本文關(guān)鍵詞：孕鼠脂多糖暴露致子代腎臟組織DNA甲基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)變化的初步研究

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【摘要】：背景和目的:健康與疾病起源(Developmental Origins of Health and Disease,DOHaD)學(xué)說(shuō)在過(guò)去20年得到了極大的發(fā)展。大量流行病學(xué)調(diào)查及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)生命早期不良刺激,尤其是在宮內(nèi)的不良刺激會(huì)引起子代成年后容易出現(xiàn)高血壓、肥胖、胰島素抵抗、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病、哮喘、慢性腎病、甚至腫瘤等成人慢性疾病。中國(guó)心血管病報(bào)告(2013)顯示心血管病死亡占城鄉(xiāng)居民死亡原因的首位,高血壓是心血管疾病的最主要危險(xiǎn)因素之一,高血壓在人群中發(fā)病率高,但是目前高血壓的發(fā)病機(jī)制還不是很清楚。目前,很多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)孕期不良刺激會(huì)引起子代表觀遺傳修飾模式發(fā)生變化,并引起子代產(chǎn)生印記效應(yīng),并發(fā)生終生性的變化。因此,我們從表觀遺傳學(xué)角度探討孕期不良刺激引起高血壓疾病的發(fā)生機(jī)制,試圖為成年慢性疾病的預(yù)防及治療提供新的思路。在孕期以脂多糖為炎癥刺激刺激因子進(jìn)行刺激發(fā)現(xiàn)孕鼠胎盤(pán)、羊水中的一些細(xì)胞因子(如IL-6、TNF-α)水平升高。最近研究還發(fā)現(xiàn)高水平的IL-6可以通過(guò)JAK2通路,上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Fli-1水平,并增加DNMT1(DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1)的水平;此外,TNF-α也可以使核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達(dá)上調(diào),刺激DNMT3B(DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B)表達(dá)增高導(dǎo)致組蛋白甲基化沉默Notch-1基因。這些研究提示炎癥因子可以引起DNMT的表達(dá)水平發(fā)生變化。基于前期實(shí)驗(yàn)并結(jié)合最新研究進(jìn)展,我們提出以下假設(shè):孕期炎癥刺激可能通過(guò)升高子代炎癥因子表達(dá)影響DNA甲基轉(zhuǎn)移酶水平改變導(dǎo)致目的DNA表觀遺傳修飾模式改變,造成了關(guān)鍵基因時(shí)空特異性表達(dá)異常,從而導(dǎo)致慢性成年高血壓病的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)在已建立的動(dòng)物模型基礎(chǔ)上,進(jìn)一步檢測(cè)大鼠腎臟組織中的炎癥因子和甲基化轉(zhuǎn)移酶的水平,探討DNA甲基化是否參與高血壓的發(fā)生機(jī)制。材料和方法:1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及處理16只通過(guò)陰道栓檢查的獲得準(zhǔn)確妊娠時(shí)間的SD大鼠,隨機(jī)分為4組,每組4只。對(duì)照組:在sd大鼠孕期第8-14天每天予以腹腔注射無(wú)菌生理鹽水0.5ml;pdtc組:sd孕鼠在孕期第8-14天每天腹腔注射nf-κb抑制劑pdtc(100mg/kg);lps組:在孕鼠孕期的第8、10、12天分別予以腹腔注射0.79mg/kg脂多糖(lps),在孕期的第9、11、13、14天注射0.5ml生理鹽水;lps+pdtc組:在孕鼠孕期的第8、10、12天分別予以腹腔注射0.79mg/kg脂多糖(lps)和pdtc,在孕期的第9、11、13、14天腹腔注射劑量為100mg/kg的pdtc。2.子代大鼠體重及血壓的測(cè)量子代大鼠出生后,4周斷奶分籠,從4周齡到12周齡每2周測(cè)量一次體重,每只稱3次,取平均值。從6周到12周每2周進(jìn)行一次大鼠尾動(dòng)脈無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量,每只測(cè)量3次,間隔3分鐘以上,取平均值。