本文關鍵詞：STR優(yōu)化位點及多重PCR技術在快速產前診斷中的臨床應用

  更多相關文章： 染色體非整倍體 產前診斷 短串聯(lián)重復序列 雜合度 多重PCR技術

【摘要】：目的:1.選擇并驗證適用于漢族人群特點的13、18、21、X、Y染色體短串聯(lián)重復序列(short tandem repeats STR)位點;2.對所選擇位點的擴增條件進行優(yōu)化,使其以熒光定量聚合酶鏈反應技術(quantitative fluorescent polymerase chain reaction,QF-PCR),并在一個反應體系內完成檢測;3.應用于胎兒常見染色體非整倍體的快速產前診斷,并對其檢測有效性進行臨床驗證方法:1.通過文獻檢索方式確認符合漢族人群特點的13、18、21、X、Y染色體短串聯(lián)重復序列位點;2.通過48個正常漢族人樣本的多態(tài)性分析,評估位于13、18、21、X、Y染色體上STR位點的多態(tài)信息含量,挑選遺傳多態(tài)性高的STR位點,并優(yōu)化成一個檢測體系;3.通過136例臨床樣本評價該檢測體系對常見染色體非整倍體檢測的效率,并與染色體核型分析結果進行比對,評價所建立檢測方法的有效性。結果:1.通過雜合度測試優(yōu)選出14個STR位點,分別為:D13S258(0.88)、D13S305(0.90)、D13S634(0.92)、D13S742(0.83)、D18S535(0.81)、D18S1002(0.69)、D18S386(0.75)、D18S391(0.77)、D21S1435(0.75)、D21S1412(0.94)、D21S1446(0.58)、D21S1414(0.85)、DXS7132(0.77)、DXY218(0.71),及性染色體定性定量特異性非STR位點AMXY、SRY、TAF9B等共17個位點;2.通過引物調整、擴增條件的優(yōu)化,獲得一個多重擴增體系完成所有位點的QF-PCR檢測;3.將該體系應用于136例羊水、臍血、CVS樣本,共檢出38例染色體數目異常,其中17例21三體,4例13三體,12例18三體,1例47,XXX,2例45,XO,1例47,XXY,1例47,XYY,與核型分析結果完全一致。結論:本文研究所獲得的14個STR位點在漢族人群中呈現(xiàn)較高的遺傳多態(tài)性,與3個性染色體定性定量位點共同構成一個多重QF-PCR檢測體系,對13、18、21、X、Y染色體的非整倍體檢出率100%,顯示本研究所建立的QF-PCR技術能夠快速、準確、經濟、高效地應用于漢族人群常見非整倍體的快速產前診斷。
【關鍵詞】：染色體非整倍體 產前診斷 短串聯(lián)重復序列 雜合度 多重PCR技術
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.5;R440
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 中英文對照9-12
• 前言12-15
• 第一部分 漢族人群第 13、18、21號及性染色體STR位點的選擇和確認15-35
• 1.1 材料與方法16-25
• 1.1.1 研究對象16
• 1.1.2 主要儀器16-17
• 1.1.3 主要試劑17
• 1.1.4 實驗方法17-25
• 1.2 結果25-27
• 1.3 討論27-34
• 1.3.1 STR位點的選擇27-29
• 1.3.2 20個初篩獲得的STR位點的遺傳學特點29-33
• 1.3.3 初選位點與英國位點的比較33-34
• 1.4 結論34-35
• 第二部分 建立及優(yōu)化多重QF-PCR體系35-47
• 2.1 材料與方法36-40
• 2.1.1 實驗對象36
• 2.1.2 主要儀器36-37
• 2.1.3 主要試劑37
• 2.1.4 試驗方法37-40
• 2.2 結果40-43
• 2.2.1 優(yōu)化STR位點的確定40-41
• 2.2.2 確定性別基因的確定41-43
• 2.2.3 多重PCR檢測體系的優(yōu)化43
• 2.3 討論43-46
• 2.3.1 PCR反應條件的選擇和原則43-44
• 2.3.2 最終位點確定和一步法QF-PCR的解決方案44-46
• 2.4 結論46-47
• 第三部分 新建QF-PCR體系的驗證及臨床應用價值47-71
• 3.1 材料與方法48-55
• 3.1.1 研究對象48-49
• 3.1.2 主要儀器49-50
• 3.1.3 主要試劑50
• 3.1.4 試驗方法50-55
• 3.2 結果55-67
• 3.2.1 驗證結果55-63
• 3.2.2 12例18三體STR位點的分析63-64
• 3.2.3 100例樣本結果64-65
• 3.2.4 不同產前指征的妊娠婦女和異常風險率的關系65-67
• 3.3 討論67-70
• 3.3.1 QF-PCR與核型分析的比較67-68
• 3.3.2 新建QF-PCR體系的優(yōu)勢68-69
• 3.3.3 QF-PCR技術應用的臨床意義69-70
• 3.3.4 展望70
• 3.4 結論70-71
• 結論71-72
• 參考文獻72-79
• 致謝79-80

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前6條

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本文編號：1064178