本文關(guān)鍵詞：兒茶酚胺通過調(diào)控β2-AR-SIRT1-p53信號(hào)通路誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞化療藥物抵抗

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【摘要】：背景:宮頸癌是最常見的女性惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中僅次于乳腺癌居于第二位。目前，我國每年新確診的宮頸癌病例及其死亡率呈逐年上升趨勢，而且發(fā)病年齡日趨年輕化，宮頸癌已成為危害我國女性健康的一種重要疾病。手術(shù)治療和化療仍是目前宮頸癌的重要治療手段。宮頸癌細(xì)胞對化療藥物的抵抗是阻礙化療藥物臨床治療有效性以及造成患者不良預(yù)后的重要原因，但是宮頸癌對化療藥物耐藥的機(jī)制尚完全不清楚。 包括阿霉素在內(nèi)的部分臨床常用化療藥物可以通過誘導(dǎo)抑癌基因P53的表達(dá)以及活化，激活P53下游靶基因的表達(dá)，從而誘導(dǎo)抑制腫瘤細(xì)胞增殖或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。磷酸化、泛素化等多種翻譯后修飾對于p53發(fā)揮其生物學(xué)活性至關(guān)重要。乙�；揎椏稍鰪�(qiáng)p53的穩(wěn)定性并促進(jìn)p53的轉(zhuǎn)錄活性。P53的乙�；揎検且环N可逆性反應(yīng)。去乙�；窼IRT1可以使P53去乙�；�，抑制P53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性，抑制下游靶基因的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生，發(fā)展。 腫瘤患者普遍存在不同程度的心理壓力，這會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生慢性應(yīng)激反應(yīng)。大量事實(shí)表明，慢性應(yīng)激反應(yīng)可顯著影響腫瘤的進(jìn)程及患者的預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)室在前期工作中發(fā)現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)激素-糖皮質(zhì)激素可通過增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞中HPV（人乳頭瘤狀病毒）基因編碼的E6蛋白的表達(dá)，后者抑制p53以及miR145的表達(dá)，從而抑制化療藥物對宮頸癌細(xì)胞的殺傷。這一結(jié)果提示應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)激素可能在慢性應(yīng)激反應(yīng)調(diào)控腫瘤惡性演進(jìn)的過程中發(fā)揮重要作用。 兒茶酚胺（腎上腺素和去甲腎上腺素）是另一類重要的應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)激素，機(jī)體在經(jīng)歷慢性心理應(yīng)激反應(yīng)的過程中，體內(nèi)兒茶酚胺的水平顯著升高。我們實(shí)驗(yàn)室的前期工作已證明，兒茶酚胺在腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為調(diào)控中具有重要作用。然而兒茶酚胺能否影響宮頸癌對化療藥物的敏感性以及相關(guān)的分子機(jī)制均不清楚。 目的:探索兒茶酚胺調(diào)控宮頸癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性，，以及此過程的精確分子機(jī)制。 方法:（1）Western-Blot分析兒茶酚胺刺激宮頸癌細(xì)胞對SIRT1的表達(dá)影響；（2）實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測兒茶酚胺刺激宮頸癌細(xì)胞刺激后SIRT1轉(zhuǎn)錄水平的影響；（3）Western-Blot和免疫熒光法檢測兒茶酚對化療藥物誘導(dǎo)P53乙�；挠绊�；（4）雙熒光素酶法檢測兒茶酚胺對阿霉素誘導(dǎo)的P53轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)的影響；（5）TUNEL染色和Annexin V-FITC染色測定兒茶酚胺是否影響阿霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；（6）通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測兒茶酚胺能否誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞的化療藥物抵抗（7）Western-Blot和雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測SIRT1在兒茶酚胺抑制阿霉素誘導(dǎo)的P53乙�；揭约癙53轉(zhuǎn)錄活性中的作用；（9）通過動(dòng)物模型評價(jià)兒茶酚胺在體內(nèi)能否拮抗化療藥物阿霉素的抑瘤效應(yīng)（10）免疫組化檢測β2-AR在宮頸癌臨床組織標(biāo)本中表達(dá)模式。 