目的:制備和鑒定抗8-異前列腺素(8-iso-prostaglandin F 2alpha,8-iso-PGF2α)單克隆抗體;制備8-iso-PGF2α測定試劑盒(ELISA);應(yīng)用該試劑盒測定缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生兒尿8-iso-PGF2α水平。 方法:利用碳二亞胺法(EDC)連接半抗原8-iso-PGF2α和載體蛋白BSA/OVA,免疫BALB/C小鼠,將免疫成功的小鼠脾細胞與SP2/O融合后利用間接ELISA篩選出陽性克隆并擴大培養(yǎng),陽性克隆制備腹水后進行提純。應(yīng)用辣根過氧化物酶標記8-iso-PGF2α,制備ELISA法測定試劑盒,并測定126例正常新生兒和151例HIE患兒尿8-iso-PGF2α含量。 結(jié)果:獲得一株穩(wěn)持續(xù)定分泌抗8-iso-PGF2α單克隆抗體的細胞株。ELISA試劑盒中的8-iso-PGF2α抗體包被濃度為1μg/ml,溫育時間為30分鐘,Cutoff值為0.14+NC,所需樣本量為100μl,試劑盒37℃放置7天OD₄₅₀值無明顯變化。正常新生...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
第一章 前言
    1.1 研究意義
    1.2 8-iso-PGF2α的代謝及生物學(xué)特性
    1.3 8-iso-PGF2α的測定方法
    1.4 8-iso-PGF2α測定的臨床意義
        1.4.1 心血管系統(tǒng)疾病
        1.4.2 神經(jīng)系統(tǒng)疾病
        1.4.3 呼吸系統(tǒng)疾病
        1.4.4 其它系統(tǒng)疾病
    1.5 單克隆抗體
    1.6 雜交瘤技術(shù)的概念與分類
    1.7 單克隆抗體的概念及特性
    1.8 本試驗中抗原的特殊性
第二章 8-iso-PGF2α多克隆抗體的制備
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要材料及試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要緩沖液及其配制
    2.2 方法
        2.2.1 抗原的制備
        2.2.2 免疫小鼠
        2.2.3 試血和采血
        2.2.4 抗血清的保存
    2.3 結(jié)果與討論
    2.4 小結(jié)
第三章 細胞融合
    3.1 細胞融合技術(shù)
    3.2 HAT選擇性培養(yǎng)
    3.3 主要器材
    3.4 主要設(shè)備
    3.5 主要試劑
    3.6 主要試劑的配制
    3.7 試驗方法
        3.7.1 飼養(yǎng)細胞的制備
            3.7.1.1 器材和試劑
            3.7.1.2 操作方法
        3.7.2 細胞融合
            3.7.2.1 器材和試劑
            3.7.2.2 操作方法
    3.8 結(jié)果與討論
    3.9 小結(jié)
第四章 8-iso-PGF2α單克隆抗體的篩選和檢測
    4.1 免疫酶技術(shù)
        4.1.1 原理
        4.1.2 器材和試劑
        4.1.3 實驗方法
    4.2 凍存陽性克隆
    4.3 有限稀釋法克隆化
    4.4 結(jié)果與討論
    4.5 小結(jié)
第五章 腹水型單克隆抗體的生產(chǎn)與純化
    5.1 腹水的制備
        5.1.1 器材與試劑
        5.1.2 方法
    5.2 腹水型單克隆抗體的純化
        5.2.1 腹水的預(yù)處理
        5.2.2 硫酸銨鹽法初提單克隆抗體
    5.3 結(jié)果與討論
    5.4 小結(jié)
第六章 8-iso-PGF2α測定試劑盒(ELISA)的制備
    6.1 前言
    6.2 原理及用途
    6.3 材料與方法
    6.4 試劑組成
    6.5 試劑參數(shù)確定
    6.6 試劑盒使用方法
    6.7 討論
第七章 8-iso-PGF2α在新生兒HIE病情評估中的價值
    7.1 研究背景
    7.2 對象與方法
        7.2.1 臨床資料
        7.2.2 研究方法
    7.3 結(jié)果
        7.3.1 正常與HIE患兒尿8-iso-PGF2α水平
        7.3.2 尿8-iso-PGF2α評估新生兒HIE病情的準確性
    7.4 討論
參考文獻
在校期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3919662