發(fā)布時(shí)間：2017-05-26 09:00

  本文關(guān)鍵詞：Pin1介導(dǎo)高氧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞凋亡中SIRT1核—漿穿梭改變，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:Pin1是人類肽基脯氨酰異構(gòu)酶,實(shí)驗(yàn)組前期發(fā)現(xiàn),Pin1參與細(xì)胞氧化應(yīng)激通路,抑制其表達(dá)后可能夠減少高氧所造成的肺損傷,而SIRT1稱為沉默交配型信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1,主要定位于細(xì)胞核中,其發(fā)揮活性參與調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化應(yīng)激過程。本實(shí)驗(yàn)建立在穩(wěn)定抑制肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(Pin1)表達(dá)的A549細(xì)胞系基礎(chǔ)上,當(dāng)暴露于高氧環(huán)境下,SIRT1能否發(fā)生核-漿穿梭反應(yīng),導(dǎo)致SIRT1活性降低,抗氧化應(yīng)激能力下降,增加高氧肺損傷可能,而在抑制了Pin1表達(dá)的A549細(xì)胞中能否減輕SIRT1核-漿穿梭反應(yīng),從而減輕高氧肺損傷。方法:通過本實(shí)驗(yàn)組前期實(shí)驗(yàn)獲得穩(wěn)定抑制Pin1表達(dá)的A549-Pin1sh RNA細(xì)胞系。隨后將實(shí)驗(yàn)分為三組:對照組、高氧組,A549-Pin1sh RNA組。對照組是通過含有10%胎牛血清和1%青鏈霉素的1640培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)。高氧組及A549-Pin1sh RNA組均通過通入3L/min的95%氧氣和5%二氧化碳高純混合氣10min,并在培養(yǎng)箱中密培養(yǎng)24h的高體積分?jǐn)?shù)氧(高氧)誘導(dǎo)細(xì)胞。培養(yǎng)結(jié)束后收集細(xì)胞進(jìn)行以下檢測:倒置相差顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;采用SP細(xì)胞免疫化學(xué)方法檢測各組細(xì)胞中Caspase 3、p53蛋白的表達(dá);熒光顯微鏡檢測定位SIRT1核-漿穿梭情況。結(jié)果:(1)在倒置顯微鏡下,對照組細(xì)胞生長狀態(tài)良好,細(xì)胞活性好,活細(xì)胞數(shù)量多,少見細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)基中,細(xì)胞呈梭形,細(xì)胞間隙較小,連接緊密。高氧組細(xì)胞生長狀態(tài)差,活細(xì)胞明顯較對照組明顯減少,培養(yǎng)基中可見大量細(xì)胞漂浮,剩下的活細(xì)胞排列松散,細(xì)胞間隙較前明顯增寬。而A549-Pin1sh RNA組生長狀態(tài)欠佳,活細(xì)胞數(shù)量較高氧組多,懸浮在培養(yǎng)基中的細(xì)胞較高氧組少,但未達(dá)到對照組水平;(2)SP細(xì)胞免疫化學(xué)方法檢測各組細(xì)胞中Caspase 3、p53蛋白的表達(dá):高氧組與對照組相比,Caspase3、p53蛋白表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而A549-Pin1sh RNA組中Caspase 3、p53蛋白表達(dá)較前有所降低,其值介于高氧組與對照組之間,與高氧組、對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(3)熒光顯微鏡檢測定位SIRT1核-漿穿梭情況:細(xì)胞核染成藍(lán)色熒光,SIRT1染色成紅色熒光,其在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)均有表達(dá),而主要是在細(xì)胞核中發(fā)揮其作用。對照組細(xì)胞質(zhì)中紅色熒光表達(dá)微弱,而高氧組中細(xì)胞質(zhì)紅色熒光表達(dá)最強(qiáng),在A549-Pin1sh RNA組紅色熒光含量較對照組有所增多,差異有顯著性(P0.05),但未達(dá)到高氧組水平(P0.05)。結(jié)論:高氧能夠誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Pin1介導(dǎo)p66shc在線粒體的轉(zhuǎn)位增多,使得線粒體內(nèi)活性氧產(chǎn)生增多,而在抑制Pin1表達(dá)的A549-Pin1sh RNA細(xì)胞系中,能夠減少SIRT1的核-漿穿梭,減少SIRT1活性的下降,從而減少Caspase 3、p53的生成,減輕高氧肺損傷,這有望成為高氧肺損傷新的治療途徑。
【關(guān)鍵詞】：Pin1 SIRT1 高氧 核-漿穿梭
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-20
• 結(jié)果20-25
• 討論25-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-36
• 英漢縮寫及中英文對照36-37
• 致謝37-38
• SIRT1 在炎癥反應(yīng)和細(xì)胞衰老的研究進(jìn)展 ( 綜述 )38-61
• 參考文獻(xiàn)44-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表和撰寫的文章61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 車忠麗;董文斌;李清平;雷小平;康蘭;郭琳;翟雪松;王勝會(huì);陳楓;;PKCβ/P66Shc氧化應(yīng)激通路在高氧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞活性氧簇產(chǎn)生中的作用[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2015年03期

  本文關(guān)鍵詞：Pin1介導(dǎo)高氧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞凋亡中SIRT1核—漿穿梭改變，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：396283