本文關(guān)鍵詞：人蛻膜組織子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究

  更多相關(guān)文章： 子宮內(nèi)膜干細(xì)胞 細(xì)胞表面標(biāo)記抗原 分離 誘導(dǎo)分化 鑒定

【摘要】：研究認(rèn)為,人子宮內(nèi)膜功能層和基底層中存在子宮內(nèi)膜干細(xì)胞(endometrial stem cells, EnSCs),EnSCs與子宮內(nèi)膜的生理性再生及子宮內(nèi)膜異位癥、子宮內(nèi)膜息肉等疾病有明顯的相關(guān)性,另外EnSCs在子宮內(nèi)膜再生、盆腔臟器脫垂、膀胱尿道組織修復(fù)等已有廣泛的研究。當(dāng)前國(guó)內(nèi)外主要從正常子宮內(nèi)膜中獲取EnSCs,而由于刮宮、炎癥等引起的子宮內(nèi)膜重度損傷患者,EnSCs的獲取將成為困難。研究認(rèn)為宮腔粘連的發(fā)生主要由子宮內(nèi)膜基底層中EnSCs的不足或功能異常引起,所以我們嘗試從蛻膜中提取EnSCs并儲(chǔ)存,該方法具有操作方便并且不受倫理限制等優(yōu)點(diǎn),可為日后的相關(guān)疾病中組織修復(fù)的應(yīng)用提供可靠的細(xì)胞基礎(chǔ)。本研究從蛻膜組織中分離、純化、擴(kuò)增、培養(yǎng)EnSCs,并對(duì)EnSCs進(jìn)行干細(xì)胞特性鑒定,通過(guò)體外誘導(dǎo)觀察EnSCs的多向分化的潛能,為EnSCs在子宮內(nèi)膜損傷、盆腔臟器脫垂、陰道重建等組織修復(fù)應(yīng)用和子宮內(nèi)膜異位癥、子宮內(nèi)膜息肉、子宮內(nèi)膜癌等子宮內(nèi)膜相關(guān)疾病提供可行的細(xì)胞模型。目的：1、研究人蛻膜組織中子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離及體外培養(yǎng)方法,并對(duì)所分離的子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究。2、研究人蛻膜組織中子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的生物學(xué)特性,通過(guò)體外誘導(dǎo)的方法研究人蛻膜組織子宮內(nèi)膜干細(xì)胞向成骨細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的分化能力。方法：1、取行人工流產(chǎn)患者的蛻膜組織,用胰酶和膠原酶消化蛻膜組織,分離子宮內(nèi)膜細(xì)胞,計(jì)數(shù)后,以極低密度接種于10 cm培養(yǎng)皿,分離單克隆貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,倒置顯微鏡觀察子宮內(nèi)膜干細(xì)胞形態(tài)變化及克隆形成情況。2、采用CCK-8法繪制子宮內(nèi)膜干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,并計(jì)算倍增時(shí)間。3、流式細(xì)胞儀分析子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的細(xì)胞周期及細(xì)胞表面抗原CD29、CD31、CD34、 CD44、CD45、CD73、CD90、CD105、 CD146表達(dá)情況。4、通過(guò)成骨誘導(dǎo)液和平滑肌誘導(dǎo)液研究子宮內(nèi)膜干細(xì)胞向成骨細(xì)胞和平滑肌分化的潛能。5、通過(guò)堿性磷酸酶染色、茜素紅染色對(duì)子宮內(nèi)膜干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的成骨細(xì)胞進(jìn)行鑒定；免疫熒光和蛋白印跡對(duì)子宮內(nèi)膜干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的平滑肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果：1、子宮內(nèi)膜干細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形,成纖維細(xì)胞樣,可見(jiàn)粗細(xì)不等的胞質(zhì)突起,增殖至80-90%呈漩渦狀生長(zhǎng),其克隆形成率分別為3.91%和9.14%；2、EnSCs生長(zhǎng)曲線呈“S”型,接種48h至60 h后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,于第9天達(dá)到平臺(tái)期,倍增時(shí)間為37-52 h。3、流式細(xì)胞儀測(cè)定EnSCs細(xì)胞表面抗原CD29(99.13%),CD44(97.39%),CD73 (99.68%),CD90(96.76%),CD105(89.64%),CD146(77.96%)呈陽(yáng)性表達(dá),而CD31(1.30%),CD34(0.68%),CD45(1.26%)呈陰性表達(dá),4、流式細(xì)胞儀分析子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的細(xì)胞周期提示,有61.79%的細(xì)胞處于Go/G1期,22.37%的細(xì)胞處于S+G2/M期。5、通過(guò)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基及平滑肌誘導(dǎo)培養(yǎng)基可以成功將子宮內(nèi)膜干細(xì)胞向成骨細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化。