感染性腦損傷是兒科常見的危急重癥,雖然隨著高效抗生素的廣泛應用,近年死亡率有所下降,但其致殘率仍然很高,存活的患兒中約有30%-50%留有嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。感染性腦損傷時血腦屏障(blood-brain barrier, BBB)通透性增高所致的顱高壓是其患者致死或致殘的主要原因之一。腦微血管內(nèi)皮細胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)及BMECs(?)司的緊密連接(tight junction,TJ)是維持BBB結(jié)構(gòu)和功能完整的主要成分及結(jié)構(gòu)基礎。已有的研究發(fā)現(xiàn)多種因素參與了感染性腦損傷時BBB通透性增高的發(fā)生發(fā)展,涉及細菌毒素如脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、細胞因子如腫瘤壞死因子-a(tumor necrosis factor-α, TNF-α)與BMECs的相互作用。目前對TJ的研究主要以肺微血管內(nèi)皮細胞或上皮細胞為對象,感染性腦損傷時LPS致BMECs通透性增高、BMECs-TJ改變及其調(diào)控機制的研究較少。 小分子G蛋白Rho (Ras homologous, Rho)屬于Ras超家族,包括...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞簡表
第一部分 LPS對原代大鼠BMECs通透性的影響及機制
    1.1 前言
    1.2 材料和方法
        1.2.1 動物
        1.2.2 主要儀器
        1.2.3 主要試劑
        1.2.4 試劑配置
        1.2.5 實驗方法與步驟
        1.2.6 統(tǒng)計學處理
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 大鼠BMECs形態(tài)學觀察及Ⅷ因子鑒定
        1.3.2 LPS引起B(yǎng)MECs通透性增高
        1.3.3 LPS上調(diào)p115RhoGEF蛋白表達水平
        1.3.4 LPS引起RhoA活性增高
        1.3.5 LPS下調(diào)TJ蛋白ZO-1、Occludin和claudin-5的表達水平
    1.4 討論
    1.5 結(jié)論
第二部分 p115RhoGEF/RhoA信號通路參與LPS致BMECs通透性增高的調(diào)控
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 研究對象
        2.2.2 主要實驗儀器
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 實驗方法與步驟
        2.2.5 統(tǒng)計學處理
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 LPS上調(diào)bEnd.3細胞p115RhoGEF蛋白表達
        2.3.2 轉(zhuǎn)染p115RhoGEF-siRNA對bEnd.3細胞p115RhoGEF蛋白表達的影響
        2.3.3 抑制p115RhoGEF表達對LPS誘導bEnd.3細胞RhoA活化的影響
        2.3.4 抑制p115RhoGEF表達對LPS致bEnd.3細胞TEER下降的影響
        2.3.5 抑制p115RhoGEF表達對LPS致bEnd.3細胞F-actin改變的影響
        2.3.6 抑制p115RhoGEF表達對LPS致bEnd.3細胞TJ蛋白表達下降的影響
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
第三部分 Rho信號通路與TNF-α致BMECs通透性增高相關(guān)
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 研究對象
        3.2.2 主要實驗儀器及設備
        3.2.3 主要試劑及耗材
        3.2.4 實驗方法與步驟
        3.2.5 統(tǒng)計學處理
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 各組RhoA蛋白表達水平
        3.3.2 各組RhoA活性水平
        3.3.3 p115RhoGEF-siRNA對bEnd.3細胞p115RhoGEF表達的影響
        3.3.4 抑制p115RhoGEF表達對TNF-α致RhoA活性改變的影響
        3.3.5 Y-27632預處理對TNF-α致bEnd.3細胞TEER改變的影響
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
已發(fā)表的論文及獲獎成果



本文編號：3854420