-70
• 攻讀學(xué)位期間的學(xué)術(shù)研究情況70-72
• 致謝72-73

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本文編號(hào)：1097322