發(fā)布時間：2017-10-12 10:51

  本文關鍵詞：孕婦血清PAPP-A活性氧傳遞均相發(fā)光免疫測定法的初步建立和臨床評價

  更多相關文章： 妊娠相關蛋白A 均相免疫分析 活性氧傳遞均相發(fā)光 供體微球 受體微球

【摘要】：目的:本研究以活性氧傳遞均相發(fā)光免疫分析(LOCI)技術的AlphaScreen平臺為基礎,研發(fā)孕婦血清妊娠相關蛋白A(PAPP-A)的均相免疫檢測體系,然后對此體系做方法學和臨床評價。方法:本研究的檢測體系包括受體微球(PAPP-A多克隆抗體標記)、生物素(PAPP-A單克隆抗體標記)、待測PAPP-A和供體微球,受體微球和生物素化抗體的最適濃度用棋盤滴定的方法加以確定,并進行試劑加樣量、反應時間等實驗條件的優(yōu)化。在此基礎上,得出擬合方程的標準曲線,用光激化學發(fā)光分析儀檢測待測臨床標本,所得光信號值帶入擬合方程計算出PAPP-A濃度,然后對此檢測體系進行方法學和臨床評價。采用ELISACalc軟件進行劑量-反應曲線數(shù)學模型及相關統(tǒng)計學分析。結果:本研究建立了孕婦血清PAPP-A活性氧傳遞均相發(fā)光免疫檢測體系,并對其進行了實驗條件的優(yōu)化,并對該檢測體系進行了方法學和臨床評價,靈敏度達到了2.84mU/L;批內和批間精密度分別達到5.91%-7.94%和6.14%-9.69%;回收率在96.7%-100.3%,也符合臨床檢測的需求;特異性檢測中,對血紅蛋白的干擾率為8.37%(低值)和6.98%(高值),對總膽紅素的干擾率為6.57%(低值)和9.23%(高值),對甘油三酯的干擾率為7.97%(低值)和9.38%(高值),說明該檢測體系有著較強抗溶血、脂血和黃疸的能力;我們還對該檢測體系是否發(fā)生Hook效應進行了考察,在PAPP-A含量達到8000mU/L時,未見Hook效應發(fā)生,線性范圍為2.8mU/L-8000mU/L;在與時間分辨熒光分析法的相關性分析中,相關性達到了98.9%。結論:本檢測體系檢測性能良好,靈敏度、準確性、重復性、抗干擾能力等均較好,可用于定量檢測孕婦血清PAPP-A,而且與時間分辨熒光分析法比較,步驟簡潔、時間大大縮短、成本較低,進一步研發(fā)有望推廣臨床應用。
【關鍵詞】：妊娠相關蛋白A 均相免疫分析 活性氧傳遞均相發(fā)光 供體微球 受體微球
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R446.6;R714.5
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-18
• 研究現(xiàn)狀、成果11-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、孕婦血清PAPP-A活性氧傳遞均相發(fā)光檢測體系的建立及條件優(yōu)化18-33
• 1 材料和方法18-21
• 1.1 實驗材料18-19
• 1.1.1 實驗器材18
• 1.1.2 重要試劑18-19
• 1.2 實驗方法19-21
• 1.2.1 抗體篩選19
• 1.2.2 抗體包被受體微球19-20
• 1.2.3 抗體生物素化20
• 1.2.4 標準品和臨床標本20
• 1.2.5 最佳抗體對的確定20
• 1.2.6 反應條件的優(yōu)化20-21
• 1.2.7 檢測體系的建立21
• 2 結果21-32
• 2.1 抗體組合篩選21-23
• 2.2 生物素化抗體及抗體包被受體微球的最適反應濃度23
• 2.3 檢測緩沖體系的優(yōu)化23-25
• 2.4 供體微球的加樣量25-26
• 2.5 待測物與抗體包被受體微球加樣體積的優(yōu)化26-28
• 2.6 加樣順序的優(yōu)化28
• 2.7 反應時間的優(yōu)化28-31
• 2.8 檢測體系的確定31-32
• 3 小結32-33
• 二、孕婦血清PAPP-A活性氧傳遞均相發(fā)光免疫檢測體系的方法學及臨床評價33-42
• 1.材料與方法33-37
• 1.1 實驗材料33-34
• 1.1.1 實驗儀器33
• 1.1.2 實驗試劑33
• 1.1.3 臨床標本、質控品和標準品33-34
• 1.2 實驗方法34-37
• 1.2.1 測定方法34
• 1.2.2 方法學評價34-36
• 1.2.3 臨床評價36-37
• 2.結果37-42
• 2.1 方法學評價37-40
• 2.1.1 靈敏度37
• 2.1.2 準確性37
• 2.1.3 精密度37-38
• 2.1.4 特異性38
• 2.1.5 穩(wěn)定性38-39
• 2.1.6 Z因子39
• 2.1.7 相關性分析39
• 2.1.8 孕早期孕婦PAPP-A參考值39-40
• 2.1.9 Hook效應40
• 2.2 臨床評價40-42
• 2.2.1 卡方檢驗40
• 2.2.2 一致性分析40-42
• 三、討論42-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 附錄52-60
• 綜述 妊娠相關蛋白A的臨床應用及檢測進展60-74
• 綜述參考文獻70-74
• 致謝74

【參考文獻】

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本文編號：1018302