本文關(guān)鍵詞：川崎病線粒體病變及其機(jī)制的初步實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：第一部分:白色念珠菌細(xì)胞壁水溶物誘導(dǎo)幼鼠川崎病模型的構(gòu)建目的:通過腹腔重復(fù)注射白色念珠菌細(xì)胞壁水溶物誘導(dǎo)幼鼠產(chǎn)生免疫性血管炎,驗(yàn)證其與川崎病血管病變的相似性,為進(jìn)一步進(jìn)行川崎病實(shí)驗(yàn)研究提供穩(wěn)定的動物模型。方法:60只4-6周齡的C57BL/6雄性幼鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組各30只。實(shí)驗(yàn)組和對照組分別每只每次腹腔注射0.1ml白色念珠菌細(xì)胞壁水溶物(candida albicans water-soulble polyasccharide fraction CAWS)和0.1ml生理鹽水,連續(xù)5天,于末次注射后第3d、17d、24d每組取10只小鼠分批采血、處死,留取心臟標(biāo)本行組織病理學(xué)檢查及對冠狀動脈、主動脈、腹主動脈行透射電鏡觀察;采用夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法,檢測末次注射后第3d、17d、24d小鼠血漿腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)水平。結(jié)果:1.組織病理學(xué)改變:實(shí)驗(yàn)組小鼠免疫性血管炎發(fā)生率為100%,對照組小鼠為0%。(1)HE染色:實(shí)驗(yàn)組幼鼠末次注射后第3天(急性期):實(shí)驗(yàn)組所有幼鼠主動脈根部、部分冠狀動脈出現(xiàn)以淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞為主伴有少量中性粒細(xì)胞浸潤,內(nèi)皮細(xì)胞變性,內(nèi)皮不連續(xù),不同程度的心肌炎、心內(nèi)膜炎、心外膜炎;第24天(恢復(fù)期):冠狀動脈擴(kuò)張;并有淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤和成纖維細(xì)胞增生。(2)透射電鏡結(jié)果;實(shí)驗(yàn)組幼鼠末次注射后第3天(急性期):實(shí)驗(yàn)組幼鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞廣泛空泡變性、壞死、脫落,基底膜疏松,線粒體嚴(yán)重腫脹,空泡樣變,基質(zhì)松散,內(nèi)部結(jié)構(gòu)消失;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大。2.免疫學(xué)指標(biāo)檢測:實(shí)驗(yàn)組幼鼠末次注射后第3天(急性期),實(shí)驗(yàn)組血漿TNF-α、IL-6含量與對照組比較顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);第24天(恢復(fù)期):實(shí)驗(yàn)組血漿TNF-α、IL-6含量與急性期比較明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:白色念珠菌細(xì)胞壁水溶物能夠誘導(dǎo)C57BL/6幼鼠產(chǎn)生免疫性血管炎,類似于人體川崎病免疫性血管炎改變,且模型建立較為便利、可重復(fù)性強(qiáng),可作為川崎病研究的穩(wěn)定動物模型。第二部分:川崎病線粒體病變與NFAT表達(dá)的初步實(shí)驗(yàn)研究目的:本研究擬在幼鼠川崎病模型上,觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體在炎癥不同時期的病理改變,并同步觀察活化T細(xì)胞核因子(Nuclear factor of activated T Cell,NFAT)表達(dá)水平的變化,初步探討線粒體病理改變與NFAT間的相關(guān)性。方法:36只4-6周齡的C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組各18只。實(shí)驗(yàn)組和對照組分別每只每次腹腔注射0.1ml白色念珠菌細(xì)胞壁水溶物(CAWS)和0.1ml生理鹽水,連續(xù)5天,于末次注射后第3d、17d、24d每組取6只小鼠分批采血、處死,留取心臟標(biāo)本,對冠狀動脈、主動脈、腹主動脈行透射電鏡觀察;采用Real-time PCR法檢測CAWS注射后第3d、17d、24d小鼠外周血單個核細(xì)胞中NFAT1 m RNA、NFAT2m RNA表達(dá)水平;結(jié)果:1.透射電鏡結(jié)果;實(shí)驗(yàn)組幼鼠冠狀動脈、主動脈、腹主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體在急性期(3d)出現(xiàn)嚴(yán)重腫脹,空泡樣變,基質(zhì)松散,內(nèi)部結(jié)構(gòu)消失;亞急性期(17d):線粒體腫脹較前減輕,空泡樣變減輕,基質(zhì)松散,內(nèi)部結(jié)構(gòu)不清;恢復(fù)期(24d):線粒體腫脹進(jìn)一步減輕,其內(nèi)可見嵴,部分線粒體結(jié)構(gòu)正常。2.急性期(3d)NFAT1 m RNA、NFAT2m RNA表達(dá)水平與對照組比較顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);恢復(fù)期(24d)NFAT1 m RNA、NFAT2m RNA表達(dá)水平與急性期比較顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);恢復(fù)期(24d)NFAT1 m RNA、NFAT2m RNA表達(dá)水平與對照組比較升高不明顯,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.川崎病模型血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體在急性期(3d)病變最為嚴(yán)重,恢復(fù)期(24d)較急性期病變減輕,部分線粒體病變恢復(fù)正常;2.NFAT1 m RNA、NFAT2 m RNA表達(dá)水平在川崎病模型急性期(3d)明顯升高,恢復(fù)期(24d)較急性期表達(dá)水平明顯下降;3.推測在川崎病中,NFAT與血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體損傷可能具有相關(guān)性,其作用機(jī)制有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。
【關(guān)鍵詞】：川崎病 鼠模型 白色念珠菌細(xì)胞壁水溶物 川崎病 線粒體 NFAT1 mRNA NFAT2 mRNA
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R725.4
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 研究背景11-17
• 參考文獻(xiàn)13-17
• 第一部分：白色念珠菌細(xì)胞壁水溶物誘導(dǎo)幼鼠川崎病模型的構(gòu)建17-30
• 前言17
• 研究對象與方法17-22
• 結(jié)果22-25
• 討論25-27
• 結(jié)論27
• 參考文獻(xiàn)27-30
• 第二部分：川崎病線粒體病變與NFAT表達(dá)的初步實(shí)驗(yàn)研究30-46
• 前言30
• 研究對象與方法30-35
• 結(jié)果35-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述46-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 英漢雙解縮略詞54-55
• 致謝55-56

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本文編號：794570