發(fā)布時(shí)間：2017-10-22 21:28

  本文關(guān)鍵詞：宮腔粘連子宮內(nèi)膜中整合素αVβ3、LIF的表達(dá)及麒麟丸改善宮腔粘連子宮內(nèi)膜容受性的動(dòng)物研究

  更多相關(guān)文章： 宮腔粘連 子宮內(nèi)膜容受性 麒麟丸 整合素αVβ3 白血病抑制因子

【摘要】：目的采用免疫組織化學(xué)法(IHC)及半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR),通過對(duì)比宮腔粘連組患者與正常對(duì)照組患者種植窗期子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3(IntegrinαVβ3)和白血病抑制因子(LIF)蛋白及基因的表達(dá)情況,進(jìn)而探討宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜容受性的改變,明確整合素αVβ3及LIF能否作為判定改善IUA患者子宮內(nèi)膜容受性的評(píng)價(jià)指標(biāo)。通過研究麒麟丸對(duì)宮腔粘連SD大鼠孕早期子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3(IntegrinαVβ3)及白血病抑制因子(LIF)蛋白及基因表達(dá)的影響,探討麒麟丸改善宮腔粘連大鼠子宮內(nèi)膜組織容受性的可能機(jī)制,以期為臨床上治療IUA所致子宮內(nèi)膜容受性下降引起生育障礙性疾病等棘手問題提供新思路、新方法。方法1.臨床實(shí)驗(yàn):選取已確診為宮腔粘連并在我院行宮腔鏡下宮腔粘連分離術(shù)的15例患者為研究組,因子宮縱隔、子宮內(nèi)膜息肉等疾病需行宮腔鏡手術(shù)治療的15例患者為對(duì)照組。各組術(shù)中收集適量子宮內(nèi)膜組織分為兩份,一份標(biāo)本經(jīng)甲醛固定后行免疫組織化學(xué)檢測(cè)法檢測(cè)整合素αVβ3及LIF的蛋白含量;另一份標(biāo)本經(jīng)液氮充分研磨后提取組織RNA,行實(shí)時(shí)熒光定量測(cè)定整合素αVβ3及LIF m RNA的表達(dá),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):選取健康成熟雌性SD大鼠36只,隨機(jī)分為模型中藥組12只,模型對(duì)照組12只,空白對(duì)照組12只,用陰道涂片的方式監(jiān)測(cè)各組大鼠動(dòng)情周期,大鼠動(dòng)情期利用苯酚膠漿法對(duì)模型中藥組、模型對(duì)照組大鼠建立宮腔粘連模型,空白對(duì)照組行假手術(shù)處理,造模術(shù)后第10天各組大鼠隨機(jī)處死2只,取造模側(cè)子宮組織行HE染色和Masson染色,以確定造模是否成功,造模成功次日開始對(duì)模型中藥組大鼠灌胃麒麟丸混懸液2ml,模型對(duì)照組及空白對(duì)照組分別灌胃生理鹽水2ml,各組均2次/日,各組大鼠于灌胃15天后按2:1雌雄合籠,使其自然受孕,各組大鼠于妊娠第5天斷頸處死,收集造模側(cè)子宮組織,取其中一段經(jīng)甲醛固定后行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)整合素αVβ3、LIF的蛋白表達(dá)量,另一段縱向剖開刮取子宮內(nèi)膜組織經(jīng)液氮充分研磨后提取組織RNA,行實(shí)時(shí)熒光定量測(cè)定整合素αVβ3及LIF m RNA的表達(dá),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1.臨床實(shí)驗(yàn):臨床組織蛋白含量檢測(cè)結(jié)果:宮腔粘連組子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3及LIF的蛋白表達(dá)水平明顯低于正常對(duì)照組;臨床組織m RNA含量檢測(cè)結(jié)果:宮腔粘連組子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3及LIF的m RNA表達(dá)水平明顯低于正常對(duì)照組。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):A確定造模:造模術(shù)后第10天,模型中藥組及模型對(duì)照組隨機(jī)處死的SD大鼠經(jīng)HE染色均可見宮腔部分甚至近乎完全堵塞,粘膜下腺體減少,纖維化增生明顯,排列紊亂;空白對(duì)照組隨機(jī)處死的SD大鼠經(jīng)HE染色可見宮腔形態(tài)規(guī)則,內(nèi)膜較厚,間質(zhì)內(nèi)可見豐富的腺體、血管和少量排列整齊的成纖維細(xì)胞。模型中藥組和模型對(duì)照組的SD大鼠經(jīng)Masson染色可見子宮粘膜下層膠原纖維明顯增多,排列紊亂且致密;空白對(duì)照組的SD大鼠經(jīng)Masson染色可見子宮粘膜下層有少量的膠原纖維,呈藍(lán)色梭形,排列規(guī)則。