目的:腸神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric nervous system,ENS)發(fā)育異常作為最常見的兒童消化道畸形之一,其調(diào)控機(jī)制目前尚不清楚。在本課題組前期轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果中發(fā)現(xiàn)小腦變性相關(guān)蛋白1反義轉(zhuǎn)錄物(cerebellar degeneration-related ptotein 1antisese,CDR1as)存在差異性表達(dá)。CDR1 as是CDR1基因外顯子反向剪接以3’-5’磷酸鍵環(huán)化形成的環(huán)狀RNA。關(guān)于環(huán)狀RNA CDR1as的研究多集中于腫瘤、代謝等疾病,尚未見報道關(guān)于腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的研究。因此本研究首先用CDR1 as RT-PCR驗證測序結(jié)果。根據(jù)該實驗結(jié)果,利用大鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞,通過細(xì)胞增殖(CCK-8法)、細(xì)胞凋亡(AV-PI法)、細(xì)胞遷移(Transwell)等功能實驗,探討CDR1as在腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的作用。研究方法:1、先天性巨結(jié)腸患者腸管中CDR1as的表達(dá)情況采集術(shù)中廢棄先天性巨結(jié)腸痙攣段作為病例組,正常段作為對照組,利用q RT-PCR觀察CDR1as的表達(dá)情況。2、利用人鼠同源序列分析、PCR、瓊脂糖DNA電泳、克隆測序,獲得大鼠CDR1as反式剪...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 臨床實驗對象、實驗動物與實驗材料
    2.1 臨床實驗對象的選擇
    2.2 實驗動物
    2.3 實驗材料
3 實驗方法
    3.1 環(huán)狀RNA CDR1as在先天性巨結(jié)腸患者病變腸管中的表達(dá)
    3.2 大鼠環(huán)狀RNA CDR1as反式剪接位點引物設(shè)計及鑒定
    3.3 大鼠CDR1as ShRNA腺病毒載體構(gòu)建及鑒定
    3.4 不同天數(shù)(E10、E12、E14)大鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞CDR1as的表達(dá)
    3.5 大鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞CDR1as ShRNA腺病毒載體轉(zhuǎn)染、外泌體提取及鑒定
    3.6 測定大鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞CDR1as下調(diào)后增殖、凋亡及遷移
    3.7 測定大鼠腸神經(jīng)嵴(CDR1as敲減)干細(xì)胞來源外泌體對其自身增殖、凋亡、遷移
4 實驗結(jié)果
    4.1 環(huán)狀RNA CDR1as在先天性巨結(jié)腸患者病變腸管中的表達(dá)
    4.2 大鼠環(huán)狀RNA CDR1as反式剪接位點序列及CDR1as ShRNA腺病毒載體鑒定結(jié)果
    4.3 不同天數(shù)(E10、E12、E14)大鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞CDR1as的表達(dá).
    4.4 大鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞CDR1as ShRNA腺病毒載體轉(zhuǎn)染結(jié)果及外泌體鑒定結(jié)果
    4.5 CDR1as下調(diào)對大鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞細(xì)胞增殖、凋亡、遷移實驗結(jié)果
    4.6 大鼠腸神經(jīng)嵴(CDR1as敲減)干細(xì)胞來源外泌體對正常神經(jīng)嵴干細(xì)胞增殖、凋亡、遷移實驗結(jié)果
5 討論
6 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3828760