結(jié)論：采用組織消化法分離單克隆貼壁生長(zhǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞,能夠獲得純化的子宮內(nèi)膜干細(xì)胞,并能在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基及平滑肌誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下,成功向成骨細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜干細(xì)胞 細(xì)胞表面標(biāo)記抗原 分離 誘導(dǎo)分化 鑒定
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R711.74
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-11
• 第一章 文獻(xiàn)研究11-17
• 1.1 子宮內(nèi)膜干細(xì)胞及其相關(guān)疾病11
• 1.2 子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的來(lái)源11-12
• 1.3 子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的生物學(xué)特性12-13
• 1.4 子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的應(yīng)用13-14
• 1.5 子宮內(nèi)膜干細(xì)胞在子宮內(nèi)膜修復(fù)中的作用14-15
• 1.6 本論文研究目的及意義15-17
• 第二章 子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定17-35
• 一、子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離及培養(yǎng)17-20
• 1 材料17
• 2 實(shí)驗(yàn)方法17-18
• 3 結(jié)果18-20
• 二、流式細(xì)胞儀測(cè)定子宮內(nèi)膜干細(xì)胞表面分子標(biāo)志物20-24
• 1 流式細(xì)胞儀測(cè)定子宮內(nèi)膜干細(xì)胞表面標(biāo)記物20
• 2 材料20-21
• 3 實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 三、子宮內(nèi)膜干細(xì)胞細(xì)胞克隆增值能力檢測(cè)24-27
• 1 材料24
• 2 實(shí)驗(yàn)方法24
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-27
• 四、子宮內(nèi)膜干細(xì)胞細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及倍增時(shí)間測(cè)定27-29
• 1 材料27
• 2 實(shí)驗(yàn)方法27
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
• 五、流式細(xì)胞儀測(cè)定子宮內(nèi)膜干細(xì)胞細(xì)胞周期29-31
• 1 材料29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-31
• 六、子宮內(nèi)膜干細(xì)胞細(xì)胞組織來(lái)源鑒定31-33
• 1 材料31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-33
• 七、討論33-34
• 八、小結(jié)34-35
• 第三章 子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分化潛能研究35-45
• 一、子宮內(nèi)膜干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化及鑒定35-39
• 1 材料35
• 2 實(shí)驗(yàn)方法35-37
• 3 結(jié)果37-39
• 二、子宮內(nèi)膜干細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化及鑒定39-43
• 1 材料39-40
• 2 實(shí)驗(yàn)方法40-42
• 3 結(jié)果42-43
• 三、討論43-44
• 四、小結(jié)44-45
• 結(jié)語(yǔ)45-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 附錄55-57
• 在校期間發(fā)表論文情況57-58
• 致謝58-59
• 綜述59-66
• 參考文獻(xiàn)63-66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Dennis XIANG;Julie ALLICKSON;Charlie XIANG;;Mini-review:Plasticity of human menstrual blood stem cells derived from the endometrium[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年05期

，

本文編號(hào)：1048964