B整合素αVβ3、LIF的表達(dá):模型中藥組、模型對(duì)照組子宮內(nèi)膜整合素αVβ3、LIF蛋白及m RNA表達(dá)均明顯低于空白對(duì)照組;模型中藥組子宮內(nèi)膜整合素αVβ3、LIF蛋白及m RNA表達(dá)明顯高于模型對(duì)照組,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.本實(shí)驗(yàn)中宮腔粘連組患者子宮內(nèi)膜中整合素αVβ3、LIF蛋白及m RNA的表達(dá)均較正常對(duì)照組患者子宮內(nèi)膜低,提示宮腔粘連影響了子宮內(nèi)膜容受性的建立。2.模型對(duì)照組大鼠子宮內(nèi)膜整合素αVβ3、LIF的表達(dá)較空白對(duì)照組低,提示宮腔粘連大鼠子宮內(nèi)膜容受性下降,模型中藥組大鼠經(jīng)麒麟丸灌胃后整合素αVβ3、LIF的表達(dá)較模型對(duì)照組上調(diào),提示麒麟丸對(duì)IUA大鼠子宮內(nèi)膜容受性具有改善作用,可能與上調(diào)子宮內(nèi)膜中整合素αVβ3、LIF的表達(dá)有關(guān),但其具體作用機(jī)制和靶點(diǎn)尚需進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：宮腔粘連 子宮內(nèi)膜容受性 麒麟丸 整合素αVβ3 白血病抑制因子
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R711.74
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 縮略詞表12-13
• 前言13-17
• 第一部分 臨床研究17-28
• 1 臨床資料17-19
• 1.1 病例來源及分組17
• 1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)17-18
• 1.3 病例選擇標(biāo)準(zhǔn)18-19
• 2 研究方法19-25
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25
• 4 結(jié)果25-27
• 附圖 127-28
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究28-38
• 1 SD大鼠宮腔粘連模型建立28-29
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物28
• 1.2 造模試劑和器材28
• 1.3 造模方法28-29
• 1.4 檢驗(yàn)造模29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)用藥及制備29
• 2.2 給藥方法29
• 2.3 收集標(biāo)本29-30
• 2.4 檢測(cè)方法30-31
• 3 結(jié)果判定31-32
• 3.1 檢測(cè)宮腔粘連模型的建立31-32
• 3.2 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果的判定32
• 3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)果的判定32
• 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法32
• 5 結(jié)果32-36
• 附圖 236-38
• 討論38-49
• 1 課題設(shè)計(jì)的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)背景38-43
• 1.1 宮腔粘連與子宮內(nèi)膜容受性38-40
• 1.2 整合素αVβ3與子宮內(nèi)膜容受性40-41
• 1.3 LIF與子宮內(nèi)膜容受性41-43
• 1.4 治療43
• 2 課題設(shè)計(jì)的中醫(yī)理論基礎(chǔ)43-47
• 2.1 中醫(yī)對(duì)宮腔粘連所致生育障礙的病因病機(jī)認(rèn)識(shí)43-44
• 2.2 中醫(yī)藥對(duì)宮腔粘連所致生育障礙的治療44-45
• 2.3 麒麟丸與子宮內(nèi)膜容受性45-47
• 3 本課題創(chuàng)新之處47
• 4 本課題相關(guān)問題47
• 5 進(jìn)一步研究47-49
• 結(jié)語(yǔ)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 附錄 文獻(xiàn)綜述 中醫(yī)藥治療宮腔粘連的研究進(jìn)展57-65
• 參考文獻(xiàn)63-65
• 致謝65

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本文編號(hào)：1080210