目的1.ADHD患兒血清差異表達microRNA對FOXO1表達調(diào)控的作用。2.ADHD動物模型SHR大鼠PFC中過表達和干擾miR-144-3P后,觀察SHR多動樣癥狀的變化以及FOXO1和TH表達水平的改變。3.分析FOXO1在不同分化程度細胞中表達水平的差異,過表達和干擾miR-144-3P后觀察細胞分化水平變化。方法1.收集40例未經(jīng)治療的ADHD患兒和120例相同條件的健康兒童血清樣本,形成1比3配比配對,經(jīng)過芯片篩選出血清中差異表達的全部microRNA。重新收集血清樣本,RT-qPCR對差異表達microRNA進行驗證。2.通過生物信息網(wǎng)站在有差異的microRNA中分析篩選出靶向調(diào)節(jié)FOXO1的microRNA。熒光素酶(Luciferas)活性實驗驗證該microRNA是否靶向結(jié)合FOXO1 3?UTR。3比較WKY和SHR大鼠PFC miR-144-3P和FOXO1表達水平差異。SHR大鼠PFC注射過表達慢病毒載體miR-144-3p-virus,通過曠場實驗和迷宮實驗觀察SHR大鼠ADHD樣行為變化;取PFC腦組織,分別在mRNA和蛋白水平檢測FOXO1和TH的表...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1:ADHD兒童和健康兒童血清差異表達microRNA熱圖

收集40例未經(jīng)治療的ADHD患兒和120例相同條件的健康兒童血清樣本,形成1比3配比配對,通過miRNA芯片獲得ADHD患兒和健康兒童血清全部miRNA表達譜,從中篩選出有統(tǒng)計學差異的microRNA。如圖1所示:以紫色代表低表達量,紅色代表高表達量,芯片顯示數(shù)值大小即為miRN....

圖4、A:FOXO13"UTR區(qū)野生型與miR-144-3p結(jié)合位點及FOXO13"UTR突變型示意圖,;B、C:熒光素酶報告載體野生型或突變型與pLL3.7-miR-144或pLL3.7共轉(zhuǎn)染后測熒光素酶活性(與對照組相比,**P<0.01)。

構(gòu)建熒光素酶報告載體psi-CHECK2-FOXO13?UTR和psi-CHECK2-FOXO13?UTRmut,該載體包含F(xiàn)OXO13"UTR與miR-144結(jié)合區(qū)的野生型和突變型(4A)。將載體與pll3.7-miR-144共轉(zhuǎn)染,并在24小時后檢測Luciferase活....

圖4、A:FOXO13"UTR區(qū)野生型與miR-144-3p結(jié)合位點及FOXO13"UTR突變型示意圖,;B、C:熒光素酶報告載體野生型或突變型與pLL3.7-miR-144或pLL3.7共轉(zhuǎn)染后測熒光素酶活性(與對照組相比,**P<0.01)。

圖4、A:FOXO13"UTR區(qū)野生型與miR-144-3p結(jié)合位點及FOXO13"UTR突變型示意圖,;B、C:熒光素酶報告載體野生型或突變型與pLL3.7-miR-144或pLL3.7共轉(zhuǎn)染后測熒光素酶活性(與對照組相比,**P<0.01)。六、miR-144-3p調(diào)....

圖5:A:miR-144-3p過表達后FOXO1mRNA表達水平;B:miR-144-3p過表達后FOXO1蛋白表達水平及量化圖;C:miR-144-3p過表達后THmRNA表達水平;D:FOXO1過表達后TH蛋白表達水平及量化圖;E:FOXO1質(zhì)粒過表達效率檢測(左)及FOXO1過表達后THmRNA表達水平(右)。(與對照組相比,*P<0.05)

pLL3.7-miR-144和pLL3.7及FOXO1過表達質(zhì)粒(pcDNA3.1B-FOXO1)和pcDNA3.1B(mock)分別轉(zhuǎn)染到SH-SY5Y細胞中,24h后收集RNA,分別檢測FOXO1和THmRNA及蛋白表達量。結(jié)果顯示,miR-144-3p過表達后FOXO1表....

本文編號：3963711