本文關(guān)鍵詞：孕婦血清PAPP-A活性氧傳遞均相發(fā)光免疫測定法的初步建立和臨床評(píng)價(jià)

  更多相關(guān)文章： 妊娠相關(guān)蛋白A 均相免疫分析 活性氧傳遞均相發(fā)光 供體微球 受體微球

【摘要】：目的:本研究以活性氧傳遞均相發(fā)光免疫分析(LOCI)技術(shù)的AlphaScreen平臺(tái)為基礎(chǔ),研發(fā)孕婦血清妊娠相關(guān)蛋白A(PAPP-A)的均相免疫檢測體系,然后對(duì)此體系做方法學(xué)和臨床評(píng)價(jià)。方法:本研究的檢測體系包括受體微球(PAPP-A多克隆抗體標(biāo)記)、生物素(PAPP-A單克隆抗體標(biāo)記)、待測PAPP-A和供體微球,受體微球和生物素化抗體的最適濃度用棋盤滴定的方法加以確定,并進(jìn)行試劑加樣量、反應(yīng)時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化。在此基礎(chǔ)上,得出擬合方程的標(biāo)準(zhǔn)曲線,用光激化學(xué)發(fā)光分析儀檢測待測臨床標(biāo)本,所得光信號(hào)值帶入擬合方程計(jì)算出PAPP-A濃度,然后對(duì)此檢測體系進(jìn)行方法學(xué)和臨床評(píng)價(jià)。采用ELISACalc軟件進(jìn)行劑量-反應(yīng)曲線數(shù)學(xué)模型及相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:本研究建立了孕婦血清PAPP-A活性氧傳遞均相發(fā)光免疫檢測體系,并對(duì)其進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化,并對(duì)該檢測體系進(jìn)行了方法學(xué)和臨床評(píng)價(jià),靈敏度達(dá)到了2.84mU/L;批內(nèi)和批間精密度分別達(dá)到5.91%-7.94%和6.14%-9.69%;回收率在96.7%-100.3%,也符合臨床檢測的需求;特異性檢測中,對(duì)血紅蛋白的干擾率為8.37%(低值)和6.98%(高值),對(duì)總膽紅素的干擾率為6.57%(低值)和9.23%(高值),對(duì)甘油三酯的干擾率為7.97%(低值)和9.38%(高值),說明該檢測體系有著較強(qiáng)抗溶血、脂血和黃疸的能力;我們還對(duì)該檢測體系是否發(fā)生Hook效應(yīng)進(jìn)行了考察,在PAPP-A含量達(dá)到8000mU/L時(shí),未見Hook效應(yīng)發(fā)生,線性范圍為2.8mU/L-8000mU/L;在與時(shí)間分辨熒光分析法的相關(guān)性分析中,相關(guān)性達(dá)到了98.9%。結(jié)論:本檢測體系檢測性能良好,靈敏度、準(zhǔn)確性、重復(fù)性、抗干擾能力等均較好,可用于定量檢測孕婦血清PAPP-A,而且與時(shí)間分辨熒光分析法比較,步驟簡潔、時(shí)間大大縮短、成本較低,進(jìn)一步研發(fā)有望推廣臨床應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：妊娠相關(guān)蛋白A 均相免疫分析 活性氧傳遞均相發(fā)光 供體微球 受體微球
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R446.6;R714.5
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-11
• 前言11-18
• 研究現(xiàn)狀、成果11-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、孕婦血清PAPP-A活性氧傳遞均相發(fā)光檢測體系的建立及條件優(yōu)化18-33
• 1 材料和方法18-21
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)器材18
• 1.1.2 重要試劑18-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 1.2.1 抗體篩選19
• 1.2.2 抗體包被受體微球19-20
• 1.2.3 抗體生物素化20
• 1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)品和臨床標(biāo)本20
• 1.2.5 最佳抗體對(duì)的確定20
• 1.2.6 反應(yīng)條件的優(yōu)化20-21
• 1.2.7 檢測體系的建立21
• 2 結(jié)果21-32
• 2.1 抗體組合篩選21-23
• 2.2 生物素化抗體及抗體包被受體微球的最適反應(yīng)濃度23
• 2.3 檢測緩沖體系的優(yōu)化23-25
• 2.4 供體微球的加樣量25-26
• 2.5 待測物與抗體包被受體微球加樣體積的優(yōu)化26-28
• 2.6 加樣順序的優(yōu)化28
• 2.7 反應(yīng)時(shí)間的優(yōu)化28-31
• 2.8 檢測體系的確定31-32
• 3 小結(jié)32-33
• 二、孕婦血清PAPP-A活性氧傳遞均相發(fā)光免疫檢測體系的方法學(xué)及臨床評(píng)價(jià)33-42
• 1.材料與方法33-37
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器33
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑33
• 1.1.3 臨床標(biāo)本、質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品33-34
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法34-37
• 1.2.1 測定方法34
• 1.2.2 方法學(xué)評(píng)價(jià)34-36
• 1.2.3 臨床評(píng)價(jià)36-37
• 2.結(jié)果37-42
• 2.1 方法學(xué)評(píng)價(jià)37-40
• 2.1.1 靈敏度37
• 2.1.2 準(zhǔn)確性37
• 2.1.3 精密度37-38
• 2.1.4 特異性38
• 2.1.5 穩(wěn)定性38-39
• 2.1.6 Z因子39
• 2.1.7 相關(guān)性分析39
• 2.1.8 孕早期孕婦PAPP-A參考值39-40
• 2.1.9 Hook效應(yīng)40
• 2.2 臨床評(píng)價(jià)40-42
• 2.2.1 卡方檢驗(yàn)40
• 2.2.2 一致性分析40-42
• 三、討論42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 附錄52-60
• 綜述 妊娠相關(guān)蛋白A的臨床應(yīng)用及檢測進(jìn)展60-74
• 綜述參考文獻(xiàn)70-74
• 致謝74

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1018302