本文關鍵詞：miR-20b過表達對斑馬魚胚胎心臟發(fā)育的影響

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【摘要】：先天性心臟病(CHD)是出生嬰兒最常見的先天畸形,嚴重危害人類的生命健康。其病因和發(fā)病機制已經得到廣泛的研究,但是具體機制尚未明確。目前的研究顯示胚胎期環(huán)境因素和遺傳因素的改變是引起先心病的主要病因,因此,研究環(huán)境因子和遺傳因素在心臟發(fā)生過程中的作用對新生兒先天性心臟發(fā)育缺陷的預防、診斷和治療有著重要的意義。 MicroRNA(miRNA)是一類具有轉錄后調節(jié)活性的內源性小分子RNA。它在物種進化過程中高度保守,目前對于miRNA的研究逐漸成為醫(yī)學研究的一個熱點,業(yè)已證明,miRNA參與諸多重要的生理、病理過程,尤其在器官發(fā)生的過程中發(fā)揮重要的作用。miR-20b是我們篩選發(fā)現(xiàn)的、在室間隔缺損流產胚胎心臟組織中表達顯著上調的miRNA,其致胚胎心臟發(fā)育畸形及機制研究尚無文獻報道。 在本研究中,我們利用在心血管系統(tǒng)發(fā)育研究方面具有獨特優(yōu)勢的模式動物斑馬魚,揭示了過表達miR-20b在脊椎動物早期心臟發(fā)育的過程中產生的影響。通過在單細胞期顯微注射miR-20b mimic實現(xiàn)過表達,從形態(tài)學上看,過表達miR-20b會導致斑馬魚胚胎出現(xiàn)明顯的心包水腫,并呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。受精后120小時(120hpf)胚胎的心臟組織學切片結果顯示,miR-20b過表達會影響心室壁的正常形成和房室通道處的心內膜墊發(fā)生,導致在120hpf時,斑馬魚的心室壁明顯變薄、瓣膜發(fā)育明顯缺失。胚胎整體原位雜交顯示,miR-20b過表達后,心臟祖細胞標記基因hand2、nkx2.5和gata4以及決定瓣膜前體細胞發(fā)生的標志基因bmp4、versican和notch1b等基因的表達顯著下調,房室特異性的標志基因amhc、vmhc和cmlc2的表達范圍明顯變小,這就說明miR-20b過表達是通過抑制心臟前體細胞的分化影響斑馬魚的心臟發(fā)育的。上述的這些心臟發(fā)育異常最終對心臟功能造成了顯著的影響,對心率的測定結果正是證明了這一點。進一步的研究發(fā)現(xiàn),miR-20b通過作用于其直接靶基因bmprlaa,影響bmp信號通路,參與早期心臟發(fā)育過程,而在miR-20b過表達的胚胎內共注射bmprlaa mRNA可部分拯救過表達miR-20b引起的心臟發(fā)育異常表型。綜上所述,miR-20b可以通過作用于bmp信號通路,從而影響脊椎動物心肌和房室瓣膜的發(fā)生。
【關鍵詞】：斑馬魚 miR-20b 心臟發(fā)育 bmp信號通路
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R541.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-14
• 第一部分 miR-20b過表達通過抑制心臟祖細胞的分化影響斑馬魚的心臟發(fā)育14-40
• 材料與方法14-25
• 結果25-38
• 討論38-40
• 第二部分 miR-20b通過抑制bmp信號通路調控斑馬魚胚胎的心臟發(fā)生40-58
• 材料與方法40-47
• 結果47-56
• 討論56-58
• 小結58-59
• 參考文獻59-66
• 綜述66-78
• 參考文獻73-78
• 附錄78-80
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況及其他80-81
• 附件81-85
• 致謝85-86

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