本文關鍵詞：rhEPO對NEC新生大鼠腸道Bcl-2及Caspase-3蛋白表達的影響

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【摘要】：目的：研究口服不同劑量重組人促紅細胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)對新生大鼠壞死性小腸結腸炎Bcl-2(B-cell lymphoma-2)、 caspase-3(cysteine protease-3)蛋白表達及腸道病理損傷的影響,探討rhEPO對新生兒壞死性小腸結腸炎(necrotizing enteroeolitis, NEC)的腸道保護作用機制,為應用rhEPO防治新生兒壞死性小腸結腸炎提供科學依據(jù)。 方法：從出生48h不同窩別的新生SD大鼠中隨機挑選60只,雌雄不限,體重5-10g,隨機分為五組,每組12只。正常對照組：出生48h后繼續(xù)與母鼠同籠,母鼠鼠乳喂養(yǎng),不做任何干預。NEC模型組：出生48h后與母鼠分離,采用鼠乳代乳品人工喂養(yǎng),并定時給予缺氧冷刺激,連續(xù)3天,建立NEC模型。其余三組是在建模的同時給予rhEPO進行干預,根據(jù)在鼠乳代乳品中加入的rhEPO的濃度的不同(O.lU/ml、1U/ml及10U/ml),分別將三組命名為干預1組、干預2組及干預3組。采用免疫組化(二步法)檢測大鼠腸道Bcl-2及活性caspase-3蛋白情況,采用圖像分析系統(tǒng)對免疫組化的圖像進行陽性表達積分光密度值(integral optical density, IOD)測量。SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果：1.臨床表現(xiàn)正常對照組新生大鼠每天進食正常,無腹脹,生長發(fā)育良好,活動良好；NEC模型組大鼠造模24小時后就相繼出現(xiàn)腹脹、活動減少、反應遲鈍,嚴重者出現(xiàn)皮膚蒼白、皮溫降低、呼吸節(jié)律改變,三組EPO干預組上述癥狀出現(xiàn)較晚且較輕。2.體重差值變化各組新生大鼠體重差值為(g)：正常對照組為(1.62±0.70),NEC模型組為(-0.49±0.25),干預1組為(-0.23±0.25),干預2組為(-0.274±0.16),干預3組為(-0.28±0.35)。NEC模型組與正常對照組比較,新生大鼠體重差值呈負增長,且差異有統(tǒng)計學意義(a’=0.005,P-0.005)；三組干預組分別與NEC模型組比較,新生大鼠體重差值負增長程度明顯減輕,差異均有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005)；三組干預組間兩兩比較,除干預1組與干預2組間新生大鼠體重差值差異無統(tǒng)計學意義外(a'=0.005,P0.005),干預3組與干預1組、干預2組相比較,新生大鼠體重差值負增長程度均明顯減輕,且差異有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P≤0.005)。3.新生大鼠存活率各組新生大鼠存活率為：正常對照組100%(12/12),NEC模型組83.3%(10/12),干預1組83.3%(10/12),干預2組91.7%(11/12),干預3組91.7%(11/12)。4.腸道組織病理學評分及NEC發(fā)病率各組新生大鼠腸道組織病理評分分別為：NEC模型組腸道組織病理學評分比正常對照組明顯增高,且差異有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005)；三組干預組與NEC模型組相比較,除干預1組與NEC模型組相比較差異無統(tǒng)計學意義外(a'=0.005,P10.005),干預2組、干預3組腸道組織病理學評分均低于NEC模型組,且差異均具有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005)。三組干預組間兩兩比較,腸道組織病理學評分差異均無統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005)。各組新生大鼠NEC發(fā)病率為：正常對照組0%,NEC模型組60%,干預1組30%,干預2組18.2%,干預3組9.1%。EPO給藥劑量與新生SD大鼠的NEC發(fā)病率之間存在負相關關系(rs=-I,P0.01)。5.腸道Bel-2表達及活性caspase-3蛋白積分光密度值NEC模型組與正常對照組相比較,腸道Bcl-2表達積分光密度值差異無統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005)；三組干預組腸道Bcl-2表達積分光密度值與NEC模型組比較均明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005)；三組干預組間兩兩比較,除干預1組與干預2組之間的差異無統(tǒng)計學意義外(a'=0.005,P0.005),干預3組腸道Bcl-2表達積分光密度值與干預1組及干預2組相比,均明顯增加,且有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.000)。NEC模型組腸道活性caspase-3蛋白積分光密度值比正常對照組明顯增加,且差異有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005);三組干預組分別與NEC模型組比較,新生大鼠腸道活性caspase-3蛋白積分光密度值均明顯降低,且差異均具有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005)；三組干預組間兩兩比較,干預3組腸道活性caspase-3蛋白積分光密度值明顯低于干預1組,且差異有統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005),但干預2組與干預1組、干預3組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(a'=0.005,P0.005)。6.新生大鼠腸道Bcl-2表達與rhEPO劑量的關系新生大鼠腸道Bcl-2表達與rhEPO劑量之間存在正相關關系(rs=0.887,P=0.000)。7.新生大鼠腸道活性caspase-3蛋白與rhEPO劑量的關系腸道活性caspase-3蛋白積分光密度值與rhEPO劑量之間存在負相關關系(rs=-0.872,P=0.000)。8.腸道活性caspase-3蛋白積分光密度值與腸道組織病理損傷的關系腸道活性caspase-3蛋白積分光密度值與腸道組織病理損傷呈正相關關系(rs=0.768,P=0.000)。 結論：1.人工喂養(yǎng)+缺氧+冷刺激可誘導新生SD大鼠腸道組織產(chǎn)生接近人類新生兒壞死性小腸結腸炎樣的病理改變。2.實驗表明腸道細胞凋亡參與了NEC的發(fā)病過程,并且腸道細胞的凋亡程度與NEC的嚴重程度呈正相關關系。3.口服rhEPO能減輕實驗組新生大鼠壞死性小腸結腸炎模型的臨床癥狀,使腸道活性caspase-3蛋白減少,Bcl-2表達上調(diào),抑制腸道細胞凋亡,減輕腸道病理損傷,降低NEC的發(fā)病率。4.本次實驗中,rhEPO10U/ml的預防效果最佳。
【關鍵詞】：重組人促紅細胞生成素 壞死性小腸結腸炎 細胞凋亡 Bcl-2caspase-3
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 英文~.略語表4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 引言13-16
• 材料和方法16-22
• 結果22-36
• 討論36-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-52
• 綜述52-68
• 參考文獻62-68
• 攻讀學位期間文章發(fā)表情況68-69
• 致謝69

【參考文獻】

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