本文關鍵詞：孕鼠脂多糖暴露致子代腎臟組織DNA甲基轉移酶表達變化的初步研究

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【摘要】：背景和目的:健康與疾病起源(Developmental Origins of Health and Disease,DOHaD)學說在過去20年得到了極大的發(fā)展。大量流行病學調查及動物實驗研究發(fā)現(xiàn)生命早期不良刺激,尤其是在宮內的不良刺激會引起子代成年后容易出現(xiàn)高血壓、肥胖、胰島素抵抗、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病、哮喘、慢性腎病、甚至腫瘤等成人慢性疾病。中國心血管病報告(2013)顯示心血管病死亡占城鄉(xiāng)居民死亡原因的首位,高血壓是心血管疾病的最主要危險因素之一,高血壓在人群中發(fā)病率高,但是目前高血壓的發(fā)病機制還不是很清楚。目前,很多動物實驗研究發(fā)現(xiàn)孕期不良刺激會引起子代表觀遺傳修飾模式發(fā)生變化,并引起子代產生印記效應,并發(fā)生終生性的變化。因此,我們從表觀遺傳學角度探討孕期不良刺激引起高血壓疾病的發(fā)生機制,試圖為成年慢性疾病的預防及治療提供新的思路。在孕期以脂多糖為炎癥刺激刺激因子進行刺激發(fā)現(xiàn)孕鼠胎盤、羊水中的一些細胞因子(如IL-6、TNF-α)水平升高。最近研究還發(fā)現(xiàn)高水平的IL-6可以通過JAK2通路,上調轉錄因子Fli-1水平,并增加DNMT1(DNA甲基轉移酶1)的水平;此外,TNF-α也可以使核轉錄因子NF-κB的表達上調,刺激DNMT3B(DNA甲基轉移酶3B)表達增高導致組蛋白甲基化沉默Notch-1基因。這些研究提示炎癥因子可以引起DNMT的表達水平發(fā)生變化�；谇捌趯嶒灢⒔Y合最新研究進展,我們提出以下假設:孕期炎癥刺激可能通過升高子代炎癥因子表達影響DNA甲基轉移酶水平改變導致目的DNA表觀遺傳修飾模式改變,造成了關鍵基因時空特異性表達異常,從而導致慢性成年高血壓病的發(fā)生。本實驗在已建立的動物模型基礎上,進一步檢測大鼠腎臟組織中的炎癥因子和甲基化轉移酶的水平,探討DNA甲基化是否參與高血壓的發(fā)生機制。材料和方法:1.實驗動物及處理16只通過陰道栓檢查的獲得準確妊娠時間的SD大鼠,隨機分為4組,每組4只。對照組:在sd大鼠孕期第8-14天每天予以腹腔注射無菌生理鹽水0.5ml;pdtc組:sd孕鼠在孕期第8-14天每天腹腔注射nf-κb抑制劑pdtc(100mg/kg);lps組:在孕鼠孕期的第8、10、12天分別予以腹腔注射0.79mg/kg脂多糖(lps),在孕期的第9、11、13、14天注射0.5ml生理鹽水;lps+pdtc組:在孕鼠孕期的第8、10、12天分別予以腹腔注射0.79mg/kg脂多糖(lps)和pdtc,在孕期的第9、11、13、14天腹腔注射劑量為100mg/kg的pdtc。2.子代大鼠體重及血壓的測量子代大鼠出生后,4周斷奶分籠,從4周齡到12周齡每2周測量一次體重,每只稱3次,取平均值。從6周到12周每2周進行一次大鼠尾動脈無創(chuàng)血壓測量,每只測量3次,間隔3分鐘以上,取平均值。3.子代大鼠腎臟組織中il-6、tnf-α、fli-1、dnmts的mrna水平的測定采用real-timepcr方法檢測子代大鼠腎臟組織的il-6、tnf-α、fli-1、dnmts的mrna表達水平。4.子代大鼠腎臟組織中fli-1、dnmts蛋白質水平測定用westernblot方法檢測子代大鼠腎臟組織的il-6、fli-1、dnmts蛋白質水平。結果:1.在子代大鼠周齡4-12周時,每2周檢測一次體重,子代大鼠lps組體重高于對照組,在12周齡時lps組明顯高于對照組(p0.01),且lps+pdtc組與對照組無明顯差異(p0.05)。2.lps組的子代大鼠血壓明顯高于對照組(p0.01),而用pdtc進行干預后與對照組無明顯差異(p0.05),說明pdtc可以逆轉lps對血壓的作用。3.孕期暴露于lps的子代大鼠腎臟組織中il-6、fli-1、dnmt1、dnmt3b的mrna的表達在實驗組較對照組顯著升高(p0.05),pdtc干預后可以逆轉il-6、fli-1、dnmt1、dnmt3b的變化。4.腎臟組織中的tnf-α水平6周齡時實驗組比對照組水平增高,但是差異不顯著,而在12周齡時,lps組子代大鼠腎臟組織中tnf-α的水平顯著高于對照組。5.腎臟組織中dnmt3a的表達在實驗組和對照組中差異不顯著。結論:1.孕鼠用脂多糖處理后,出現(xiàn)子代大鼠血壓增高、體重增加,成功復制了炎癥刺激子代大鼠高血壓的模型;2.用脂多糖對孕鼠進行刺激可以引起子代大鼠腎臟組織DNMT1、DNMT3B表達增高,PDTC進行干預可以逆轉DNMT1、DNMT3B的表達水平,提示了DNA甲基化可能參與了孕期炎癥刺激引起子代成年高血壓的發(fā)生機制;3.用LPS刺激孕鼠后會引起子代大鼠腎臟組織IL-6、Fli-1的表達增高,提示孕期炎癥刺激可能通過改變子代體內炎癥因子IL-6水平,上調Fli-1的表達,導致DNMT1水平升高。
【關鍵詞】：孕期刺激 炎癥 甲基化 高血壓
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.2
【目錄】：

• 英文縮寫一覽表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 1 前言及研究背景11-14
• 2 材料和方法14-26
• 3 結果26-40
• 4 討論40-43
• 全文小結43-44
• 參考文獻44-47
• 文獻綜述 孕期刺激對子代發(fā)育影響的研究進展47-57
• 參考文獻51-57
• 碩士在讀期間發(fā)表的論文57-58
• 致謝58

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1 佟紅艷,林茂芳;DNA甲基轉移酶在骨髓增生異常綜合征與白血病細胞中的表達[J];中華血液學雜志;2003年06期

2 吳慶;周志俊;大迫誠一郎;;環(huán)境污染物對著床前小鼠胚胎的DNA甲基轉移酶活性的影響[J];衛(wèi)生研究;2006年01期

3 李旭;林方才;周紅;鄭建紅;劉麗娟;李秋陽;;DNA甲基轉移酶 凋亡抑制蛋白在肺癌組織中的表達及意義[J];山西醫(yī)藥雜志;2011年10期

4 王亮,吳e，

本文編號：1032177