本文關(guān)鍵詞：新生期小鼠胰島細(xì)胞變化及其增殖機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、建立新生期小鼠胰島分離純化方法。2、研究新生期小鼠胰島細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。3、觀察新生期小鼠胰島細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)變化,探討其與胰島細(xì)胞增殖的關(guān)系。方法:1、胰腺局部充盈、膠原酶Ⅴ消化,單純顯微鏡下手挑胰島,獲得出生后1周、3周和8周C57BL/6小鼠的胰島。2、以胰島素和胰高血糖素雙染胰島細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光法檢測(cè)不同階段小鼠胰島β和α細(xì)胞構(gòu)成比例的變化。3、采用免疫組化染色法檢測(cè)不同階段小鼠胰島β/α細(xì)胞量、單個(gè)細(xì)胞面積、細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞構(gòu)成比例的變化以及Rb、p107、p130、E2F1、cdk1和cyclinB1的表達(dá)變化。4、通過(guò)PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同階段小鼠胰島細(xì)胞周期的變化。通過(guò)Ki67和胰島素雙染免疫熒光法觀察不同階段小鼠胰島β細(xì)胞增殖的變化。5、運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)不同階段小鼠胰島細(xì)胞周期相關(guān)基因mRNA的表達(dá)變化。6、利用Westernblot技術(shù)分析不同階段小鼠胰島細(xì)胞周期相關(guān)基因蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1、在1mg/mL酶濃度下,1周和3周小鼠胰島的最適消化時(shí)間分別為23min(38.11±2.78胰島/胰腺)和25min(66.06±2.61胰島/胰腺)。1周以直徑50μm胰島居多(P0.01),而3周以50~99μm者居多(P0.01)。單純手挑組胰島得量顯著高于Histopaque-1077純化組(P0.05)。所得胰島存活率和純度均90%,且存在β和α細(xì)胞構(gòu)成比例的變化(P0.05)。2、與1周相比,3周和8周胰島β/α細(xì)胞量顯著增加(均P0.05);單個(gè)β/α細(xì)胞面積在3周時(shí)無(wú)明顯差異,8周時(shí)均擴(kuò)大1.7倍(均P0.01);而β/α細(xì)胞數(shù)量在3周增加約3.5/3.7倍(均P0.01),8周與3周無(wú)明顯差異;α細(xì)胞比例在3周和8周時(shí)明顯下降,而β細(xì)胞比例明顯增加(均P0.01)。新生期小鼠胰島細(xì)胞增殖顯著,與8周相比,1周和3周時(shí)G0/G1期細(xì)胞明顯減少(均P0.05),而G2/M期顯著增多(均P0.05),細(xì)胞增殖指數(shù)明顯增加(均P0.01)。1周時(shí)Ki67、胰島素雙陽(yáng)性細(xì)胞占胰島素陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯高于3周和8周(P0.01)。3、與1周相比,8周時(shí)Rb、p107、E2F1/2/3、cyclinD1/E1/A1/A2/B1/B2、cdk6/2/1、cdc25b/c、Wee1mRNA表達(dá)明顯降低(均P0.05),而p130、E2F4/5、cdc25amRNA表達(dá)增高。cdk4在3周時(shí)表達(dá)顯著高于1周和8周(P0.05)。從出生后1周、3周至8周,p16和p27mRNA表達(dá)均逐漸降低,而p21在3周時(shí)較高。免疫組化顯示:Rb、p107、p130、E2F1均在不同階段胰島細(xì)胞胞漿中差異表達(dá);cdk1和cyclinB1在胞漿和胞核中均有表達(dá),且不同階段胰島存在差異。Westernblot結(jié)果顯示:與1周相比,8w時(shí)Rb、p107、E2F1、cdk1和cyclinB1表達(dá)均明顯降低,p130表達(dá)顯著增高(均P0.05)。結(jié)論:1、胰腺局部充盈、膠原酶Ⅴ消化后鏡下手挑胰島是一種較好的新生期小鼠胰島分離純化方法,消化時(shí)間和純化方法是其重要影響因素。2、新生期小鼠胰島細(xì)胞量擴(kuò)增明顯,以細(xì)胞數(shù)量增加為主;細(xì)胞構(gòu)成比例變化顯著;細(xì)胞增殖顯著,其中β細(xì)胞增殖明顯。3、新生期小鼠胰島細(xì)胞中細(xì)胞周期相關(guān)基因在mRNA水平和蛋白水平均存在顯著表達(dá)變化,提示其可能參與新生期胰島細(xì)胞增殖的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：新生期 胰島細(xì)胞 增殖 細(xì)胞周期相關(guān)基因
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 研究背景12-14
• 參考文獻(xiàn)13-14
• 第一部分 新生期小鼠胰島分離純化方法的研究14-27
• 摘要14-15
• Abstract15-16
• 引言16
• 1、實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 2、實(shí)驗(yàn)方法19-20
• 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-23
• 討論23-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 第二部分 新生期小鼠胰島細(xì)胞變化的研究27-41
• 摘要27-28
• Abstract28-29
• 引言29
• 1、實(shí)驗(yàn)材料29-32
• 2、實(shí)驗(yàn)方法32-34
• 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-38
• 討論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-41
• 第三部分 新生期小鼠胰島細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)變化41-65
• 摘要41-42
• Abstract42-43
• 引言43
• 1、實(shí)驗(yàn)材料43-49
• 2、實(shí)驗(yàn)方法49-53
• 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-58
• 討論58-62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 結(jié)論與展望65-66
• 文獻(xiàn)綜述66-75
• 參考文獻(xiàn)72-75
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況75-76
• 致謝76

