發(fā)布時間：2017-08-11 18:01

  本文關(guān)鍵詞：CD40siRNA對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎大鼠外周血IL-21與IL-35表達(dá)的影響及意義

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【摘要】：背景心肌炎是兒童和青少年時期常見的心血管系統(tǒng)疾病,輕癥患者無任何臨床癥狀,嚴(yán)重者可發(fā)生心力衰竭、惡性心律失常、阿斯綜合征以及猝死,部分甚至可發(fā)展為擴(kuò)張型心肌病。主要的病理改變是局部或彌漫性心肌間質(zhì)炎性細(xì)胞滲出與心肌纖維的變性或壞死。有許多研究者通過應(yīng)用提純精制的豬心肌球蛋白對易感鼠種進(jìn)行免疫,誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎(EAM),其與人類重癥巨細(xì)胞性心肌炎發(fā)病進(jìn)程非常相似,是研究心肌炎的理想模型,已被國內(nèi)外研究者廣泛采用。目前認(rèn)為心肌炎的發(fā)生發(fā)展過程中,T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫機(jī)制占據(jù)重要地位,尤其是Th1/Th2與Th17/Treg的失衡在心肌炎的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。白細(xì)胞介素21(IL-21)主要由Th17細(xì)胞分泌,為致炎因子，，白細(xì)胞介素(IL-35)則主要是由Treg細(xì)胞分泌,為新型抗炎因子,兩者在多種自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中均發(fā)揮重要作用,如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE),及系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)等。IL-21在病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌組織及外周血中高表達(dá),提示IL-21參與了心肌炎的發(fā)病過程。以重組IL-35干預(yù)柯薩奇毒病3(CVB3)誘導(dǎo)的VMC小鼠,可延緩心肌炎病情發(fā)展。RNA干擾技術(shù)是近年來基因敲除研究中的新的分子生物學(xué)技術(shù),是指將一段外源雙鏈RNA (dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞中,該段dsRNA與內(nèi)源性mRNA編碼區(qū)某段序列具有同源性,從而導(dǎo)致該段mRNA發(fā)生特異性降解,即轉(zhuǎn)錄后特異基因沉默的現(xiàn)象,因此可以從源頭阻斷目的基因的表達(dá)。本課題組前期應(yīng)用CD40小分子干擾RNA (CD40siRNA)作用于EAM大鼠,初步試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)其可減輕心肌炎癥反應(yīng),上調(diào)CD4+CD25+Treg的表達(dá),降低EAM大鼠外周血Th17細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17與IL-23的水平,上調(diào)Th22細(xì)胞產(chǎn)生的IL-22的水平,由此糾正Th1/Th2與Th17/Treg的失衡。但CD40siRNA對1L-21和IL-35的水平是否產(chǎn)生影響尚未見報道,本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用CD40siRNA作用于EAM大鼠,從源頭阻斷CD40/CD40L受體/配體軸,觀察并分析其對EAM大鼠心肌組織病理變化、超聲心動圖改變及外周血IL-21與IL-35表達(dá)水平的影響,進(jìn)一步研究其作用機(jī)制。目的探討CD40siRNA對EAM大鼠模型心肌組織病理改變、超聲心動圖變化、外周血IL-21及IL-35表達(dá)的影響和意義。方法將6-8周20只雄性Lewis大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組,分別為正常組、EAM組、CD40siRNA組及siRNA組,每組5只。免疫第0天及第7天,除正常組大鼠雙后肢足墊區(qū)皮下注射PBS緩沖液外,其余3組大鼠雙后肢足墊區(qū)皮下則注射混合的豬心肌球蛋白,建立EAM大鼠模型。第7天CD40siRNA組及siRNA組經(jīng)尾靜脈分別注射CD40siRNA慢病毒表達(dá)載體及siRNA慢病毒表達(dá)載體。第21天,行超聲心動圖檢查后處死大鼠,用光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠心肌組織病理變化,并計算各組大鼠心肌組織病理積分,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測大鼠外周血IL-21與IL-35的水平變化。結(jié)果1.除正常組大鼠外,其余3組大鼠發(fā)病率均為100%,無一例死亡。2.自免疫第0天起,正常組大鼠體質(zhì)量逐漸增加,其余3組體質(zhì)量增加緩慢,尤其是EAM組與siRNA組大鼠體質(zhì)量增加最慢,但CD40siRNA組大鼠體質(zhì)量增長明顯高于EAM組(P0.05)。3.EAM組大鼠心臟質(zhì)量/體質(zhì)量比值明顯高于正常組(P0.05), CD40siRNA組大鼠心臟質(zhì)量／體質(zhì)量比值則明顯低于EAM組(P0.05)。4.正常組大鼠心臟大體外觀正常,EAM組及siRNA組均有1只大鼠心臟表面可見蒼白區(qū)域伴有灶性滲出。CD40siRNA組外觀與正常組比較未見明顯異常。CD40siRNA組大鼠心肌組織病理積分明顯低于EAM組(P0.05), siRNA組與EAM組相比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。5.經(jīng)超聲心動圖檢測EAM組及siRNA組各有1例大鼠探及大量心包積液,CD40siRNA組大鼠均未探及心包積液。EAM組、CD40siRNA組及siRNA組大鼠室間隔和左室后壁均增厚,心腔縮小,室壁運(yùn)動減低。CD40siRNA組左室短軸縮短率(LVFS)較EAM組明顯升高(P0.05)。6.EAM組大鼠外周血IL-21水平及IL-35水平較正常組均明顯升高(P0.05)。CD40siRNA組大鼠外周血IL-21水平則明顯低于EAM組(P0.05),其IL-35水平明顯高于EAM組(P0.05)。7.EAM組大鼠外周血IL-21水平與心肌組織病理積分成正相關(guān)(r=0.69,P0.05),而其IL-35水平與心肌組織病理積分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.64,P0.05)。結(jié)論1. CD40siRNA可減輕EAM大鼠的心肌炎癥,降低其心肌損傷程度。2.IL-21與IL-35在EAM大鼠中明顯升高,其IL-21水平與心肌組織病理積分成正相關(guān),而IL-35水平與心肌組織病理積分呈負(fù)相關(guān),IL-21與IL-35水平變化可以一定程度上反應(yīng)心肌損傷程度。3. CD40siRNA組IL-21的表達(dá)水平較EAM組明顯降低,而其IL-35水平則明顯高于EAM組。CD40siRNA對EAM大鼠的治療作用可能與下調(diào)IL-21、上調(diào)IL-35的表達(dá)水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：CD40siRNA 自身免疫性心肌炎 大鼠 白細(xì)胞介素-21 白細(xì)胞介素-35
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R725.4
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-14
• 前言14-19
• 材料與方法19-22
• 結(jié)果22-24
• 討論24-28
• 結(jié)論28-29
• 附圖表29-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述38-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文52-53
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表53

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本文編號：657467