結(jié)果:（1）Western-Blot分析結(jié)果顯示兒茶酚胺刺激宮頸癌細(xì)胞可以上調(diào)SIRT1的表達(dá)，并具有時(shí)間和劑量依賴性。（2）兒茶酚胺刺激后可以在轉(zhuǎn)錄水平，顯著上調(diào)SIRT1的表達(dá)。（3）兒茶酚胺可抑制化療藥物誘導(dǎo)的P53乙�；鰪�(qiáng)。（4）兒茶酚胺能夠顯著抑制阿霉素誘導(dǎo)的P53轉(zhuǎn)錄活性。（5）兒茶酚胺能夠抑制阿霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。（6）兒茶酚胺能夠明顯拮抗阿霉素對細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)。（7）SIRT1在兒茶酚胺抑制阿霉素誘導(dǎo)的P53乙�；揭约癙53轉(zhuǎn)錄活性中起到了關(guān)鍵作用。（8）兒茶酚胺能夠在移植瘤小鼠體內(nèi)抑制化療藥物阿霉素的療效。（9）β2-AR在宮頸癌臨床組織中高表達(dá)。 結(jié)論:在本研究中，我們首次發(fā)現(xiàn)兒茶酚胺通過誘導(dǎo)β2-AR活化，激活SIRT1表達(dá)上調(diào)，抑制P53乙�；蚉53的轉(zhuǎn)錄活性，拮抗化療藥物阿霉素的抗癌效應(yīng)。并首次報(bào)道，兒茶酚胺能夠在動(dòng)物體內(nèi)抑制化療藥物阿霉素對宮頸癌的治療效果。此外，本研究亦首次發(fā)現(xiàn)β2-AR在宮頸癌臨床組織中高表達(dá)。本研究的進(jìn)一步深入可能為臨床提高化療藥物療效提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：β2-AR SIRT1 P53 阿霉素 宮頸癌
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 1 材料13-15
• 1.1 細(xì)胞系13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• 1.4 實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 2 方法15-23
• 2.1 蛋白免疫印跡分析15
• 2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染15-16
• 2.3 免疫熒光16
• 2.4 P53 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性分析16-17
• 2.5 REAL-TIME RT-PCR17-19
• 2.6 流式細(xì)胞術(shù)19
• 2.7 細(xì)胞增殖檢測19
• 2.8 TUNEL 細(xì)胞凋亡19-20
• 2.9 動(dòng)物模型建立20-21
• 2.10 免疫組化21-23
• 3 結(jié)果23-35
• 3.1 兒茶酚胺刺激宮頸癌細(xì)胞可以上調(diào) SIRT1 的表達(dá)23-24
• 3.2 兒茶酚胺可以在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào) SIRT1 的表達(dá)24-25
• 3.3 兒茶酚胺主要通過誘導(dǎo) 2-AR 活化上調(diào) SIRT1 表達(dá)25
• 3.4 兒茶酚胺通過增強(qiáng) SIRT1 表達(dá)從而抑制阿霉素誘導(dǎo)的 P53 乙酰化25-27
• 3.5 兒茶酚胺能夠抑制阿霉素誘導(dǎo)的 P53 轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)27-28
• 3.6 兒茶酚胺能夠明顯抑制阿霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡28-29
• 3.7 兒茶酚胺能夠明顯誘導(dǎo)化療藥物的抵抗29-31
• 3.8 SIRT1 在兒茶酚胺抑制阿霉素誘導(dǎo)的 P53 乙�；约� P53 轉(zhuǎn)錄活性中，起到了關(guān)鍵作用31-32
• 3.9 兒茶酚胺能夠在體內(nèi)拮抗化療藥物阿霉素的抑瘤效應(yīng)32-33
• 3.10 2-AR 在宮頸癌組織中高表達(dá)33-35
• 4 結(jié)論35-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 文獻(xiàn)綜述39-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄47-49
• 致謝49-50

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：592930