本文關(guān)鍵詞：重度子癇前期胎盤外泌體影響滋養(yǎng)細胞及內(nèi)皮細胞功能的初步研究

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【摘要】：[研究目的]子癇前期(Pre-eclampsia,PE)是妊娠期特有的并發(fā)癥。表現(xiàn)在妊娠20周以后出現(xiàn)高血壓、蛋白尿及全身多器官功能損害。胎盤子宮螺旋小動脈重塑不足是PE的重要病理改變,此與絨毛外滋養(yǎng)細胞功能有密切關(guān)系；而全身血管痙攣造成的高血壓則與血管內(nèi)皮損傷及功能紊亂相關(guān)。近年,Redman提出PE發(fā)病的兩階段理論,即第一階段在子宮胎盤局部,第二階段全身癥狀出現(xiàn)。研究PE子宮胎盤局部變化引起全身血管病生理變化的過程成為熱點。外泌體是穩(wěn)定存在于細胞外的一種微型囊泡,可將mRNA、 mRNA、蛋白質(zhì)等生物活性分子包裹在內(nèi),運送到靶細胞從而影響靶細胞生物學功能。近來研究發(fā)現(xiàn),胎盤可分泌外泌體到母體循環(huán),調(diào)控母體全身器官的功能改變,以適應(yīng)妊娠的需求,如若這一過程發(fā)生異常,則會導致妊娠疾病的發(fā)生。本研究通過分離PE患者和正常孕婦血清中胎盤外泌體,檢測其對HTR-8/SVneo絨毛外滋養(yǎng)細胞炎癥通路激活、增殖功能,以及對人原代臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡、血管舒縮相關(guān)因子eNOS表達的影響,探討胎盤分泌的外泌體在PE發(fā)病中的作用。[研究方法]取儲存于-80℃的重度PE病人血清及同期正常孕婦血清各15例,每份樣品取200m,通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合兩次PEG6000沉淀分離胎盤外泌體,PBS重懸浮,BCA試劑盒對外泌體進行蛋白定量,Western blot分析各層CD63、CD81等外泌體標志分子及胎盤外泌體特有標記蛋白分子PLAP的表達情況,同時表達CD63、CD81、PLAP的密度層即可認為是胎盤外泌體所在密度層。PKH67染色胎盤外泌體后分別與HTR-8/SVneo細胞和HUVEC細胞共孵育6h,熒光顯微鏡觀察HTR-8/SVneo細胞和HUVEC細胞對外泌體的攝入情況。采用CCK-8試劑檢測重度PE患者血清及同期正常孕婦血清分離的胎盤外泌體對HTR-8/SVneo細胞增殖的影響,通過Western blot和qPCR檢測PE胎盤外泌體對HTR-8/SVneo細胞NF-κB p65炎癥信號通路關(guān)鍵分子(P-P65、MyD88、IL-6)表達的影響。利用Cell Death Detection ELISAPLUS試劑檢測PE胎盤外泌體對HUVEC細胞凋亡情況。運用Western blot方法檢測PE胎盤外泌體對HUVEC細胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶eNOS表達的影響。[研究結(jié)果]1.蔗糖密度梯度離心后,Western blot發(fā)現(xiàn)CD63、CD81、PLAP同時表達于21%-34%密度層,證明血清胎盤外泌體主要存在于1.08～1.11g/mL。2.CCK-8檢測HTR-8/SVneo細胞增殖情況,結(jié)果顯示,與正常對照組相比,重度PE病人血清胎盤外泌體明顯抑制HTR-8/SVneo絨毛外滋養(yǎng)細胞增殖(OD450nm值分別為1.09-±0.21和0.86±0.21,P0.05)。Western blot結(jié)果顯示重度PE病人血清胎盤外泌體抑制了HTR-8/SVneo絨毛外滋養(yǎng)細胞增殖相關(guān)分子CCND1的表達,且促進了NF-κB p65炎癥信號通路相關(guān)分子(P-P65、MyD88)表達,并提高了IL-6 mRNA水平。3. Cell Death Detection ELISAPLUS檢測結(jié)果表明重度PE病人血清胎盤外泌體促進了HUVEC細胞凋亡(與正常組的相對值分別為1.00±0.04,1.15±0.13, P=0.026); Western blot檢測結(jié)果顯示PE病人血清胎盤外泌體顯著抑制eNOS表達。[結(jié)論]妊娠婦女血清中存在胎盤分泌的外泌體,而PE病人血清中胎盤外泌體明顯抑制HTR-8/SVneo滋養(yǎng)細胞增殖,激活NF-κB p65炎癥信號通路,引起妊娠過程中滋養(yǎng)細胞增殖不足；同時促進HUVEC細胞凋亡,抑制其表達eNOS,這可能抑制血管內(nèi)皮舒張功能,與PE高血壓發(fā)生有關(guān),因此,PE血清中異常存在的胎盤外泌體是炎癥信號持續(xù)過度激活,PE全身癥狀出現(xiàn)并不斷加重的重要病理介質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：外泌體 滋養(yǎng)細胞 血管內(nèi)皮細胞 子癇前期
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.244
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• English Abstract6-10
• 英文縮略詞表10-12
• 前言12-14
• 文獻綜述14-19
• 第一章 胎盤外泌體的分離與鑒定19-28
• 1.1 前言19-20
• 1.2 研究材料20-21
• 1.3 研究方法21-24
• 1.4 實驗結(jié)果24-26
• 1.5 實驗討論26-27
• 1.6 小結(jié)27-28
• 第二章 PE胎盤外泌體對滋養(yǎng)細胞及血管內(nèi)皮細胞功能的影響28-42
• 2.1 前言28-29
• 2.2 研究材料29-30
• 2.3 研究方法30-34
• 2.4 實驗結(jié)果34-38
• 2.5 實驗討論38-41
• 2.6 小結(jié)41-42
• 第三章 PE胎盤外泌體miR-155抑制eNOS表達42-52
• 3.1 前言42-43
• 3.2 研究材料43
• 3.3 研究方法43-47
• 3.4 實驗結(jié)果47-50
• 3.5 實驗討論50-51
• 3.6 小結(jié)51-52
• 結(jié)論52-53
• 主要成果與展望53-54
• 致謝54-55
• 參考文獻55-62
• 作者簡介62-64
• 附錄：基金資助64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蔣榮珍;穆衛(wèi)紅;黃亞絹;顧京紅;李明;陳漢平;;子癇前期血清對血管內(nèi)皮細胞凋亡及細胞因子表達的影響[J];上海交通大學學報(醫(yī)學版);2006年12期

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本文編號：1047607