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 文永植;金美玉;金美善;李相伍;金鶴松;;硼對(duì)小鼠胰島毒性作用的免疫組織化學(xué)研究[J];延邊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1987年03期

2 李佐強(qiáng),Naeser Peter,Claes Hellerstr;醛糖還原酶抑制劑對(duì)小鼠胰島山梨醇代謝的影響[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;1993年03期

3 張樹庸;;美發(fā)現(xiàn)提高小鼠胰島素敏感性新法[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2012年01期

4 張旭東;賈書花;張雷;;小鼠胰島內(nèi)分泌細(xì)胞的構(gòu)成及其與Ⅱ型糖尿病的關(guān)系[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2009年01期

5 鐘嘉明;張佳林;李曉航;張成鈞;程穎;劉永鋒;;不同消化條件對(duì)小鼠胰島分離純化效果的影響[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年09期

6 李佐強(qiáng);葡萄糖對(duì)小鼠胰島山梨醇蓄積的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;1994年01期

7 朱嘉瑜;王曉兢;張勤鳳;徐一力;武曉泓;;新生期小鼠胰島分離純化方法的研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年06期

8 金政,李善花,蔡英蘭,李相伍,樸麗花;富鉻酵母對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠胰島影響的免疫組織化學(xué)觀察[J];微量元素與健康研究;2001年04期

9 劉曉紅;陳洲;王燕萍;劉禮斌;;胰島素樣生長(zhǎng)因子-1對(duì)小鼠胰島細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2007年06期

10 合湫;蘇恒;李超;沈濤;嚴(yán)新民;薛元明;;簡(jiǎn)便快捷的小鼠胰島分離純化方法研究[J];昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年08期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 朱嘉瑜;張勤鳳;王曉兢;徐一力;呂穎鉞;張潔;武曉泓;;新生期小鼠胰島增殖的變化及其與細(xì)胞周期相關(guān)基因關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

2 蔣鐵建;蘇恒;周智廣;;NOD小鼠胰島分離與純化的方法研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

3 李如江;周生偉;岳炳德;張雪莉;;1型糖尿病鼠胰島內(nèi)分泌干細(xì)胞量的變化及其機(jī)制[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2013年年會(huì)論文文摘匯編[C];2013年

4 王相清;龔鳳英;朱惠娟;潘慧;王林杰;李乃適;陽(yáng)洪波;;紅花黃色素增加肥胖小鼠胰島素敏感性的作用及其機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

5 王曉云;徐明彤;林秀紅;宛彥;任萌;李焱;嚴(yán)勵(lì);;血管緊張素-(1-7)對(duì)小鼠胰島素分泌細(xì)胞株NIT-1增殖的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

6 王曉云;徐明彤;任萌;林秀紅;嚴(yán)勵(lì);;血管緊張素-(1-7)對(duì)小鼠胰島素分泌細(xì)胞株NIT-1凋亡的影響及機(jī)制初探[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

7 祝方;鄭晟e，

本文編號(hào)：476503