本文關(guān)鍵詞：Rap1GAP缺失表達(dá)對卵巢癌惡性生物行為的影響

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【摘要】：目的：闡明卵巢癌組織／細(xì)胞中Rap1GAP差異表達(dá)程度及可能機(jī)理；探討Rap1GAP蛋白對卵巢癌細(xì)胞惡性生物行為的影響及其可能機(jī)制。方法：1.通過GST-Pull down及Western blotting檢測不同組織類型卵巢癌組織中Rap1GAP、C3G、Rap1-GTP的蛋白表達(dá)水平；2.RT-PCR及Western blotting檢測了卵巢癌組織和卵巢癌細(xì)胞株中Rap1GAP的表達(dá)情況；3.通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)干擾及外源轉(zhuǎn)染Rap1GAP的表達(dá),篩選并建立穩(wěn)定的目的細(xì)胞株；4.觀察沉默原本呈高表達(dá)Rap1GAP的OVCAR3細(xì)胞株和外源轉(zhuǎn)染原本呈低表達(dá)Rap1GAP的Hey細(xì)胞株生物行為的改變及其可能機(jī)制：MTT實(shí)驗(yàn)和平板克隆實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞增殖,Transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞的惡性侵襲能力,免疫熒光觀察細(xì)胞的形態(tài)變化,去甲基化處理及RT-PCR觀察Rap1GAP表達(dá)的恢復(fù)情況,Western blotting檢測Rap1GAP可能影響的信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：1.GST-Pull down實(shí)驗(yàn)觀察到,與正常組織和良性卵巢腫瘤相比,Rap-GTP表達(dá)升高的卵巢癌組織中,Rap1GAP和C3G均參與調(diào)節(jié)Rap酶的活性；2.RT-PCR及免疫印跡觀察到,與自身正常組織相比,癌灶中Rap1GAP的表達(dá)降低始于轉(zhuǎn)錄階段；3.通過慢病毒轉(zhuǎn)染,成功篩選出低表達(dá)Rap1GAP的OVCAR3細(xì)胞和高表達(dá)Rap1GAP的Hey細(xì)胞；4.通過功能學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察到,敲低Rap1GAP后,OVCAR3細(xì)胞的增殖、侵襲能力均增強(qiáng),HEY細(xì)胞過表達(dá)Rap1GAP后細(xì)胞增殖、侵襲能力減弱,并且觀察到細(xì)胞形態(tài)改變,即F-actin在胞膜邊緣聚集增加板狀偽足和片狀偽足增加。5.機(jī)制的探討中發(fā)現(xiàn),在高Rap1GAP表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞OVCAR3中敲低RapGAP,會引起Wnt通路中關(guān)鍵蛋白GSK3βser9、β-catenin、c-myc、cyclinDl的表達(dá)上升,與此一致的是,在低Rap1GAP表達(dá)的細(xì)胞HEY中外源強(qiáng)制表達(dá)Rap1GAP,上述經(jīng)典Wnt信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)降低；6.去甲基化處理多個卵巢癌細(xì)胞株可以引起Rap1GAPmRNA的表達(dá)升高。結(jié)論：我們的研究提示,啟動子甲基化可能是卵巢癌Rap1GAP缺失表達(dá)的原因；Rap1GAP可能通過抑制Rap1-GTP水解而保持酶活性從而促進(jìn)腫瘤的侵襲,同時可能抑制Wnt通路促進(jìn)細(xì)胞惡性增殖。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 Rap1GAP C3G Rap1-GTP Wnt 甲基化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 1 材料和方法13-23
• 2 結(jié)果23-38
• 3 討論38-42
• 全文總結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 文獻(xiàn)綜述47-59
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 致謝59-60
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄60

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本文編號：1067656