目的:研究中國(guó)山東地區(qū)先天性甲狀腺功能減退癥(Congenital hypothyroidism,CH)伴甲狀腺腫大患兒雙氧化酶1(DUOX1)基因突變的類(lèi)型及特點(diǎn),并對(duì)突變CH患兒的臨床表型進(jìn)行確認(rèn),建立基因型與表型的關(guān)系。對(duì)本次研究發(fā)現(xiàn)的DUOX1基因突變及前期工作中發(fā)現(xiàn)的雙氧化酶成熟因子1(DUOXA1)基因突變進(jìn)行功能學(xué)研究,從而闡明DUOX1/DUOXA1基因突變導(dǎo)致CH的致病機(jī)理。方法:選取43例甲狀腺腫大的CH患兒及100例正常對(duì)照新生兒作為研究對(duì)象,提取其外周血基因組DNA,采用PCR及一代測(cè)序的方法,對(duì)DUOX1基因全部外顯子進(jìn)行突變篩查。對(duì)本次研究發(fā)現(xiàn)的DUOX1基因突變(c.3910G>A,p.R1307Q)及前期工作中發(fā)現(xiàn)的DUOXA1基因突變(c.166C>T,p.R56W)進(jìn)行功能學(xué)研究。首先,構(gòu)建DUOX1、DUOXA1野生型及突變型真核表達(dá)載體,提取質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞。利用q-PCR及Western-blot技術(shù)從m RNA及蛋白水平上檢測(cè)DUOX1/DUOXA1基因突變對(duì)DUOX1基因m RNA及蛋白表達(dá)的影響。其次,利用多功能酶標(biāo)儀檢...

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1DUOX1基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

圖1DUOX1基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果上面條帶：從左至右泳道依次為MarkerDL2000，DUOX1基因第1~27外顯子擴(kuò)增產(chǎn)物下面條帶：從左至右泳道依次為MarkerDL2000，DUOX1基因第28~35-2外顯子擴(kuò)增引物2DUOX1....

圖2DUOX1基因突變位點(diǎn)（c.3910G>A）及SNP位點(diǎn)（c.3228A>G，rs1706804）

圖2DUOX1基因突變位點(diǎn)（c.3910G>A）及SNP位點(diǎn)（c.3228A>G，rs1706804）A1:箭頭所指為第31外顯子c.3910G/G；A2:箭頭所指為第31外顯子c.3910G/A；A3:箭頭所指為第31外顯子c.3910C/T....

圖3不同物種DUOX1蛋白序列同源性比對(duì)圖

圖2DUOX1基因突變位點(diǎn)（c.3910G>A）及SNP位點(diǎn)（c.3228A>G，rs1706804）A1:箭頭所指為第31外顯子c.3910G/G；A2:箭頭所指為第31外顯子c.3910G/A；A3:箭頭所指為第31外顯子c.3910C/T....

圖4PolyPhen2和SIFT對(duì)DUOX1蛋白突變位點(diǎn)（p.R1307Q）的預(yù)測(cè)結(jié)果

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文4SIFT和PolyPhen2預(yù)測(cè)DUOX1基因突變性質(zhì)利用SIFT和PolyPhen2在線預(yù)測(cè)工具對(duì)DUOX1蛋白突變位點(diǎn)（p.R1307Q）進(jìn)行突變性質(zhì)預(yù)測(cè)。對(duì)于對(duì)PolyPhen2來(lái)說(shuō)，score越接近1表示突變對(duì)蛋白功....

本文編號(hào)：3891564