3.子代大鼠腎臟組織中il-6、tnf-α、fli-1、dnmts的mrna水平的測(cè)定采用real-timepcr方法檢測(cè)子代大鼠腎臟組織的il-6、tnf-α、fli-1、dnmts的mrna表達(dá)水平。4.子代大鼠腎臟組織中fli-1、dnmts蛋白質(zhì)水平測(cè)定用westernblot方法檢測(cè)子代大鼠腎臟組織的il-6、fli-1、dnmts蛋白質(zhì)水平。結(jié)果:1.在子代大鼠周齡4-12周時(shí),每2周檢測(cè)一次體重,子代大鼠lps組體重高于對(duì)照組,在12周齡時(shí)lps組明顯高于對(duì)照組(p0.01),且lps+pdtc組與對(duì)照組無(wú)明顯差異(p0.05)。2.lps組的子代大鼠血壓明顯高于對(duì)照組(p0.01),而用pdtc進(jìn)行干預(yù)后與對(duì)照組無(wú)明顯差異(p0.05),說(shuō)明pdtc可以逆轉(zhuǎn)lps對(duì)血壓的作用。3.孕期暴露于lps的子代大鼠腎臟組織中il-6、fli-1、dnmt1、dnmt3b的mrna的表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組顯著升高(p0.05),pdtc干預(yù)后可以逆轉(zhuǎn)il-6、fli-1、dnmt1、dnmt3b的變化。4.腎臟組織中的tnf-α水平6周齡時(shí)實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組水平增高,但是差異不顯著,而在12周齡時(shí),lps組子代大鼠腎臟組織中tnf-α的水平顯著高于對(duì)照組。5.腎臟組織中dnmt3a的表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中差異不顯著。結(jié)論:1.孕鼠用脂多糖處理后,出現(xiàn)子代大鼠血壓增高、體重增加,成功復(fù)制了炎癥刺激子代大鼠高血壓的模型;2.用脂多糖對(duì)孕鼠進(jìn)行刺激可以引起子代大鼠腎臟組織DNMT1、DNMT3B表達(dá)增高,PDTC進(jìn)行干預(yù)可以逆轉(zhuǎn)DNMT1、DNMT3B的表達(dá)水平,提示了DNA甲基化可能參與了孕期炎癥刺激引起子代成年高血壓的發(fā)生機(jī)制;3.用LPS刺激孕鼠后會(huì)引起子代大鼠腎臟組織IL-6、Fli-1的表達(dá)增高,提示孕期炎癥刺激可能通過(guò)改變子代體內(nèi)炎癥因子IL-6水平,上調(diào)Fli-1的表達(dá),導(dǎo)致DNMT1水平升高。
【關(guān)鍵詞】：孕期刺激 炎癥 甲基化 高血壓
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.2
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)一覽表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 1 前言及研究背景11-14
• 2 材料和方法14-26
• 3 結(jié)果26-40
• 4 討論40-43
• 全文小結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 文獻(xiàn)綜述 孕期刺激對(duì)子代發(fā)育影響的研究進(jìn)展47-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 碩士在讀期間發(fā)表的論文57-58
• 致謝58

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 佟紅艷,林茂芳;DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在骨髓增生異常綜合征與白血病細(xì)胞中的表達(dá)[J];中華血液學(xué)雜志;2003年06期

2 吳慶;周志俊;大迫誠(chéng)一郎;;環(huán)境污染物對(duì)著床前小鼠胚胎的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的影響[J];衛(wèi)生研究;2006年01期

3 李旭;林方才;周紅;鄭建紅;劉麗娟;李秋陽(yáng);;DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 凋亡抑制蛋白在肺癌組織中的表達(dá)及意義[J];山西醫(yī)藥雜志;2011年10期

4 王亮,吳e，

本文編號(hào)：1032177